葡聚糖凝膠G-10凝膠色譜系統測定頭孢地尼顆粒中高分子聚合物含量

張宇佳,方夏琴,相莉,陳少華,鄭穩生

(中國醫學科學院藥物研究所,藥物傳輸技術及新型制劑北京市重點實驗室,北京 100050)

葡聚糖凝膠G-10凝膠色譜系統測定頭孢地尼顆粒中高分子聚合物含量

張宇佳,方夏琴,相莉,陳少華,鄭穩生

(中國醫學科學院藥物研究所,藥物傳輸技術及新型制劑北京市重點實驗室,北京 100050)

目的 建立凝膠色譜法測定頭孢地尼顆粒中聚合物的方法。方法色譜柱為葡聚糖凝膠G-10柱(400 mm×13 mm,40～120μm),流動相A為pH7.0的0.01mol·L-1磷酸鹽緩沖液,流動相B為水。流速1.5 mL·min-1,檢測波長254 nm,進樣量為20μL。結果該方法在0.247～1.728 mg·mL-1范圍內與峰面積呈良好的線性關系(r=1.000 0),頭孢地尼顆粒中聚合物含量＜0.1%。結論該方法簡便、準確、靈敏度高,適用于頭孢地尼顆粒聚合物的控制。

頭孢地尼顆粒;聚合物;色譜法,凝膠

β-內酰胺抗生素是目前臨床上最常用的抗感染藥物,但同時也是臨床上時常引發變態反應的藥物[1-2]。研究證明,β-內酰胺類抗生素變態反應的發生率與制劑中高分子聚合物及內源性聚合物的含量有關[3-4]。因此,對聚合物的控制是該類藥物質量控制的關鍵?！吨腥A人民共和國藥典》2010年版收載了15種需控制聚合物含量的β-內酰胺類抗生素,多為供注射用原料及其制劑[5]。研究表明,口服抗生素類藥物同樣會引起變態反應[6-7]。頭孢地尼為口服第3代頭孢菌素,抗菌譜廣?！吨腥A人民共和國藥典》2010年版對頭孢地尼顆粒所含相似聚合物的測定方法筆者未見有關報道,現利用葡聚糖凝膠G-10凝膠色譜系統實現了對頭孢地尼顆粒中高分子聚合物的分離分析,為該藥的質量控制提供了一個新的檢測方法。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 SPD-10A泵LC-10AD檢測器(日本島津公司),色譜柱:葡聚糖凝膠(sephadex)G-10柱(TIANG400,TIANHE,400 mm×13 mm,40～120μm)。

1.2 試藥 頭孢地尼顆粒(中國醫學科學院藥物研究所自制,批號:110401,110402,110403),頭孢地尼對照品(USPReference Standard,Cefdinir),200 mg CAT. NO.1097614 USP ROCKVILLE,MD LOT FOG231。高效液相色譜法測得含量:99.2%;紫外分光光度法測得含量:99.9%。磷酸二氫鈉、磷酸氫二鈉均為分析純,藍色葡聚糖2000為Pharmacia公司產品,實驗用水為娃哈哈純凈水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件與系統適用性 用葡聚糖凝膠G-10 (40～120μm)為填充劑,柱長400 mm×13 mm,40～120μm。以pH7.0的0.01 mol·L-1磷酸鹽緩沖液[0.01 mol·L-1磷酸氫二鈉溶液-0.01 mol·L-1磷酸二氫鈉溶液(61∶39)]為流動相A,以水為流動相B,流速1.5 mL·min-1,檢測波長254 nm。分別以流動相A、B為流動相,取1 mg·mL-1藍色葡聚糖2000溶液20μL,注入液相色譜儀,理論板數按藍色葡聚糖2000峰計算均應不低于700,拖尾因子均應＜2.0。在兩種流動相系統中藍色葡聚糖2000峰保留時間的比值應在0.93～1.07之間,對照溶液主峰和供試品溶液中聚合物峰與相應色譜系統中藍色葡聚糖2000峰保留時間的比值均應在0.93～1.07之間。稱取頭孢地尼約10 mg,置10 mL量瓶中,用磷酸鹽溶液[0.1 mol·L-1磷酸氫二鈉溶液-0.1 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(2∶1)]溶解,再用1 mg·mL-1的藍色葡聚糖溶液稀釋至刻度,精密量取20μL,注入液相色譜儀,以流動相A進行測定,記錄色譜圖。高聚體的峰高∶單體與高聚體之間的谷高應＞2.0。

2.2 線性關系考察 取頭孢地尼對照品溶液0.5, 1.0,1.5,2.0,2.5,3.0,3.5 mL,分別置7個100 mL量瓶中,加水稀釋至刻度,即得頭孢地尼系列溶液,分別進樣分析,記錄色譜圖。以濃度為橫坐標,以峰面積為縱坐標,進行線性回歸。得線性回歸方程:Y= 24 272.051 0X+79.750 8,r=1.000 0。結果表明,在0.247～1.728 mg·mL-1濃度范圍內線性關系良好。

