惡性血液病患者T淋巴細胞亞群的檢測分析

甄 禎 葉 芳 李國霞 任方剛 王宏偉 魏百合

山西醫(yī)科大學第二醫(yī)院血液科，太原 030001

惡性血液病患者T淋巴細胞亞群的檢測分析

甄 禎 葉 芳▲李國霞 任方剛 王宏偉 魏百合

山西醫(yī)科大學第二醫(yī)院血液科，太原 030001

目的 探討惡性血液病患者外周血T淋巴細胞亞群的特征及其臨床意義。 方法 應用流式細胞儀對120例惡性血液病患者（急性白血病、慢性白血病、淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤）及40例正常人外周血T淋巴細胞亞群進行檢測，并比較各組的差異。 結(jié)果 惡性血液病組的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD3+CD16+CD56+T淋巴細胞比例低于對照組，CD8+T淋巴細胞比例高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；AL組、CL組、LM組和MM組的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD3+CD16+CD56+T淋巴細胞比例低于對照組，CD8+T淋巴細胞比例高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。結(jié)論 惡性血液病患者機體免疫功能失衡導致機體免疫力下降，抗腫瘤能力減弱，T淋巴細胞亞群的檢測可以為惡性血液病的診斷、治療及判斷預后提供依據(jù)。

T淋巴細胞亞群；惡性血液病；免疫功能

血液病是指原發(fā)于造血系統(tǒng)的一類疾病，其中惡性血液病在所有惡性腫瘤中的發(fā)病率排第6位[1]，包括急慢性白血病、惡性淋巴瘤、多發(fā)性骨髓瘤（MM）、骨髓增生異常綜合征等，是嚴重威脅人類健康的一類重大疾病。T淋巴細胞是參與機體免疫應答功能的重要細胞成分，其在體內(nèi)的數(shù)量和比例關(guān)系相對穩(wěn)定，一旦出現(xiàn)數(shù)量變化或比例失調(diào)可導致多種疾病的發(fā)生。惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展多伴有T淋巴細胞亞群的改變，出現(xiàn)免疫功能紊亂，相關(guān)文獻研究了惡性實體瘤患者體內(nèi)的T淋巴細胞亞群變化[2-4]。目前對惡性血液病患者體內(nèi)T淋巴細胞亞群，特別是NKT淋巴細胞比例變化的報道相對較少。本研究對120例惡性血液病患者和40例正常對照組外周血T淋巴細胞亞群進行比較分析，評估惡性血液病患者的免疫功能，明確其在血液病的發(fā)病機制。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2012年9月～2013年9月在本院血液科住院患者120例為研究對象，所有患者均依據(jù)張之南血液病診斷標準[5]明確診斷，其中急性白血病（AL）53例，慢性白血病（CL）18例，MM 21例，淋巴瘤（LM）28例；男68例，女52例；年齡16～87歲，平均57歲。對照組40例，男19例，女21例；年齡21～52歲，平均41歲。兩組的性別、年齡、身體狀況等比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 實驗儀器和試劑

流式細胞儀型號為Beckman-Coulter公司的FC 500（Beckman Coulter，U.S.A）；試劑單克隆抗體（McAb）為Beckman-Coulter公司產(chǎn)品。

1.3 實驗方法

空腹抽取患者及健康體檢者外周靜脈血2 ml，置于EDTA抗凝管內(nèi)，2 h內(nèi)送檢，于試管內(nèi)分別加入單克隆抗體CD3-FITC/（CD16+CD56）-PE及CD4-FITC/ CD8-PE/CD3-PC5，然后吸取樣本100 μl，PBS緩沖液1 ml，混勻，室溫避光孵育15 min后加入溶血素，混勻后避光反應10 min，再于試管中加入PBS緩沖液2 ml進行洗滌，離心后棄上清液，重復洗滌1次，最后加PBS緩沖液500 μl，置于流式細胞儀中進行檢測。

1.4 統(tǒng)計學處理

采用SPSS 17.0統(tǒng)計軟件對數(shù)據(jù)進行分析和處理，計量資料以±s表示，采用t檢驗，計數(shù)資料采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組T淋巴細胞亞群變化的比較

