高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方西羚解毒丸中4種成分的含量

魏譚軍,陳曉東

(1.四川省達(dá)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院,達(dá)州 635000;2.江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,南昌 330004)

高效液相色譜法測(cè)定復(fù)方西羚解毒丸中4種成分的含量

魏譚軍1,陳曉東2

(1.四川省達(dá)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院,達(dá)州 635000;2.江西中醫(yī)藥大學(xué)藥學(xué)院,南昌 330004)

目的 采用高效液相梯度洗脫法建立復(fù)方西羚解毒丸中牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷和連翹酯苷A含量測(cè)定方法。方法Hypersil C18色譜柱(4.6 mm×200 mm,5μm);體積流量:0.9 mL·min-1;流動(dòng)相A為甲醇-乙腈(2∶1),流動(dòng)相B為0.2%磷酸溶液梯度洗脫;檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm。結(jié)果牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷和連翹酯苷A分別在0.302 6～6.052 0μg(r=0.999 4),0.069 2～1.384 0μg(r=0.999 7),0.014 2～0.284 0μg(r=0.999 1),0.031 4～0.628 0μg(r=0.999 2)范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積呈良好的線性關(guān)系,平均加樣回收率分別為98.25%,97.91%,97.67%, 96.69%,RSD(n=6)分別為0.84%,1.39%,1.32%,0.57%。結(jié)論該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、靈敏、重復(fù)性好,可作為復(fù)方西羚解毒丸中牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷和連翹酯苷A的含量控制方法。

西羚解毒丸,復(fù)方;牛蒡子苷;牛蒡子苷元;連翹苷;連翹酯苷A

復(fù)方西羚解毒丸為中藥復(fù)方制劑,處方源于衛(wèi)生部藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十四冊(cè),由牛蒡子(炒)、連翹、金銀花、桔梗、荊芥穗、甘草、淡竹葉、薄荷、淡豆豉、羚羊角、水牛角濃縮粉、冰片十二味藥物組成。具有解表清熱之功效,可用于感冒發(fā)熱,頭痛咳嗽,咽喉腫痛等癥的治療[1]。原部頒標(biāo)準(zhǔn)未對(duì)方中的任何藥物進(jìn)行定性鑒別或定量測(cè)定,不能有效地保證產(chǎn)品的質(zhì)量和療效。筆者采用高效液相梯度洗脫法對(duì)牛蒡子和連翹中的牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷以及連翹酯苷A進(jìn)行含量測(cè)定方法研究,為完善該制劑質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)提供依據(jù)。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Agilent1200高效液相色譜儀;G1322A脫氣機(jī)、G1329A自動(dòng)進(jìn)樣器、G1311A四元泵、Chemstation色譜工作站;G1315B可變波長(zhǎng)檢測(cè)器。

1.2 試藥 牛蒡子苷元對(duì)照品(批號(hào):7770-78-7,純度:98.0%)購于寶雞市辰光生物科技有限公司;牛蒡子苷對(duì)照品(批號(hào):110819-201309,純度:95.7%)、連翹苷對(duì)照品(批號(hào):110821-201213,純度:95.3%)、連翹酯苷A對(duì)照品(批號(hào):111810-201304,純度:94.3%)均購于中國食品藥品檢定研究院;復(fù)方西羚解毒丸(規(guī)格:每丸6 g,批號(hào):131017,131019,131021)購于山東健民藥業(yè)有限公司;磷酸(廣州化學(xué)試劑二廠,分析純);甲醇(天津市康科德科技有限公司,色譜純);乙腈(安徽時(shí)聯(lián)特種溶劑股份有限公司,色譜純)。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 Hypersil C18色譜柱(4.6 mm× 200 mm,5μm);體積流量:0.9 mL·min-1;流動(dòng)相A為甲醇-乙腈(2∶1),流動(dòng)相B為0.2%磷酸溶液[2-4],梯度洗脫(0～11 min,45.0%A;～27 min,45.0%→25.0%A;～50 min,25.0%A);檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm[5-7]。此系統(tǒng)條件下所測(cè)組分與其他組分分離效果良好,理論板數(shù)按牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷和連翹酯苷A計(jì)均不得低于3 000,分離度均＞2[2-7]。

