氣相色譜-質譜法測定白芷中異歐前胡素的含量*

陳琴華，熊琳，李鵬，朱軍

(湖北醫藥學院附屬東風醫院藥物分析與篩選研究所，十堰 442008)

氣相色譜-質譜法測定白芷中異歐前胡素的含量*

陳琴華，熊琳，李鵬，朱軍

(湖北醫藥學院附屬東風醫院藥物分析與篩選研究所，十堰 442008)

目的 通過氣相色譜-質譜聯用儀,采用選擇監測離子法測定白芷中異歐前胡素的含量。方法色譜柱DB-5MS(30 m×0.32 mm,0.25 μm)石英毛細管色譜柱,樣品用CO2超臨界流體萃取,萃取液用乙酸乙酯溶解,選擇離子監測法定量。結果異歐前胡素在1.33～133.00 μg·mL-1(r=0.998 6)范圍內線性良好;平均回收率為100.3%,檢測限為0.1 ng·mL-1。結論該方法簡便、快速、靈敏度高、結果準確可靠,可以用于測定白芷中異歐前胡素的含量。

白芷；異歐前胡素；萃取法,流體,超臨界；色譜-質譜,氣相

白芷收載于《中華人民共和國藥典》2010年版一部,來源為傘形科植物白芷[Angelica dahurica(Fisch. ex Hoffm.)Benth.et Hook]的干燥根。白芷為我國傳統中藥,主治頭痛、鼻炎、癬癥等疾病。現代藥理實驗表明白芷中所含的呋喃香豆素具有平喘、降壓、抗菌、解痙、光敏、活化交感系激素等多種藥理作用[1-2]。已有文獻對白芷的化學成分進行了研究,發現白芷中主要含香豆素成分,其中最主要的是氧化前胡素、歐前胡素、異歐前胡素,異歐前胡素為評價白芷提取工藝的控制指標之一。目前對異歐前胡素的測定主要采用高效液相色譜(high performance liquid chromatograph, HPLC)法[3-4],由于異歐前胡素具有一定的揮發性,隨著質譜的發展,氣相色譜-質譜(gas chromatographymass spectrometry,GC-MS)法在中藥揮發性成分的定量測定上應用越來越廣泛[5-6]。筆者使用GC-MS,采用選擇離子檢測模式,對白芷中的異歐前胡素進行定量測定。報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 HA220-50-06超臨界萃取裝置(南通市華安超臨界萃取有限公司)；GC-MS-QP2010型氣相-質譜聯用儀(日本島津公司),工作站GCMSsolution 2.10,DB-5MS(30 m×0.32 mm,0.25 μm)毛細管氣相色譜柱(日本島津公司)；SK-1型快速混勻器(江蘇國華儀器廠)；AS3120超聲儀。

1.2 試藥 異歐前胡素(isoimperatorin,中國食品藥品檢定研究院,規格:20 mg,純度＞98%,批號:110827-200402),供含量測定；白芷藥材(西安市中藥材公司,批號:20080305),經西安交通大學中藥教研室牛曉峰教授鑒定為白芷Angelica dahurica(Fisch.ex Hoffm.) Benth.et Hook.f.的干燥根；高純氦氣(昆山普克萊斯實用氣體有限公司,純度≥99.999%)；乙酸乙酯(分析純,西安化學試劑廠)。

2 方法與結果

2.1 色譜條件 DB-5MS(30 m×0.32 mm,0.25 μm)毛細管氣相色譜柱為分析柱；以高純氦氣為載氣,流速2.0 mL·min-1；進樣口溫度:280℃,進樣方式:不分流進樣,程序升溫:起始溫度140℃,保持2 min,以10℃·min-1速率升溫至280℃,保持4 min,進樣量為1 μL,接口溫度280℃,EI源溫度200℃,電子轟擊能量為70 eV,選擇離子監測(選擇離子為202),采集延時2.5 min。

