清肝瀉心湯聯(lián)合甲巰咪唑?qū)谞钕俟δ芸哼M(jìn)大鼠激素水平的影響

馬國平,葉少玲,王瓊,朱萱萱

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥學(xué)部,南京 210029；2.南京中醫(yī)藥大學(xué),南京 210029)

清肝瀉心湯聯(lián)合甲巰咪唑?qū)谞钕俟δ芸哼M(jìn)大鼠激素水平的影響

馬國平1,葉少玲2,王瓊1,朱萱萱1

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院藥學(xué)部,南京 210029；2.南京中醫(yī)藥大學(xué),南京 210029)

目的 觀察清肝瀉心湯聯(lián)合甲巰咪唑?qū)谞钕俟δ芸哼M(jìn)(甲亢)模型大鼠激素水平的影響。方法給大鼠灌胃左甲狀腺素鈉600μg·kg-1,連續(xù)3周,制造甲亢模型,觀察清肝瀉心湯和甲巰咪唑?qū)ζ溲迦饧谞钕偎卦彼?T3)、游離三碘甲狀腺素原氨酸(FT3)、四碘甲狀腺素原氨酸(T4)、游離四碘甲狀腺素原氨酸(FT4)、促甲狀腺素(TSH)和促甲狀腺素受體抗體(TRAb)含量的影響。結(jié)果清肝瀉心湯、甲巰咪唑及二者聯(lián)合應(yīng)用均能明顯降低甲亢模型大鼠異常增高的進(jìn)食量、飲水量和體溫,降低FT3、FT4和T4水平;二者聯(lián)合應(yīng)用對T4的降低作用更顯著(P＜0.01),但對TRAb水平?jīng)]有明顯影響(P＞0.05)。結(jié)論清肝瀉心湯聯(lián)合應(yīng)用甲巰咪唑?qū)卓耗Ｐ痛笫蠹谞钕俟δ芫哂辛己玫母纳谱饔谩?/p>

清肝瀉心湯;甲巰咪唑;甲狀腺功能亢進(jìn);甲狀腺激素

甲狀腺功能亢進(jìn)(甲亢)是由多種原因引起的甲狀腺激素分泌過多所致的一種常見內(nèi)分泌疾病,屬中醫(yī)學(xué)“癭病”范疇。清肝瀉心湯是江蘇省中醫(yī)院中醫(yī)外科專家許芝銀教授集數(shù)十年臨床經(jīng)驗(yàn)總結(jié)出的治療甲亢心肝火旺證的經(jīng)驗(yàn)用方,臨床上配合甲巰咪唑片治療。筆者在本實(shí)驗(yàn)中采用左甲狀腺素鈉建立實(shí)驗(yàn)性大鼠甲亢模型的基礎(chǔ)上,觀察清肝瀉心湯與甲巰咪唑聯(lián)合應(yīng)用對甲亢模型大鼠對甲狀腺激素和促甲狀腺素受體抗體(thyrotrophin receptor antibody,TRAb)水平的影響,為該經(jīng)驗(yàn)方的臨床推廣應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物和飼料 雄性SD大鼠,體質(zhì)量180～220 g,由上海斯萊克實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司提供,合格證號: SCXK(滬)2008-0016。全價(jià)營養(yǎng)顆粒飼料:由江蘇省協(xié)同醫(yī)藥生物技術(shù)有限公司提供。

1.2 藥物及試劑 清肝瀉心湯:由江蘇省中醫(yī)院制劑部提供,批號:120603；甲巰咪唑片:上海黃海制藥有限責(zé)任公司,批號:111003,左甲狀腺素鈉:德國Merck KGaA公司,批號:141249。血清三碘甲狀腺素原氨酸(three iodine thyroxine,T3)、游離三碘甲狀腺素原氨酸(free three iodine thyroxine,FT3)、四碘甲狀腺素原氨酸(four iodine thyroxine,T4)、游離四碘甲狀腺素原氨酸(free four iodine thyroxine,FT4)、促甲狀腺素(thyroidstimulating hormone,TSH)放射免疫測定試劑盒:北京華英生物技術(shù)研究所,批號:20120902；大鼠TRAb試劑盒,美國R&D公司,批號:20120822。