2.3 系統適用性實驗 稱取藍色葡聚糖2000適量,加水溶解并稀釋成每毫升中含1 mg的溶液,精密量取20μL,分別以流動相A、B為流動相,注入液相色譜儀,記錄色譜圖;取小試樣品約0.1 g,置10 mL量瓶中,用磷酸鹽溶液[0.1 mol·L-1磷酸氫二鈉溶液-0.1 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(2∶1)]溶解,再用1 mg·mL-1的藍色葡聚糖溶液稀釋至刻度,精密量取20μL,以流動相A為流動相,依法測定;取頭孢地尼對照品適量,用磷酸鹽溶液[0.1 mol·L-1磷酸氫二鈉溶液-0.1 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(2∶1)]溶解制成1 mg·mL-1的溶液,作為對照品溶液,精密量取20μL,以流動相B為流動相,依法測定。從實驗結果可以看出:流動相B中,葡聚糖與對照液主峰的保留時間比值為0.93;流動相A中,葡聚糖與供試液聚合物峰的保留時間比值為1.0。葡聚糖在流動相B與流動相A中保留時間的比值為0.97,高聚體的峰高與高聚體與單體之間的谷高的分離度達到了51,分離度良好。此方法的系統適用性良好。見表1。

表1 聚合物檢查系統適用性實驗結果 min

2.4 檢測限 取小試樣品溶液(按頭孢地尼計, 0.05 mg·mL-1)20μL,注入液相色譜儀,記錄色譜圖,根據樣品中聚合物含量計算可得,頭孢地尼聚合物的檢測限(S/N≥3)為1.1 ng。

2.5 穩定性考察 取本品適量,用磷酸鹽溶液[0.1 mol·L-1磷酸氫二鈉溶液-0.1mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(2∶1)]溶解并稀釋至每毫升中約含頭孢地尼1 mg的溶液,室溫放置,分別于0,1.5,3.0,4.5,6.0, 7.5 h進樣分析,記錄色譜圖。結果表明,放樣7.5 h后,聚合物峰面積無明顯變化趨勢,溶液穩定性較好。

2.6 重復性實驗 取本品約0.1 g,精密稱定,置10 mL量瓶中,用磷酸鹽溶液[0.1 mol·L-1磷酸氫二鈉溶液-0.1 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(2∶1)]溶解并稀釋至刻度,搖勻,作為供試品溶液,平行制備供試品溶液6份,分別取20μL,注入液相色譜儀,進樣測定。結果表明,本方法的測定重復性良好。

2.7 樣品測定 取本品適量(約含頭孢地尼10 mg),精密稱定,置10 mL量瓶中,用磷酸鹽溶液[0.1 mol·L-1磷酸氫二鈉溶液-0.1mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(2∶1)]溶解并稀釋至刻度,搖勻,精密量取20μL注入液相色譜儀,以流動相A為流動相進行測定,記錄色譜圖。另精密量取對照溶液20μL注入液相色譜儀,以流動相B為流動相,同法測定。按外標法以峰面積計算,含頭孢地尼聚合物以頭孢地尼計不得超過2.0%。檢查了3批頭孢地尼顆粒的聚合物,結果均符合規定。見表2。

表2 頭孢地尼顆粒聚合物測定結果 %,n=2

3 討論

溶解度實驗表明,頭孢地尼不溶于水,易溶于N,N-二甲基甲酰胺、二甲亞砜和1 mol·L-1的氫氧化鈉。以葡聚糖凝膠G-10為填料時,不宜使用有機溶劑,且強堿條件下,樣品降解產生的雜質干擾聚合物測定,故上述溶劑均不適用。通過研究發現,用磷酸鹽溶液[0.1 mol·L-1磷酸氫二鈉溶液-0.1 mol·L-1磷酸二氫鉀溶液(2∶1)]作為溶劑,既解決了溶解度的問題,又能滿足葡聚糖凝膠G-10凝膠柱的適用范圍。因為磷酸鹽溶液為流動相中使用部分,有效避免了干擾。用葡聚糖凝膠G-10凝膠色譜系統實現了對本品中高分子雜質的分離分析。本法操作簡便,結果準確,重復性好,可作為頭孢地尼顆粒中高分子聚合物檢測的常規方法。

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DOI 10.3870/yydb.2014.12.025

R978.1;R927.2

B

1004-0781(2014)12-1634-02

2013-12-12

2014-03-21

張宇佳(1977-),女,北京人,助理研究員,學士,從事藥物制劑及質量研究工作。電話:010-63165233,E-mail:zhyj@imm.ac.cn。

鄭穩生(1966-),男,安徽潛山人,副研究員,博士,從事藥物制劑及質量研究工作。電話:010-63165233,E-mail:zhengwensheng@imm.ac.cn。