2.2 溶液的配制 對照品溶液:精密稱取異歐前胡素對照品10.5 mg,置10 mL量瓶中,用乙酸乙酯溶解并稀釋至刻度,作為對照品貯備液。精密吸取1 mL置10 mL量瓶中,用乙酸乙酯稀釋至刻度,作為工作液。供試品溶液:取白芷藥材5.0 kg,粉碎,過篩孔內徑1.00 mm篩,稱取藥粉,置于5 L萃取釜中。待制冷裝置與萃取釜和分離釜加溫裝置正常工作后,打開壓縮泵加壓到8 MPa,溫度為50℃,調整CO2流速至40～45 kg·h-1循環萃取,分離釜Ⅰ的壓強和溫度分別為6 MPa、40℃；分離釜Ⅱ的壓強和溫度分別為5 MPa、40℃,提取3 h后,分取提取物,得白芷超臨界提取物,出油率為1.3%。精密稱取白芷超臨界提取物82.82 mg[5],加入適量乙酸乙酯,超聲10 min,定容至10 mL,作為供試品溶液。

2.3 質譜條件 在上述色譜條件下,異歐前胡素對照品進樣分析,其全離子掃描色譜圖見圖1A,在11.5 min對應的質譜圖見圖1B,經GCMSsolution 2.10軟件里的NIST147檢索,其為異歐前胡素,相似度達98%。從質譜圖可見,其碎片質譜離子有m/z270, 255,215,202,174,145和117。異歐前胡素分子量為270,主要質譜碎片為270(M+),202,174,145,118,89和69,可能的裂解過程為分子離子峰m/z270失去一分子CH3得m/z255碎片離子,而分子離子峰失去C5H8形成基峰離子m/z202,進一步失去CO形成碎片離子m/z174。而從圖1-B可見,m/z202和69峰度較高,考慮樣品中碎片離子的干擾,選擇m/z202作為定量監測離子進行分析。

A.總離子流色譜圖;B.質譜圖圖1 異歐前胡素的GC-MS掃描色譜圖A.total ion current chromatogram；B.mass-spectrogramFig.1 Full scan GC-MS chromatogram of isoimperatorin

在上述色譜條件下,圖2A為異歐前胡素對照品選擇離子代表性GC-MS色譜圖,圖2B為白芷超臨界提取物選擇離子代表性GC-MS色譜圖,從圖2中可以看出,其他雜質對白芷超臨界提取物中異歐前胡素的測定無干擾。

圖2 異歐前胡素對照品選擇離子監測色譜圖(A)和樣品選擇離子監測色譜圖(B)Fig.2 Selectiveionmonitoringchromatogramof isoimperatorin standard(A)and sample(B)

2.4 線性關系考察 配制異歐前胡素的一系列對照品溶液,使異歐前胡素濃度為1.33,3.99,13.30, 39.90,79.80,133.00 μg·mL-1,進樣1 μL,結果以異歐前胡素的質量濃度(μg·mL-1)為橫坐標(X),樣品峰面積為縱坐標(Y),得線性回歸方程為Y=39 348X-3 769(r=0.998 6),表明歐前胡素在1.33～133.00 μg·mL-1范圍內線性關系良好。S/N=3時,測得異歐前胡素的檢測限為0.1 ng·mL-1。

2.5 回收率實驗 精密量取同一樣品適量,共9份,分別加入低、中、高濃度的對照品溶液(異歐前胡素的3個濃度分別為:1.33,13.30,133.00 μg·mL-1)各3份,按供試品溶液的處理方法提取得供試品溶液,進樣測定,按外標法以峰面積計算的回收率分別為99.4%, 100.5%,100.9%,其平均回收率為100.3%,RSD為2.12%。

2.6 精密度、重復性和穩定性實驗 取對照品溶液,連續進樣6次,計算峰面積RSD為2.85%。表明該方法精密度良好。取同一批樣品,共6份,分別制成供試品溶液,進樣測定,計算峰面積的RSD為2.35%。表明該方法重復性良好。取供試品分別于0,1,2,4,6, 8 h進樣測定,計算峰面積RSD為3.02%。說明供試品溶液在8 h內穩定。

