O/W型微乳對木犀草素增溶作用的研究

趙惠茹，趙陽

(西安醫學院藥學院，陜西西安 710021)

木犀草素是一種天然的黃酮類化合物，具有抗腫瘤、消炎、抗過敏、抗菌、抗病毒等多種生物活性及藥理作用［1-2］，可從多種天然藥材、蔬菜果實中分離得到。但由于木犀草素在水中的溶解度非常低，因此木犀草素的口服制劑存在單次服藥劑量較大、生物利用度低、療效低等缺點，在臨床上沒有被廣泛應用［3］。

微乳由水相、表面活性劑、助表面活性劑和油相組成，粘度低、熱力學穩定且各向同性，外觀呈半透明、透明狀或略帶乳光［4］。其粒徑分布均勻，介于10～100 nm，對難溶性藥物可增加溶解度，使藥物療效增強，提高生物利用度，延長藥物在體內的作用時間，具有緩釋和靶向的作用［5-6］。

本實驗結合現代藥劑學的發展趨勢，以測定木犀草素在不同油相、表面活性劑和助表面活性劑中的溶解度和繪制偽三元相圖的方法篩選微乳處方，將木犀草素制備成O/W型微乳，用紫外法測定其載藥量，考察微乳對木犀草素的增溶作用，為木犀草素相關制劑的研究提供一定的依據。

1 實驗部分

1.1 試劑與儀器

Tween-80、無水乙醇、1，2-丙二醇、油酸、油酸乙酯均為分析純;肉豆蔻酸異丙酯(IPM)、聚氧乙烯氫化蓖麻油(Cremphor RH-40)、泊洛沙姆188均為化學純;木犀草素對照品(西安應化生物技術有限公司，批號為:Lu120723，純度≥98%);液體石蠟、PEG-400、藥用甘油均為藥用級;二次蒸餾水;甲醇，色譜級。

UV-160A型紫外可見分光光度計;85-2型恒溫磁力攪拌器;TGL-16C高速離心機;DK-420S三用恒溫水浴箱;BP211D型電子天平;SK-1快速混勻器。

1.2 實驗方法

1.2.1 空白微乳的制備［7］精密稱取RH-40 24 g，無水乙醇12 g，置于錐形瓶中，加入 IPM 4 g，于25℃恒溫磁力攪拌，緩慢滴加雙蒸水60 g，得到略帶淡藍色乳光外觀透明的微乳液。

1.2.2 木犀草素溶解性能 分別吸取蒸餾水、空白微乳各10 mL，置于50 mL錐形瓶中，各加入過量木犀草素，于恒溫振蕩器上37℃連續振蕩12 h，然后在37℃水浴中平衡24 h使藥物充分溶解。各取適量液體置離心管中，于3 000 r/min離心10 min，取上清液，微孔濾膜過濾。精密吸取續濾液適量，分別置25 mL容量瓶中，用乙醇定容至刻度。于346 nm處測定吸收度，計算溶解度。

1.3 分析方法

1.3.1 最大吸收波長的選擇 精密稱取13.2 mg木犀草素對照品，加無水乙醇溶解并定容至100 mL容量瓶中，配制成質量濃度為132 μg/mL的對照品貯備液，精密吸取此貯備液2.0 mL，用無水乙醇稀釋至10 mL容量瓶中，其濃度為26.4 μg/mL。精密吸取空白微乳與木犀草素微乳各2.0 mL，分別置50 mL容量瓶中，加入乙醇適量，超聲10 min后，用乙醇定容至刻度，搖勻，靜置10 min，過濾。分別取續濾液和對照品溶液適量，以乙醇為空白，在200～800 nm進行掃描。結果微乳樣品中木犀草素與木犀草素對照品在346 nm處均出現最大吸收峰，而空白微乳在此波長無吸收。故最大吸收波長選擇346 nm。

1.3.2 木犀草素標準曲線的制備 分別精密吸取木犀草素對照品貯備液 1.0，2.0，3.0，4.0，5.0 mL置10 mL容量瓶中，加入乙醇適量稀釋至刻度，搖勻，即得質量濃度分別為 13.2，26.4，39.6，52.8，66 μg/mL的木犀草素系列對照品溶液，以乙醇為空白，在346 nm測定吸光度。以木犀草素對照品濃度為橫坐標，相應的吸光度為縱坐標進行線性回歸，得木犀草素標準曲線方程:A=8.513C+0.020 9(r=0.997)。結果表明，木犀草素在 13.2 ～ 66 μg/mL范圍內線性關系良好。