1.3 實(shí)驗(yàn)條件 室溫(22±2)℃,相對濕度55%～65%,光照適度,通風(fēng)潔凈良好。

1.4 實(shí)驗(yàn)儀器 r-911全自動(dòng)放射免疫計(jì)數(shù)儀:中國科技大學(xué)實(shí)業(yè)總公司,FA1004型電子分析天平:上海精科天平廠。TECAN酶標(biāo)分析儀:奧地利Sunrise公司。

1.6 甲亢大鼠模型的建立 取健康大鼠(正常組除外)每天灌胃給予左甲狀腺素鈉(600μg·kg-1),連續(xù)造模3周[1-2]；各組造模大鼠每周記錄基礎(chǔ)代謝情況(體質(zhì)量、肛溫、進(jìn)食量和飲水量)；隨機(jī)取正常組和模型組大鼠各10只,分離血清,檢測血清FT3、FT4、TSH水平,用于評價(jià)模型大鼠甲狀腺功能的變化情況。

1.7 清肝瀉心湯對甲亢模型大鼠甲狀腺功能的影響 造模大鼠40只,隨機(jī)分4組,每組10只。模型組給予等量0.9%氯化鈉溶液；清肝瀉心湯組給予清肝瀉心湯生藥20 g·kg-1；甲巰咪唑組給予甲巰咪唑10 mg·kg-1；聯(lián)合組同時(shí)給予清肝瀉心湯(相當(dāng)于生藥20 g·kg-1),甲巰咪唑10 mg·kg-1；正常組給予等量0.9%氯化鈉溶液。治療3周(第4～6周),于實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí),取血分離血清,檢測血清T3、T4、FT3、FT4、TSH水平[3]。觀察清肝瀉心湯對甲亢模型大鼠甲狀腺功能的影響。

2 結(jié)果

2.1 5組大鼠體質(zhì)量、體溫和飲水量的變化 結(jié)果見表1～3。正常組大鼠精神狀況、活動(dòng)情況、毛色光澤均未見異常,體質(zhì)量增加、體溫、飲水量和進(jìn)食量均正常；模型組大鼠于造模期間大部分出現(xiàn)活動(dòng)頻繁,易激怒,好斗,毛須豎起,體質(zhì)量增加緩慢,體溫升高,飲水量均增多,與正常組大鼠比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01或P＜0.05)。

采用清肝瀉心湯、甲巰咪唑、清肝瀉心湯聯(lián)合甲巰咪唑干預(yù)后大鼠易怒好斗行為緩解,體溫下降,飲水量減少。提示清肝瀉心湯、甲巰咪唑、清肝瀉心湯聯(lián)合甲巰咪唑可改善大鼠甲亢進(jìn)體征。

2.2 5組大鼠甲狀腺功能比較 見表4。

結(jié)果表明,甲亢模型大鼠血清FT3、FT4、T4顯著高于正常組大鼠(P＜0.01)；清肝瀉心湯組和聯(lián)合組大鼠給予相應(yīng)藥物治療后,甲亢模型大鼠血清FT3、FT4和T4水平顯著降低(P＜0.01)。

2.3 5組大鼠血清TRAb比較 聯(lián)合組、清肝瀉心湯組、甲巰咪唑組、模型組、正常組大鼠血清TRAb分別為(16.84±7.78),(19.25±9.97),(19.04±7.74), (17.42±6.98),(14.96±11.43)ng·mL-1。結(jié)果表明,甲亢模型大鼠血清TRAb水平與正常組比較無明顯改變；各給藥組大鼠血清TRAb水平與模型組比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

表1 5組大鼠不同時(shí)間體質(zhì)量的變化Tab.1 Changes of body w eight of five groups of rats at different time point g,

表1 5組大鼠不同時(shí)間體質(zhì)量的變化Tab.1 Changes of body w eight of five groups of rats at different time point g,

與正常組比較,*1P＜0.01,*3P＜0.05;與模型組比較,*2P＜0.01Compared with the normal group,*1P＜0.01,*3P＜0.05;compared with the model group,*2P＜0.01