2.2 混合對(duì)照品溶液的制備 取牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷和連翹酯苷A對(duì)照品各適量,精密稱定,加80%甲醇制成混合對(duì)照品溶液(牛蒡子苷為0.302 6 mg·mL-1,牛蒡子苷元為0.069 2 mg·mL-1,連翹苷為0.014 2 mg·mL-1,連翹酯苷A為0.031 4 mg·mL-1)。

2.3 供試品溶液的配制 取本品適量,剪碎,取約6.0 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,精密加入80%甲醇50 mL,密塞,稱定質(zhì)量,超聲處理(300 W,40 kHz) 40 min,再稱定質(zhì)量,用80%甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量,搖勻,過濾,取續(xù)濾液即得供試品溶液。

2.4 陰性對(duì)照實(shí)驗(yàn) 按復(fù)方西羚解毒丸處方比例稱取除牛蒡子和連翹的其余藥味,按復(fù)方西羚解毒丸的生產(chǎn)工藝分別制成缺牛蒡子和連翹的陰性樣品,按照上述供試品溶液的配制方法制成缺牛蒡子和連翹的陰性對(duì)照溶液。分別精密吸取供試品溶液、混合對(duì)照品溶液、缺牛蒡子和連翹的陰性對(duì)照溶液10μL,按上述方法測(cè)定,結(jié)果為:在與牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷和連翹酯苷A對(duì)照品色譜圖相應(yīng)的保留時(shí)間處,供試品溶液色譜圖中有吸收峰,而陰性對(duì)照色譜圖中未顯吸收峰。見圖1。

2.5 線性關(guān)系考察 精密吸取混合對(duì)照品溶液0.5, 1.0,2.0,5.0,10.0 mL,分別置于10 mL量瓶中,用80%甲醇稀釋至刻度,搖勻,分別精密吸取20μL,注入色譜儀中,按“2.1”項(xiàng)下所述色譜條件進(jìn)行測(cè)定,以峰面積(Y)為縱坐標(biāo)與進(jìn)樣量(X)為橫坐標(biāo),得回歸方程為:牛蒡子苷 Y = 2. 372 8× 106X - 322. 7, r =0. 999 4;牛蒡子苷元Y = 2. 621 4×106X -269. 1,r =0. 999 7;連翹苷Y = 1. 658 2× 106X + 252. 3, r =0. 999 1;連翹酯苷A Y = 2. 024 4×106X -125. 2,r =0. 999 2。牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷和連翹酯苷A依次在0.302 6～6.052 0μg,0.069 2～1.384 0μg, 0.014 2～0.284 0μg,0.031 4～0.628 0μg范圍內(nèi)進(jìn)樣量與峰面積線性關(guān)系良好。

2.6 精密度實(shí)驗(yàn) 取“2.2”項(xiàng)下的混合對(duì)照品溶液,按“2.1”項(xiàng)色譜條件重復(fù)進(jìn)樣6次,測(cè)定,記錄牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷和連翹酯苷A的峰面積,RSD分別為0.42%(牛蒡子苷),0.61%(牛蒡子苷元), 0.72%(連翹苷)和0.88%(連翹酯苷A)。結(jié)果表明,儀器具有良好精密度。

2.7 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 稱取同一批樣品6份,按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液制備方法制備6份供試品溶液,依法進(jìn)樣測(cè)定,計(jì)算含量,求得牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷和連翹酯苷A的RSD依次為0.37%,0.51%,0.69%, 0.77%。結(jié)果表明,本法測(cè)定重復(fù)性良好。

2.8 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 精密吸取同一供試品溶液,在室溫下放置0,2,4,8,12,24 h后,每次進(jìn)樣10μL,測(cè)定其峰面積值,求得牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷和連翹酯苷A的RSD依次為0.25%,0.62%,0.82%, 0.75%。結(jié)果表明,供試品溶液24 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.9 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 取已知含量的同一批復(fù)方西羚解毒丸(牛蒡子苷為2.52 mg·g-1,牛蒡子苷元為0.58 mg·g-1,連翹苷為0.12 mg·g-1,連翹酯苷A為0.26 mg·g-1)適量,剪碎,取約3.0 g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,分別精密加入混合對(duì)照品溶液25 mL, 80%甲醇25 mL,按“2.3”項(xiàng)下供試品溶液的配制方法制備加樣供試品試液。按正文方法進(jìn)樣測(cè)定,計(jì)算4種組分回收率,結(jié)果見表1。