1.3.3 精密度 取同一供試品溶液，按上述實驗條件測定吸光度，平行測定6次，計算相對標準偏差RSD=0.92%。可見該法測定木犀草素含量的精密度良好。

1.3.4 回收率 精密吸取空白微乳9份各1.0 mL，分別置25 mL容量瓶中，精密加入木犀草素對照品溶液適量，再加入乙醇稀釋至刻度，搖勻，制備成高、中、低3種不同濃度的供試品溶液，按上述實驗條件測定吸光度，計算回收率，結果見表1。

表1 回收率實驗結果(n=9)Table 1 Results of recovery test

2 結果與討論

2.1 在不同油相、表面活性劑(SF)和助表面活性劑(CoSF)中木犀草素的溶解度［7］

本研究的油相選擇液體石蠟、油酸、IPM和油酸乙酯，表面活性劑選擇 RH-40、泊洛沙姆188和Tween-80，助表面活性劑選擇甘油、1，2-丙二醇、無水乙醇、PEG-400和正丁醇。各取上述油相、表面活性劑和助表面活性劑3 mL置具塞離心管中，分別加入過量的木犀草素對照品，在37℃恒溫水浴中振搖12 h后，繼續平衡 24 h，3 000 r/min離心 10 min。吸取上清液適量，用無水乙醇稀釋后測定吸光度，代入木犀草素標準曲線方程，計算木犀草素在各種溶劑中的溶解度，結果見表2～表4。

表2 各種不同油相中木犀草素的溶解度(n=3)Table 2 Solubilities of luteolin in all kinds of different oils

表3 各種不同表面活性劑中木犀草素的溶解度(n=3)Table 3 Solubilities of luteolin in all kinds of different surfactants

表4 各種不同助表面活性劑中木犀草素的溶解度(n=3)Table 4 Solubilities of luteolin in all kinds of different co-surfactants

由表2～表4可知，在4種油相中，木犀草素在IPM中溶解度最大;在3種表面活性劑中，RH-40中的溶解度相比Tween-80和泊洛沙姆188較大;在無水乙醇中溶解度大于其余4種助表面活性劑。故本實驗選取IPM為油相，RH-40為表面活性劑，無水乙醇為助表面活性劑。

2.2 表面活性劑與助表面活性劑質量之比(Km)的確定

以IPM為油相，RH-40為表面活性劑，無水乙醇為助表面活性劑，在表面活性劑與助表面活性劑質量之比(Km)分別為 3∶1，2∶1，1∶1，1∶2 時，將油相與混合表面活性劑(由表面活性劑和助表面活性劑按一定比例組成)分別按照質量比 1∶9，2∶8，3∶7，4∶6，5∶5，6∶4，7∶3，8∶2，9∶1 進行混合，向混合液中緩慢滴加蒸餾水，同時不斷振搖使各組分充分混勻，觀察溶液變化，在即將渾濁的臨界點時，微乳體系發生相轉變，記錄此時各組分和水的用量。以一定質量的RH-40和無水乙醇組成的混合表面活性劑作為相圖的一個頂點，IPM作為油相頂點，水作為水相頂點，繪制該系統在不同Km值時的偽三元相圖［7-9］。以相圖中微乳區域的面積大小(即曲線的左邊區域)為考察指標，結果見圖1。

圖1 微乳體系在不同Km下的偽三元相圖Fig.1 Pseudoternary phase diagrams of microemulsion system at different Km values

由圖1可知，當Km=2∶1時，微乳區域最大，外觀透明，且具有藍色乳光。因此，在制備微乳時，選擇表面活性劑RH-40與助表面活性劑無水乙醇的質量之比為2∶1。

2.3 木犀草素分別在微乳和水中的溶解性能

按照1.2節方法重復制備3批空白微乳(批號分別為 20130509，20130510，20130512)，分別測定木犀草素在其中的溶解度，與水中溶解度進行比較，結果見表5。

由表5可知，木犀草素在微乳中的溶解度比水中有明顯的增大，分別為30.71 mg/mL 和 54.7 μg/mL，說明此O/W型微乳對木犀草素有明顯的增溶作用。原因可能是由于在微乳形成時油相增溶到烴核內部，不僅增大了內核體積，且油相對藥物溶解度較好，而且微乳體系在油-水界面有大量表面活性劑和助表面活性劑混合物吸附，界面易于彎曲，具有高度的柔性，從而極大提高了藥物在微乳中的溶解度［10-12］。

表5 木犀草素在微乳和水中的溶解度(n=3)Table 5 Solubilities of luteolin in microemulsion and water

3 結論

制備了由肉豆蔻酸異丙酯-聚氧乙烯氫化蓖麻油-無水乙醇-水組成的O/W型微乳體系，考察了微乳對木犀草素的增溶作用。研究表明，木犀草素在微乳中的溶解度是水中的561倍，說明此微乳體系對木犀草素有明顯的增溶作用。

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