宮頸脫落細胞HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA在宮頸病變篩查中的應用

周 星，劉麗華，張金庫，趙文明，姜 麗，陳 紅，周炳娟

(1河北聯合大學，河北唐山063000;2保定市第一中心醫院)

子宮頸上皮內瘤變(CIN)是宮頸癌的癌前病變。研究發現［1.2］，高危型乳頭瘤病毒(HR-HPV)感染、病毒癌基因HPV E6/E7 mRNA表達與宮頸癌發病有關，二者在CIN中陽性率較高。對HR-HPV進行檢測可發現宮頸癌早期病變或具有高危因素的人群，已被列為宮頸癌篩檢項目之一。2011年8月～2013年9月，我們收治宮頸病變患者301例，現分析其HPV E6/E7 mRNA與HR-HPV DNA檢測結果，探討其在宮頸病變篩查中的價值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 收集保定市第一中心醫院2011年8月～2013年9月門診及病房收治的宮頸病變患者301例，年齡20～65歲，中位年齡39歲。其中慢性宮頸炎95例;癌前病變190例，其中CIN1 72例，CIN2 58例，CIN3 60例;宮頸鱗狀細胞癌16例。將CIN2以上病變定為癌前病變［3］。

1.2 宮頸脫落細胞HPV E6/E7 mRNA與HR-HPV DNA表達檢測 用窺器暴露宮頸后，宮頸細胞專用采樣刷插入子宮頸口旋轉5周，收集宮頸口鱗柱交界區的脫落上皮細胞，并將刷頭部放入裝有專用保存液的瓶內并編號。取1/2樣本采用HC2法檢測HR-HPV DNA，重復檢測每份樣本兩次并取均值，HPV陽性判斷標準為RLU/CO＞1.0。剩余1/2樣本采用bDNA技術檢測HPV E6/E7 mRNA。將樣本倒入15 mL離心管，3 000 r/min離心5 min后倒掉上清液;加入2 mL DDH2O，反復吹打或振蕩器振蕩，使細胞全部混懸，加入300 μL組織裂解液和3 μL蛋白酶K，65℃孵育30 min，加入終止反應液終止反應;制成的細胞懸浮液用宮頸穩態檢測試劑盒進行測試，將反應板放入冷光儀，經計算軟件自動讀取HPV E6/E7 mRNA拷貝數值;重復檢測每份樣本兩次并取均值，以平均拷貝數值(Copies/cell)＞1.0為陽性判斷標準。

1.3 觀察指標

1.3.1 HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA 診斷癌前病變的靈敏性、特異性、陽性預測值 以病理結果為參照，比較HPV E6/E7 mRNA與HR-HPV DNA的靈敏性、特異性及陽性預測值。

1.3.2 不同年齡者HPV E6/E7 mRNA與HR-HPV DNA的陽性率 將患者按照年齡分為＜30歲、30～39歲、40～49歲及＞50歲，比較各年齡段患者中兩項指標的陽性率。

1.3.3 不同病變程度者HPV E6/E7 mRNA與HRHPV DNA的陽性率 將患者按照病變程度分為CIN1、CIN2、CIN3和宮頸癌四個水平，比較各病變中兩項指標的陽性率。

1.4 統計學方法 采用SPSS13.0軟件，數據比較采用χ2檢驗。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 HPV E6/E7 mRNA、HR-HPV DNA 診斷癌前病變的靈敏性、特異性、陽性預測值 HPV E6/E7 mRNA的靈敏性、特異性、陽性預測值分別為50.8%(68/134)、85.6%(143/167)、80.2%(97/121)，HRHPV DNA的靈敏性、特異性、陽性預測值分別為79.1%(106/134)、62.9%(105/167)、63.1%(106/168)，HPV E6/E7 mRNA的診斷靈敏性低于HRHPV DNA(P＜0.05)，特異性和陽性預測值高于HPV DNA(P 均 ＜0.05)。

