以梔子苷的含量確定房縣產(chǎn)梔子的最佳成熟度及藥用部位*

張曉燕,鄧雪華,謝勇,盧敏,毛如續(xù)

(1.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院中藥藥理實(shí)驗(yàn)室,十堰 442000;2.湖北醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院,十堰 442000;3.湖北神農(nóng)本草中藥飲片公司,十堰 442000)

以梔子苷的含量確定房縣產(chǎn)梔子的最佳成熟度及藥用部位*

張曉燕1,2,鄧雪華2,謝勇2,盧敏2,毛如續(xù)3

(1.湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬人民醫(yī)院中藥藥理實(shí)驗(yàn)室,十堰 442000;2.湖北醫(yī)藥學(xué)院藥學(xué)院,十堰 442000;3.湖北神農(nóng)本草中藥飲片公司,十堰 442000)

目的 測(cè)定房縣產(chǎn)不同成熟程度梔子的不同部位中梔子苷的含量,為確定其最佳的成熟度和藥用部位提供依據(jù)。方法將進(jìn)入成熟期的梔子果從全青到黃紅分為4種成熟度,建立高效液相色譜法分別測(cè)定每種成熟度果實(shí)不同部位梔子苷的含量。結(jié)果測(cè)得該4種成熟度梔子果實(shí)的梔子苷含量均可達(dá)到《中華人民共和國(guó)藥典》標(biāo)準(zhǔn),其中青灰色全果中含量高達(dá)13.01%。結(jié)論成熟期梔子果的成熟度與梔子苷的含量呈負(fù)相關(guān),果實(shí)青灰色為最佳成熟度。《中華人民共和國(guó)藥典》載全果入藥科學(xué)合理。

梔子,房縣;梔子苷;含量;成熟度

梔子來(lái)源為茜草科植物梔子(Gardenia jasminoidesEllis)的干燥成熟的果實(shí)[1],又名黃梔子、山梔子、水梔子、越桃、山黃梔等[2]。梔子具有瀉火除煩,清熱利尿,涼血解毒等功效。用于熱病心煩、黃疸尿赤、血淋澀痛、血熱吐衄、目赤腫痛、火毒瘡瘍等癥的治療[1]。梔子中含有環(huán)烯醚萜類(lèi)物質(zhì)、黃酮、揮發(fā)油、有機(jī)酸和皂苷等化合物,國(guó)內(nèi)外公認(rèn)其有效成分為環(huán)烯醚萜類(lèi),其中含量最高的是梔子苷[3],《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版規(guī)定梔子的鑒別和定量指標(biāo)也是梔子苷[4]。梔子主產(chǎn)于我國(guó)江西、湖南、浙江、福建和廣東等地。近年來(lái)湖北各地均有廣泛種植,在十堰市房縣有部分藥農(nóng)從江西吉安引進(jìn)種苗,進(jìn)行了大面積人工種植。為了合理利用資源,保證藥效最大化,筆者以梔子苷含量為指標(biāo),研究梔子果實(shí)藥用最佳的成熟度和藥用部位,現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 儀器與材料

1.1 儀器 LC-20AD高效液相色譜色譜儀(日本SHIMADZU);液相系列(LC-20AD泵,SIL-20A自動(dòng)進(jìn)樣器,SPD-M20A檢測(cè)器);LC solution色譜工作站;色譜柱:Gemini C18(250 mm×4.6 mm,5μm);FA2004萬(wàn)分之一電子分析天平(上海天平儀器廠),KQ-500DV超聲波清洗器(昆山市超聲儀器有限公司)。KWY-101型電熱恒溫干燥箱(武漢市武昌實(shí)驗(yàn)儀器廠)。

1.2 材料 于2013年10月25日采湖北省十堰市房縣青峰鎮(zhèn)17組3年生梔子的果實(shí),經(jīng)本文作者與中國(guó)植物志核對(duì)鑒定為梔子(Gardenia jasminoidesEllis),按果皮顏色分為青灰、青黃、全黃和黃紅4種成熟度,分別置于60℃恒溫干燥箱中充分干燥,再分離果皮和種仁作為供試樣品;梔子苷對(duì)照品(中國(guó)食品藥品檢定研究院,批號(hào):0749-9404,供含量測(cè)定用);甲醇、乙腈為色譜純;水為超純水;其他試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件 色譜柱:Gemini C18(250 mm× 4.6 mm,5μm);流動(dòng)相:乙腈-水(15∶85);檢測(cè)波長(zhǎng):238 nm;流速:1.0 mL·min-1;柱溫:30℃。對(duì)照品與樣品色譜圖見(jiàn)圖1。

A.梔子苷對(duì)照品;B.梔子樣品;1.梔子苷?qǐng)D1 梔子苷對(duì)照品及梔子樣品HPLC圖譜A.geniposide reference substance;B.gardenia specimen;1. geniposideFig.1 HPLC chromatograms of geniposide reference substance and gardenia specimen