圖1 牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷和連翹酯苷A的高效液相色譜圖

表1 復(fù)方西羚解毒丸中4種成分的加樣回收率

續(xù)表1

2.10 樣品測(cè)定 取3個(gè)批號(hào)的樣品,按“2.3”項(xiàng)下供試品制備方法,按“2.1”項(xiàng)下色譜條件測(cè)定本品中牛蒡子苷、牛蒡子苷元、連翹苷和連翹酯苷A含量,結(jié)果見表2。牛蒡子苷元不得低于2.8 mg;含連翹苷不得低于0.60 mg,含連翹酯苷A不得低于1.2 mg。

表2 3批復(fù)方西羚解毒丸中每丸4種成分含量測(cè)定結(jié)果 mg,±s,n=3

表2 3批復(fù)方西羚解毒丸中每丸4種成分含量測(cè)定結(jié)果 mg,±s,n=3

批號(hào)牛蒡子苷牛蒡子苷元連翹苷連翹酯苷A 131017 15.12±0.14 3.48±0.04 0.72±0.01 1.56±0.02 131019 14.65±0.13 3.24±0.03 0.68±0.01 1.49±0.02 131021 16.34±0.14 3.77±0.02 0.81±0.02 1.63±0.03 mg,

3 討論

3.1 供試品溶液提取時(shí)間的選擇 筆者在實(shí)驗(yàn)過程中曾對(duì)提取時(shí)間分別以超聲(300 W,40 kHz)處理30, 40,50 min進(jìn)行考察,結(jié)果40,50 min結(jié)果相差不大,而提取30min時(shí)含量明顯低于40,50min,因此供試品制備的提取時(shí)間定為40 min。

3.2 含量限度的確定 根據(jù)測(cè)定的各組分含量的平均值,暫定本品每丸含牛蒡子苷不得低于12.0 mg,含

[1] 國家藥典委員會(huì).國家藥品標(biāo)準(zhǔn)中藥成方制劑第十四冊(cè)[M].北京:人民衛(wèi)生出版社,1998:118.

[2] 付云飛,李清,畢開順.RP-HPLC法同時(shí)測(cè)定不同產(chǎn)地連翹中的7種成分[J].中草藥,2013,44(8):1043-1046.

[3] 王進(jìn)明,范圣此,李安平,等.連翹不同部位中連翹苷和連翹酯苷A的含量分析及其入藥探討[J].中國現(xiàn)代中藥, 2013,15(7):556-559.

[4] 楊棣華,黃蘭,鄭顯輝.不同產(chǎn)地連翹葉中連翹苷和連翹酯苷A的含量測(cè)定[J].臨床醫(yī)學(xué)工程,2013,20(3): 288-289.

[5] 蔡穎.HPLC法測(cè)定小兒肺熱咳喘口服液中連翹苷和連翹酯苷A的含量[J].齊魯藥事,2012,31(6):333-334, 350.

[6] 國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典(一部)[M].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2010:66-67,159-160,附錄30,附錄36.

[7] 李艷麗,許亮,楊燕云,等.不同采收期及部位牛蒡草中3種有效成分的測(cè)定[J].中成藥,2013,35(6):1266-1269.

DOI 10.3870/yydb.2014.12.026

R286;R927.2

B

1004-0781(2014)12-1636-03

2014-01-13

2014-03-02

魏譚軍(1984-),男,甘肅白銀人,中藥師,碩士,主要從事醫(yī)院制劑的研發(fā)。電話:0818-2288358,E-mail: 404477285@qq.com。

陳曉東(1963-),男,江西南昌人,副教授,碩士生導(dǎo)師,主要從事新藥的設(shè)計(jì)與開發(fā)。電話:0791-87105505, E-mail:chenxiaodonglunwen@163.com。