2.2 不同年齡受檢者HPV E6/E7 mRNA與HRHPV DNA的陽性率比較 在30歲以下與30～39歲的受檢者中HPV E6/E7 mRNA的陽性率低于HR-HPV DNA(P均＜0.05);在40～49歲及50歲以上的受檢者中二者陽性率差異無統計學意義。30歲以下的受檢者HPV E6/E7 mRNA陽性率最低，HR-HPV DNA的陽性率最高;隨著年齡增加，HPV E6/E7 mRNA陽性率有逐漸升高趨勢，HR-HPV DNA的陽性率逐漸降低。見表1。

表1 不同年齡者HPV E6/E7 mRNA與HR-HPV DNA的陽性率比較(%)

2.3 不同病變程度受檢者HPV E6/E7 mRNA與HR-HPV DNA的陽性率比較 CIN2、CIN3和宮頸癌者HPV E6/E7 mRNA陽性率高于慢性宮頸炎者，且CIN3者高于CIN2者(P均＜0.05);CIN1、CIN2、CIN3及宮頸癌患者HR-HPV DNA的陽性率高于慢性宮頸炎患者(P均＜0.05)，CIN2與CIN3者中陽性率無統計學差異。見表2。

表2 不同病變程度者HPV E6/E7 mRNA與HR-HPV DNA的陽性率比較(%)

3 討論

HR-HPV 是宮頸癌感染的主要誘因［4，5］，但只有少數感染會發展成惡性疾病，原因是惡性腫瘤的發展需要E6和E7癌基因在整合的HPV基因組中表達［6，7］。兩個病毒癌基因通過鈍化腫瘤抑制蛋白p53和pRb［8］促進不規則細胞的生長，導致宿主細胞癌變，若沒有表達E6和E7基因，細胞自身不會發生惡性轉化［9］，而此時宿主可能已感染了 HRHPV，其DNA檢測顯示為陽性。本研究發現，與HR-HPV DNA相比，HPV E6/E7 mRNA表達對CIN2［10，11］有更高的特異性和陽性預測值，但靈敏性較低，提示HPV E6/E7 mRNA比HR-HPV DNA準確度更好［12］。在臨床應用中，CIN1患者可行HPV E6/E7 mRNA檢測來預測癌變風險，陽性者可積極采取治療措施;對于宮頸癌術后患者，可檢測陰道殘端HPV E6/E7 mRNA預估風險，選擇隨訪間隔時間，預防復發。由于HPV還與直腸癌、食道癌、陰道癌等的發生發展有關，HPV E6/E7 mRNA陽性要考慮導致陰道斷端復發的可能［13］，應做好這方面的隨訪。本研究結果顯示，40歲以下者HR-HPV DNA的感染率高達50%，但HPV E6/E7 mRNA的檢出率較低，說明此年齡段大部分HPV感染可以消退，只有少部分有惡性進展的風險;對于40歲以上婦女的HPV E6/E7 mRNA檢測相對更有意義。隨著年齡增加，HR-HPV DNA的陽性率有降低趨勢，HPV E6/E7 mRNA的陽性率逐漸升高，40歲以上者中二者陽性率相近且差異無統計學意義，說明年齡較大者感染HPV后進展為惡性病變的風險相對較大，應盡早采取措施。HPV E6/E7 mRNA的陽性率在CIN1和CIN2者間差異有統計學意義，而HR-HPV DNA無統計學意義，說明對診斷為不典型鱗狀上皮(ASC-US)或低度上皮內病變(LISL)的患者，HPV E6/E7 mRNA檢測能更加準確地提示病毒感染進展情況。根據病毒基因是否整合入宿主基因組中，可判斷HPV E6/E7基因產物的表達狀態，以提高宮頸疾病的篩查效率。

綜上所述，HPV E6/E7mRNA檢測相對HRHPV DNA檢測特異性及陽性預測值較高，有望成為宮頸疾病篩查更好的指標，對宮頸癌的預防、治療及降低宮頸癌發病率和病死率具有積極意義。

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