組別大鼠/只實(shí)驗(yàn)前實(shí)驗(yàn)第1周實(shí)驗(yàn)第2周實(shí)驗(yàn)第3周實(shí)驗(yàn)第4周實(shí)驗(yàn)第5周實(shí)驗(yàn)第6周正常組10 177.0±3.5 200.5±6.0 225.0±8.5 265.5±11.2293.9±30.1 308.0±34.9 329.4±52.5模型組10 177.3±2.6 189.1±6.6*1187.7±7.9*1206.8±16.9*1230.6±14.7*1211.7±11.7*1249.4±17.2*1甲巰咪唑組10 176.8±3.4 199.6±4.7 200.5±8.2*1219.6±17.1*1236.0±25.9 231.0±29.2 270.0±23.0*2清肝瀉心湯組10 177.7±2.6 191.8±8.7*3191.5±6.3*1205.0±11.0*1226.0±28.8 229.0±23.9 237.5±38.8聯(lián)合組10 178.6±3.9 194.1±4.4*3193.2±6.8*1198.6±13.4*1226.5±36.6 229.5±37.3 245.5±23.6

表2 5組大鼠不同時(shí)間體溫的變化Tab.2 Changes of body tem perature of five groups of rats at d ifferent time point ℃,

表2 5組大鼠不同時(shí)間體溫的變化Tab.2 Changes of body tem perature of five groups of rats at d ifferent time point ℃,

與正常組比較,*1P＜0.01;與模型組比較,*2P＜0.05Compared with the normal group,*1P＜0.01;compared with the model group,*2P＜0.05

組別大鼠/只實(shí)驗(yàn)第1周實(shí)驗(yàn)第2周實(shí)驗(yàn)第3周實(shí)驗(yàn)第4周實(shí)驗(yàn)第5周實(shí)驗(yàn)第6周正常組10 36.32±0.52 36.32±0.45 36.43±0.33 37.46±0.54 36.42±0.59 37.13±0.49模型組10 36.47±0.55 38.36±0.76*137.55±0.84*138.09±0.25*138.18±0.75*138.63±0.44*1甲巰咪唑組10 36.52±0.56 38.32±0.64*137.60±1.00*138.02±0.30 37.48±0.51*238.24±0.32*2清肝瀉心湯組10 36.48±0.63 37.77±0.52*137.70±0.81*137.77±0.24*237.46±0.64*238.13±0.58*2聯(lián)合組10 36.55±0.58 37.63±0.56*137.53±0.84*137.92±0.20 37.98±0.45 38.11±0.55*2

表3 5組大鼠不同時(shí)間飲水量的變化Tab.3 Changes of water intake of five groups of rats at different time point mL,

表3 5組大鼠不同時(shí)間飲水量的變化Tab.3 Changes of water intake of five groups of rats at different time point mL,

與正常組比較,*1P＜0.05,*2P＜0.01;與模型組比較,*3P＜0.05Compared with the normal group,*1P＜0.05,*2P＜0.01;compared with the model group,*3P＜0.05

組別大鼠/只實(shí)驗(yàn)前實(shí)驗(yàn)第1周實(shí)驗(yàn)第2周實(shí)驗(yàn)第3周實(shí)驗(yàn)第4周實(shí)驗(yàn)第5周實(shí)驗(yàn)第6周正常組10 37.01±0.70 28.44±2.42 24.45±0.78 22.60±1.13 11.68±0.46 13.08±0.66 11.24±0.50模型組10 35.23±5.79 42.88±1.56*137.69±2.97*137.26±3.39*120.82±1.66*125.50±0.54*230.51±2.82*1甲巰咪唑組10 33.08±2.76 43.08±4.12*141.94±3.69*135.28±2.20*118.22±0.49 29.42±1.73 21.29±0.53*3清肝瀉心湯組10 32.44±3.38 42.36±2.61*137.83±2.19*134.16±0.18*216.45±1.90 28.05±3.03 21.29±0.48*3聯(lián)合組10 34.77±2.69 48.49±3.97*141.05±1.73*243.33±6.66*123.53±3.50 28.84±2.48 21.58±0.42*3