2.2 對(duì)照品溶液的制備 精密稱(chēng)定干燥至恒質(zhì)量的梔子苷對(duì)照品2.8 mg,置5 mL量瓶中,加甲醇至刻度混勻,配成濃度為0.56 mg·mL-1對(duì)照品儲(chǔ)備液。取對(duì)照品儲(chǔ)備液1 mL,置10 mL量瓶中,加甲醇至刻度超聲混勻,即得濃度為56μg·mL-1對(duì)照品溶液。

2.3 供試品溶液的制備 取不同成熟程度充分干燥的梔子樣品分別分成全果、果仁、果皮3部分,搗碎過(guò)四號(hào)篩,精密稱(chēng)定各樣品粉末0.1 g,置具塞錐形瓶中,精密加入甲醇25 mL,稱(chēng)定質(zhì)量,超聲提取20 min,放冷至室溫,用甲醇補(bǔ)足減失的質(zhì)量,搖勻,濾過(guò),取續(xù)濾液10 mL于25 mL量瓶中,加甲醇至刻度,超聲混勻,用孔徑0.45μm的微孔濾膜過(guò)濾,即得。

2.4 線性范圍的考察 精密吸取“2.2”項(xiàng)下對(duì)照品儲(chǔ)備液3 mL于容量瓶中,倍稀法配成濃度為28,56, 201.6,336,560μg·mL-1的對(duì)照品溶液,分別進(jìn)樣2μL,按上述色譜條件測(cè)定,記錄色譜圖。以進(jìn)樣量(μg)為橫坐標(biāo)(X),峰面積為縱坐標(biāo)(Y),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。回歸方程:Y梔子苷=1.59×106X-9.42×103,n=5,r= 0.999,表明梔子苷在28～560μg·mL-1范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.5 精密度實(shí)驗(yàn) 精密吸取上述梔子苷對(duì)照品溶液5μL,按上述色譜條件,分別進(jìn)樣6次,記錄梔子苷峰面積,計(jì)算梔子苷峰面積的RSD=0.35%(n=6),表明儀器精密度良好。

2.6 重復(fù)性實(shí)驗(yàn) 取同一種成熟度的梔子全果樣品6份,精密稱(chēng)定,按上述供試品溶液制備方法制備供試品,再按上述色譜條件進(jìn)樣分析,記錄梔子苷峰面積,計(jì)算6份樣品中梔子苷的RSD=1.67%(n=6),表明該方法重復(fù)性良好。

2.7 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn) 取同一供試品溶液,按上述色譜條件,每2 h進(jìn)樣5μL進(jìn)行分析,共測(cè)6次,記錄梔子苷峰面積,計(jì)算得該樣品中梔子苷的RSD=1.85%(n= 6),結(jié)果表明供試品溶液在12 h內(nèi)基本穩(wěn)定。

2.8 加樣回收率實(shí)驗(yàn) 精密稱(chēng)取已知含量的全黃梔子果實(shí)的果殼粉末0.106 4 g,準(zhǔn)確加入56μg·mL-1的對(duì)照品溶液8 mL,按上述“2.3”項(xiàng)供試品溶液制備方法制備供試品,再按上述色譜條件進(jìn)樣分析,計(jì)算梔子苷得加樣平均回收率為96.37%,RSD=1.2%,結(jié)果見(jiàn)表1。

2.9 梔子果實(shí)不同部位梔子苷含量測(cè)定結(jié)果 取上述充分干燥的不同成熟度的梔子果實(shí),分成全果、果皮與果仁3部分,按“2.3”項(xiàng)供試品溶液制備方法制備各供試樣溶液,再按上述色譜條件分別進(jìn)樣測(cè)試,記錄峰面積,以梔子苷含量計(jì)算各樣品溶液中環(huán)烯醚萜類(lèi)的質(zhì)量分?jǐn)?shù),結(jié)果表明,青灰色果實(shí)梔子苷含量最高。見(jiàn)表2。

3 討論

3.1 梔子采收的最佳成熟度 梔子果實(shí)膨大后果皮顏色要經(jīng)歷青灰到黃紅漸變的成熟過(guò)程,果實(shí)的大小變化不大。合理采收的依據(jù)應(yīng)以梔子苷含量最大化來(lái)確定最佳的成熟度[5]。本實(shí)驗(yàn)用的4種不同成熟度的梔子平均質(zhì)量無(wú)顯著差異,梔子全果與果仁不同成熟度的梔子苷含量均呈下降趨勢(shì),與朱文佩等[6]報(bào)道的梔子果實(shí)梔子苷含量隨果實(shí)成熟度的提高含量逐漸降低一致。因此,藥用梔子果實(shí)采收的最佳成熟度為梔子果實(shí)充分膨大后果皮顏色由青轉(zhuǎn)黃前采收,作為色素原料的梔子除外。

表1 梔子苷的加樣回收率實(shí)驗(yàn)結(jié)果Tab.1 Result of recovery test on geniposide

表2 不同成熟度梔子果實(shí)不同部位梔子苷質(zhì)量分?jǐn)?shù)Tab.2 Geniposide content in different parts of gardenia with different degree of maturity %