2.7 含量測定 按“2.2”項下供試品制備方法制備白芷超臨界提取物,用GC-MS法測定異歐前胡素的含量。在超臨界提取的揮發油中,異歐前胡素含量分別為5.13%,在白芷中異歐前胡素的含量為0.07%,即0.7 μg·g-1。

3 討論

筆者首次用GC-MS選擇離子監測法測定白芷中異歐前胡素的含量,從色譜圖和質譜圖可以看出,異歐前胡素的基峰為m/z202,而且采用m/z202對樣品進行測定,其專屬性較強。因此,筆者在本試驗中只選用了一種監測離子(m/z202)對異歐前胡素進行測定。運用GC-MS選擇離子監測法,靈敏度高,專一性強,相關系數和回收率符合含量的測定要求,且檢測限低(0.1 ng·mL-1),是一種用來測定異歐前胡素的好方法。

超臨界萃取法是近年來發展起來的一種新的提取、純化方法,尤其適用于中草藥的提取精制,而且超臨界提取所得目標物純凈,無需太多處理就可直接進樣,故筆者在本實驗中直接用乙酸乙酯溶解進樣分析。

[1] 楊小花,胡曉.歐前胡素與異歐前胡素的藥理學研究進展[J].南昌大學學報,2012,52(3):95-100.

[2] 張宇潔,張小莉,徐玥.長春七中異歐前胡素的提取方法研究[J].應用化工,2012,41(4):679-684.

[3] 王云龍,楊立志,姜雪敏,等.HPLC測定白芷藥材中歐前胡素與異歐前胡素的含量[J].藥品鑒定,2011,8(18): 74-75.

[4] 王連國,王欣,孟憲杰,等.高效液相色譜法測定白芷中歐前胡素和異歐前胡素含量[J].現代中西醫結合雜志, 2011,20(22):2816-2817.

[5] CHEN Q H,LI P,HE J,et al.Supercritical fluid extraction for identification and determination of volatile metabolites from Angelica dahurica by GC-MS[J].J Sep Sci,2008,31 (8):3218-3224.

[6] 陳琴華,李鵬,張卓,等.氣相色譜-質譜聯用法測定麝香中麝香酮含量[J].醫藥導報,2009,28(5):647-648.

DOI 10.3870/yydb.2014.04.022

GC-MS Assay for the Determination of Isoimperatorin in Angelica dahurica

CHEN Qin-hua,XIONG Lin,LI Peng,ZHU Jun
(Institute of Pharmaceutical Analysis and Drug Screening, the Dongfeng Affiliated Hospital of Hubei University of Medicine,Shiyan 442008,China)

Objective To develop a new method of GC-MS assay for the determination of isoimperatorin inAngelica dahurica.MethodsIsoimperatorin was analyzed quantitatively on the DB-5MS quartz capillary chromatographic column by elective ion monitoring.The sample was extracted by ultrasound in acetic ether.ResultsThere was a good linear relationship in the range of 1.33-133.00 μg·mL-1(r=0.998 6)in isoimperatorin.The average recovery was 100.3%and the detection limit was 0.1 ng·mL-1.ConclusionThe method is convenient,of good sensitivity and accuracy.It can be used to determinate the content of isoimperatorin inAngelica dahurica.

Angelicadahurica;Isoimperatorin;Supercriticalfluidextraction(SFE);Chromatography-mass spectrometry,gas

R282.71;R927.2

A

1004-0781(2014)04-0487-03

2013-06-17

2013-10-25

*湖北省衛生廳青年科技人才基金資助項目(QJX2012-45)；湖北省教育廳科研計劃資助項目(D20132106)

陳琴華(1976-),男,湖北荊門人,副主任藥師,博士,研究方向:藥物分析學。電話:0719-8272348,E-mail：cqh77@163.com。