表4 5組大鼠的甲狀腺功能比較Tab.4 Comparison of thyroid function among five groups of rats

表4 5組大鼠的甲狀腺功能比較Tab.4 Comparison of thyroid function among five groups of rats

與正常組比較,*1P＜0.01;與模型組比較,*2P＜0.01;與清肝瀉心湯組和甲巰咪唑組比較,*3P＜0.01Compared with the normal group,*1P＜0.01;compared with the model group,*2P＜0.01;compared with clearing liver and purging the heart decoction group and methimazole group,*3P＜0.01

組別大鼠/只FT3FT4(pg·mL-1) TSH/ (μU·mL-1) T3T4(ng·mL-1)正常組10 0.69±0.46 5.01±2.48 3.59±1.81 0.84±0.18 36.55±12.63模型組10 2.00±0.71*114.47±2.46*12.91±1.10 1.92±1.40 106.02±20.58*1甲巰咪唑組10 0.14±0.05*11.27±0.22*22.53±1.32 1.09±0.44 14.53±4.70*2清肝瀉心湯組10 0.23±0.13*22.17±1.37*23.57±0.94 0.84±0.56 19.20±5.26*2聯(lián)合組10 0.24±0.16*21.73±0.96*22.81±1.45 1.01±0.48 11.53±4.58*2*3

3 討論

甲亢是指甲狀腺處于持續(xù)高功能狀態(tài),合成和釋放過多的甲狀腺素,促進(jìn)物質(zhì)代謝而形成的以高代謝為主癥的臨床綜合征。一般認(rèn)為本病是以遺傳易感為背景,在感染、精神創(chuàng)傷等因素作用下,誘發(fā)體液免疫和細(xì)胞免疫功能紊亂。目前,對該病的治療方法包括:抗甲狀腺藥物治療、手術(shù)治療及131碘治療等3種,但均存在一定的不足。中醫(yī)認(rèn)為,甲狀腺疾病多因情志內(nèi)傷,肝氣郁結(jié),或肝郁化火而引發(fā)。其發(fā)病機(jī)制與機(jī)體生理功能失調(diào)及體質(zhì)因素等有一定關(guān)系,本病初起多實(shí),病久則由實(shí)轉(zhuǎn)虛或虛實(shí)夾雜。本虛者以氣虛、陰虛為主,標(biāo)實(shí)者多為肝郁火熾、痰凝血瘀。甲亢的病理變化是以氣為先,即由氣滯、痰凝、血瘀、肝火直到陰虛,這一病理變化涉及肝、心、腎、脾等臟器,所以在治療上應(yīng)注重柔肝理氣,健脾養(yǎng)血,調(diào)整臟腑功能,從而恢復(fù)機(jī)體的免疫功能,這樣才能鞏固療效,標(biāo)本兼治。

左甲狀腺素鈉為人工合成藥物,其生化、生理性能與甲狀腺分泌與內(nèi)源性T4相同,可在外周轉(zhuǎn)換為T3,然后與細(xì)胞核內(nèi)的T3受體結(jié)合發(fā)揮其生理功能[4-5]。筆者采用左甲狀腺素鈉灌胃法成功建立甲亢大鼠模型,其合適劑量為600μg·kg-1,連續(xù)3周；維持劑量為300μg·kg-1,連續(xù)3周。研究表明,甲亢大鼠出現(xiàn)明顯的多飲、多食、體溫升高等。清肝瀉心湯能明顯降低甲亢模型大鼠異常增高的進(jìn)食量、飲水量和體溫,降低甲亢模型大鼠體內(nèi)FT3、FT4和T4水平,說明清肝瀉心湯對外源性甲狀腺素的分解代謝或阻斷其吸收可能具有一定的作用,具有對抗甲狀腺素所致的實(shí)驗(yàn)性甲亢的作用。