3.2 梔子的藥用部位 梔子很早就有果皮與果仁分別使用的記載[7],現(xiàn)代還有許多地方沿襲去皮用仁的習(xí)慣。從表2可見(jiàn),不同成熟度梔子全果梔子苷的含量均可達(dá)到《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版標(biāo)準(zhǔn)[1],其中果仁的含量最高,果皮含量較低,但同樣含有環(huán)烯醚萜類(lèi),果皮平均重量只占全果的28%。從有效成分的含量最大化并且結(jié)合合理的利用資源考慮,《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版規(guī)定全果入藥比較科學(xué)合理。

3.3 房縣梔子的價(jià)值 房縣素有“華中藥庫(kù)”之稱(chēng),有規(guī)模種植藥材的經(jīng)驗(yàn)[8],筆者對(duì)房縣產(chǎn)梔子適宜采收最佳的成熟度進(jìn)行的研究,有利于提高當(dāng)?shù)禺a(chǎn)梔子的質(zhì)量。從實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知,合理的采收可以使房縣梔子的梔子苷含量高出《中華人民共和國(guó)藥典》2010年版規(guī)定的幾倍,這與房縣的土壤、氣候、水分、礦物質(zhì)的分情況適合梔子的種植有關(guān)。

[1] 國(guó)家藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典(一部)[M].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:231-232.

[2] 中國(guó)科學(xué)院中國(guó)植物志編輯委員會(huì).中國(guó)植物志[M].第71卷1冊(cè).北京:科學(xué)技術(shù)出版社,2004:332.

[3] 游偉良,平其能,孫敏捷,等.梔子苷的藥理學(xué)研究新進(jìn)展[J].藥學(xué)進(jìn)展,2012,36(4):158-162.

[4] 黃辛武,柳俊.反相高效液相色譜法測(cè)定安腦牛黃片中梔子苷的含量[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào),2009,28(1):108-109.

[5] 何國(guó)振,周妹,湯麗云,等.不同成熟期梔子果實(shí)有效成分累積的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開(kāi)發(fā),2010,22(4): 678-682.

[6] 朱文佩,劉麗華,李克和,等.梔子果實(shí)成熟度對(duì)梔子苷含量積累的影響[J].中國(guó)野生植物資源,2012,31(4):23-24.

[7] 劉怡,陳磊,張留記.不同產(chǎn)地梔子皮和梔子仁中有效成分的含量比較[J].中藥新藥與臨床藥理,2012,23(1): 81-83.

[8] 閔懷臻,賀琴,李金科,等.絞股藍(lán)皂苷對(duì)2型糖尿病并NAFLD大鼠肝組織TNF-αmRNA表達(dá)和血硫化氫的影響[J].湖北醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報(bào),2013,32(4):317-324.

DOI 10.3870/yydb.2014.12.024

Determ ination of the Suitable Maturity Degree and Medicinal Parts by the Contents of Geniposide in Gardenia Fruit Produced in Fangxian

ZHANG Xiao-yan1,2,DENG Xue-hua2,XIE Yong2,LU Min2,MAO Ru-xu3
(1.Laboratory of Chinese Herbal Pharmacology,Renmin Hospital,Hubei University ofMedicine,Shiyan 442000,China;2.School of Pharmacy, Hubei University of Medicine,Shiyan 442000,China;3.Hubei Shennong Bencao Prepared Slices,Shiyan 442000,China)

Objective To determine the contents of geniposide in different parts of the fruit ofGardenia jasminoidesEllis with differentmaturity degree produced infangxian,in order to find the optimum harvest periods and themedicinal parts.MethodsThematurity of gardenia fruit are divided into four levels according to the color from totally green to yellow and red, and then the contents of geniposide were determined by HPLC.ResultsThe contents of geniposide in all four levels of maturity reached the standard by theChinese Pharmacopoeia.The content of geniposide in fruits of caesious color is up to 13.01%.ConclusionThere is a negative correlation between thematurity and the contentof geniposide in themature fruitofGardenia jasminoidesEllis.Caesious fruit has the best maturity degree.It is reasonable to use the whole fruit as medicine according to theChinese Pharmacopoeia.

Gardenia jasminoidesEllis,fangxian;Geniposide;Content;Maturity degree

R282.71;R927.2

B

1004-0781(2014)12-1631-03

2014-01-14

2014-03-05

*湖北省高等學(xué)校創(chuàng)新能力提升計(jì)劃(鄂教科函[2012]56號(hào))

張曉燕(1969-),女,湖北十堰人,主任藥師,副教授,碩士生導(dǎo)師,主要研究方向:藥用植物資源研究。電話(huà): 0719-8637262,E-mail:coarff66@126.com。

謝勇(1965-),男,湖北鄂州人,副教授,碩士,主要研究方向:中藥藥理。電話(huà):0719-8872192,E-mail: 1041154080@qq.com。