冷凝集致血常規多項參數失真一例及處理分析

鹿紅梅，張振惠，嚴乃富，趙存英，楊桐

（中國人民解放軍第513醫院檢驗科，甘肅 蘭州 732750）

·短篇報道·

冷凝集致血常規多項參數失真一例及處理分析

鹿紅梅，張振惠，嚴乃富，趙存英，楊桐

（中國人民解放軍第513醫院檢驗科，甘肅 蘭州 732750）

目的探討冷凝集對血常規各項參數的影響及消除方法。方法對一冷凝集標本分別在37℃水浴30 min和置換血漿的方案處理后上機測試，觀察血常規各項參數的變化。結果冷凝集標本直接檢測時紅細胞(RBC)和紅細胞比容(HCT)顯著降低，平均紅細胞血紅蛋白量(MCH)和平均血紅蛋白濃度(MCHC)異常升高，血紅蛋白(Hb)與RBC比例明顯異常。37℃水浴30 min RBC、HCT有所上升，但MCH、MCHC仍超出檢測范圍，出現極度偏離。血漿置換法白細胞(WBC)、RBC、HCT、MCH、MCHC恢復正常，但血小板(PLT)明顯下降。結論血常規檢驗中冷凝集標本獲取正確結果的最佳處理方案是將上述方法結合起來進行報告，除PLT采用水浴后或直接測試的檢測結果外，其他均采用血漿置換的檢測結果較為準確。

冷凝集；血常規；水浴；置換血漿

大多數由肺炎支原體引起的原發性非典型性肺炎患者，其血清中常含有較高滴度的寒冷紅細胞凝集素(簡稱冷凝集素)，它能與患者自身紅細胞或“O”型人紅細胞于0℃～4℃條件下起凝集反應，在37℃時已凝集的紅細胞呈可逆性的完全散開，冷凝集試驗有助于支原體肺炎的診斷。現將我院遇到的1例冷凝集標本導致血液分析儀測定結果異常的情況進行分析，并對消除方法進行探討：

1 資料與方法

1.1 一般資料患者，男，22歲，2013年2月因“咳嗽、咳痰2周”入院。患者呈刺激性咳嗽，夜間加重，劇烈咳嗽時伴左側胸痛，胸部X線示：左下肺片狀模糊影，考慮左下肺炎。出現發熱、寒顫，高達38.9℃。查體：咽部充血，雙側扁桃體Ⅰ°腫大，雙肺叩診清音，雙肺呼吸音清，未聞及干、濕性啰音及胸膜摩擦音，心律齊，未聞及雜音，腹軟，無壓痛、反跳痛，肝、脾肋下未觸及，肝區、腎區無叩痛，雙下肢無水腫。血常規檢查：白細胞(WBC)16.0×109/L，紅細胞(RBC) 1.25×1012/L，血紅蛋白(Hb)156 g/L，紅細胞比容(HCT)17.0，平均紅細胞血紅蛋白量(MCH)和平均血紅蛋白濃度(MCHC)均超出檢測范圍，未顯示結果。肉眼觀察：EDTA-K2抗凝的靜脈血約1 ml，顛倒混勻試管內血液，可見管壁上RBC呈肉眼可見細小顆粒狀凝集，疑為冷凝集所致。于是重新采末稍血20μl，加入稀釋液中，混勻后發現稀釋液中出現大量明顯肉眼可見小凝塊。用生理鹽水進行手工計數，EDTA-K2的抗凝血在生理鹽水中呈強凝集狀態，無法計數。血涂片自然晾干后經瑞特染色，油鏡下觀察RBC形態，大部分RBC呈凝集狀，僅有少量散在分布的RBC。

1.2 儀器及試劑日本光電NEK-822K血細胞分析儀，試劑應用相應配套的試劑。

1.3 實驗方法將冷凝集樣本采用下述兩種方法處理后上機進行測定：①37℃水浴30 min保溫立即測試；②血漿置換法：將標本500 g離心5 min，棄上清后加入等量生理鹽水混勻，反復洗滌3次，測試后觀察WBC、RBC、HCT、Hb、MCH、MCHC和血小板(PLT)的結果變化。

2 結果

對于出現冷凝集的血常規標本，由表1在三種不同條件下檢測結果可知，冷凝集素對于PLT和Hb影響不大，符合CLIA能力驗證計劃的分析質量要求[1]；對血液分析儀的WBC結果影響較大，且冷凝集素效價越高影響越大；在直接檢測法和37℃水浴法中冷凝集素對RBC、紅細胞平均體積(MCV)、MCH、MCHC的檢測造成嚴重干擾，且效價越高影響越嚴重。凝集素經37℃水浴法，不能有效消除冷凝集素的干擾。置換血漿法可以有效排除這些干擾，使除PLT外所有參數均恢復到正常范圍，計數結果得到明顯改善。由于置換過程會造成PLT的丟失，故可采用37℃水浴法或者直接上機檢測的PLT結果報告。