TRAb是一類多克隆抗體,是具有異質(zhì)性的特異性免疫球蛋白,由甲狀腺B淋巴細(xì)胞產(chǎn)生。TRAb主要有兩類,一類為甲狀腺刺激性抗體,具有類似TSH的作用,可直接與甲狀腺細(xì)胞膜上的TSH受體結(jié)合；另一類即甲狀腺刺激阻斷型抗體,它與甲狀腺細(xì)胞膜上的TSH受體結(jié)合,從而阻斷TSH與受體的結(jié)合。Graves病是一種甲狀腺激素分泌增多的器官特異性自身免疫病。臨床患者的TRAb大多呈現(xiàn)陽性表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,給予清肝瀉心湯和聯(lián)合應(yīng)用甲巰咪唑干預(yù)后TRAb的陽性率與模型組比較未見明顯差異,這可能與甲狀腺素所致的實(shí)驗(yàn)性甲亢與器官特異性自身免疫Graves病病因不同有關(guān)。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,甲巰咪唑、清肝瀉心湯和二者聯(lián)合應(yīng)用均能明顯降低甲亢模型大鼠異常增高的進(jìn)食量、飲水量和體溫,降低甲亢模型大鼠體內(nèi)FT3、FT4和T4水平,清肝瀉心湯聯(lián)合甲巰咪唑效果更顯著(P＜0.01),表明中西藥聯(lián)合應(yīng)用在臨床治療甲亢具有一定的優(yōu)勢。

[1] 葉麗芳,王旭.甲亢康顆粒對甲亢大鼠功能及組織形態(tài)學(xué)影響[J].南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2011,27(5):478-480.

[2] 胡方林,劉仙菊,易法銀,等.甲亢方對實(shí)驗(yàn)性甲亢大鼠垂體、胸腺和脾臟病理改變的影響[J].中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2010, 16(4):81-83.

[3] 胡方林,劉仙菊,易法銀,等.內(nèi)外合治對甲亢模型大鼠甲狀腺激素及甲狀腺病理改變的影響[J].中華中醫(yī)藥學(xué)刊,2009,27(3):543-545.

[4] 張子泰,侯英萍,汪靜,等.用左旋T4建立大鼠甲狀腺功能亢進(jìn)模型的實(shí)驗(yàn)研究[J].西北國防醫(yī)學(xué)雜志,2004,27 (1):34-36.

[5] 鄒宏偉,郭曉明.抑甲亢方對甲亢模型大鼠T3、T4水平的影響[J].實(shí)用中醫(yī)內(nèi)科雜志,2011,25(4):23-24.

DOI 10.3870/yydb.2014.05.003

Effects of Clearing Liver and Purging the Heart Decoction Combined with Methimazole on Hormone Levels in Hyperthyroid Rats

MA Guo-ping1,YE Shao-ling2,WANG Qiong1,ZHU Xuan-xuan1
(1.Department of Pharmacy,Affiliated Hospital of Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing 210029,China;2.Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing 210029,China)

ObjectiveTo investigate the effects of clearing liver and purging the heart decoction(CLPHD)combined with methimazole on hormone levels in hyperthyroid rats.MethodsRats were administered with levothyroxine (600μg·kg-1)for 3 weeks to establish the hyperthyroid model,and the serum contents of T3,FT3,T4,FT4,TSH and TRAb in hyperthyroid rats treated with CLPHD combined with methimazole were detected.ResultsMethimazole,CLPHD,and the combination therapy significantly reduced food intake,water intake and body temperature of the hyperthyroid rats.All treatments reduced levels of FT3,T4and FT4in hyperthyroid rats.Compared with the CLPHD mono-therapy,the combination therapy significantly lowered serum T4in hyperthyroid rats,but not the TRAb level.ConclusionCLPHD combined withmethimazole can obviously improve the function of thyroid gland in hyperthyroid rats.

Clearing liver and purging the heart decoction;Methimazole;Hyperthyroidism;Thyroid hormone

R286;R977.14

A

1004-0781(2014)05-0561-04

2013-06-19

2013-09-06

馬國平(1977-),男,江蘇高淳人,主管藥師,學(xué)士,主要從事中藥藥理研究。電話:(0)13813931039,E-mail:daniewhd1984@yahoo.com.cn。

朱萱萱(1952-),女,江蘇南京人,教授,博士生導(dǎo)師,主要從事藥理學(xué)研究。電話:025-86555797,E-mail:zhuxuanxuan@sina.com。