表1 三種方法檢測冷凝集血液的血常規檢測結果

3 討論

冷凝集素是自身抗體的一種，多數為IgM型，少數為IgG、IgA或它們的混合型，血液離體后溫度降低，較高效價的冷凝集素與自身的紅細胞抗原發生一種可逆性的凝集，從而阻塞了微血管循環引起紫紺等表現，病情嚴重者可以引起自身溶血反應[2]。大部分人都有一定的冷凝素抗體，但其滴度一般在1：16以下，且在20℃以上不易發生凝集反應，其凝集常見于支原體肺炎、傳染性單核細胞增多癥、瘧疾、肝硬化、多發性骨髓瘤、中度貧血及淋巴瘤等[3]。本例為支原體肺炎患者，冷凝集實驗1:512。

實驗中我們對各種冷凝集處理方案進行了比對研究，發現37℃水浴30 min進行測定，RBC數值已略顯升高，但MCH和MCHC仍超出檢測范圍。考慮其原因可能為單純樣本加溫時紅細胞仍存在冷凝集現象，在測試過程中血液遇冷試劑后，冷凝集再次發揮作用促使紅細胞凝集，導致紅細胞假性減少，MCV假性增大。故考慮樣本試劑雙重加溫法以保證整個檢測過程中血液各種成分的溫度接近37℃，使結果較單純樣本加溫檢測更準確。但樣本試劑雙重加溫亦存在弊端：①血細胞分析儀系統測試對溫度的要求是15℃～30℃，超出此溫度范圍可能對儀器性能造成影響；②冬季室溫低，即使加溫在測試循環的過程中也會很快冷卻；③溶血劑和稀釋液體積大，加溫不方便。而血漿置換法，除因置換過程中造成血小板部分丟失外，其他所有參數恢復到正常范圍，可見置換血漿法是有效消除冷凝集干擾血常規檢測的好方法，但此法亦存在操作繁瑣、費時較長的問題，故遇此情況應與臨床及時溝通，以免在發放報告的時效性方面產生分歧。

本實驗亦發現冷凝集對血液分析儀的WBC結果影響較大，其原因可能為冷凝集發生時，紅細胞聚集成團導致檢測時RBC計數明顯下降和體積增大，采用電阻抗法檢測白細胞的儀器，可能因為凝集的紅細胞在儀器特定的時間內不能被溶血劑完全溶解，檢測時被認為是白細胞而導致WBC計數假性升高[4]。

對于肉眼觀察無明顯顆粒的冷凝集標本，可利用下述規律：一般正常人Hb/RBC的比值約為30：1，Hb單位為g/L，RBC的單位為1012/L[5]。若Hb/RBC的比值比30大很多，且MCH、MCHC異常升高，則提示有可能是冷凝集現象。

近年來，支原體感染引起的冷凝集病例在臨床上日益增多。由于支原體無細胞壁，部分常用抗生素(如頭孢菌素類和青霉素類)對支原體感染的治療往往無效；同時，由于缺乏特異性的癥狀，加之支原體培養十分困難，血清支原體抗體檢測也部分存在假陽性和假陰性等諸多因素，使其診斷十分棘手。而血液標本在體外出現冷凝集現象不失為輔助診斷支原體感染廉價、方便和快捷的診斷方法。故檢驗人員應準確識別和處理冷凝集標本，發出準確報告，并及時與臨床溝通，為解決臨床問題和消除患者痛苦提供依據。

[1]葉應嫵,王毓三,申子瑜.全國臨床檢驗操作規程[M].第3版.南京:東南大學出版社,2006:80,193.

[2]孫寶旗,張慶.冷凝集素對2例血常規檢測1l多項參數干擾分析[J].河北醫藥,2010,8(32):1124-1126.

[3]洪玲珍.室溫下冷凝集素干擾血液分析儀多項檢測參數1例[J].實用醫學雜志,2008,24(8):1347-1348.

[4]樂家新,馬俊龍,徐菡,等.紅細胞冷凝集對不同類型血細胞分析儀檢測結果的影響探討[J].醫療衛生裝備,2009,30(2):69-71.

[5]曾令軍,李莉,吳慶,等.高效價冷凝集對血常規檢測結果的影響及消除方法探討[J].罕少疾病雜志,2011,18(5):2-6.

R446.11+1

D

1003—6350（2014）13—2012—02

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.13.0783

2013-12-15)

鹿紅梅。E-mail：deer0818@sina.com