惡性血液病組的CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD3+CD16+CD56+T淋巴細胞比例低于對照組，CD8+T淋巴細胞比例高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）（表1）。

表1 兩組T淋巴細胞亞群變化的比較（%，±s）

表1 兩組T淋巴細胞亞群變化的比較（%，±s）

與對照組比較，*P＜0.05

組別 n C D3+ C D4+ C D8+ C D4+/ C D8+C D3+C D16+C D56+惡性血液病組對照組1 2 0 6 5 . 1 2 ± 5 . 3 6*2 7 . 2 4 ± 9 . 1 2*3 1 . 7 ± 7 . 1 1*0 . 9 1 ± 0 . 6 7*3 . 5 1 ± 1 . 3 7*4 0 7 3 . 1 ± 1 2 . 1 4 3 3 . 1 5 ± 1 0 . 2 8 2 6 . 7 ± 6 . 0 6 1 . 5 3 ± 0 . 8 7 6 . 4 5 ± 4 . 2 8

2.2 不同惡性血液病與對照組T淋巴細胞亞群變化的比較

AL組、CL組、LM組和MM組的CD3+、CD4+、CD4+/ CD8+、CD3+CD16+CD56+T淋巴細胞比例低于對照組，CD8+T淋巴細胞比例高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）（表2）。

表2不同惡性血液病組與對照組T淋巴細胞亞群變化的比較（%，±s）

表2不同惡性血液病組與對照組T淋巴細胞亞群變化的比較（%，±s）

與對照組比較，*P＜0.05

組別 n C D3+ C D4+ C D8+ C D4+/ C D8+ C D3+C D16+C D56+A L 組C L 組L M 組M M組對照組5 3 1 8 2 8 2 1 4 0 6 5 . 3 3 ± 5 . 3 5*6 6 . 7 5 ± 5 . 4 8*6 5 . 0 9 ± 4 . 7 3*6 3 . 3 1 ± 4 . 2 3*7 3 . 1 ± 1 2 . 1 4 2 5 . 1 3 ± 8 . 2 3*2 7 . 3 3 ± 8 . 7 8*2 7 . 8 9 ± 9 . 0 3*2 8 . 6 1 ± 9 . 3 2*3 3 . 1 5 ± 1 0 . 2 8 3 2 . 1 ± 7 . 2 1*3 2 . 6 ± 7 . 4 3*3 0 . 9 ± 6 . 6 1*3 1 . 2 ± 8 . 2 4*2 6 . 7 ± 6 . 0 6 0 . 9 5 ± 0 . 5 8*0 . 9 2 ± 0 . 6 2*0 . 9 0 ± 0 . 5 6*0 . 8 7 ± 0 . 5 4*1 . 5 3 ± 0 . 8 7 3 . 4 4 ± 1 . 0 5*3 . 5 3 ± 1 . 4 1*3 . 5 1 ± 1 . 3 2*3 . 5 6 ± 1 . 4 3*6 . 4 5 ± 4 . 2 8

3 討論

T淋巴細胞是一組由胸腺生成，細胞表面含有特殊標志的免疫細胞，是機體執(zhí)行細胞免疫功能及免疫調(diào)節(jié)功能的重要細胞成分，包括Th細胞、Tc細胞、NKT淋巴細胞等。Th細胞的主要細胞表面標志是CD3+和CD4+，是輔助性T淋巴細胞，也是遲發(fā)性超敏反應的啟動者，可以促使B細胞產(chǎn)生抗體的輔助細胞，具有誘導抑制性T淋巴細胞（Ts細胞）、促進效應細胞發(fā)揮抗腫瘤作用的功能[6]。Tc細胞是細胞毒性T淋巴細胞介導反應的效應細胞，具有特異性殺傷腫瘤細胞的功能，Th/Tc一般相對穩(wěn)定，是機體細胞免疫狀態(tài)的中心環(huán)節(jié)，一旦出現(xiàn)Th細胞數(shù)量減少和Tc細胞數(shù)量增多或者Th/Tc比值發(fā)生改變時，可以使機體免疫功能發(fā)生變化[7]。NKT淋巴細胞具有NK細胞特性的T淋巴細胞亞群[8]，既有T淋巴細胞的抗腫瘤免疫活性，又具有NK細胞非MHC限制性殺瘤特點[9]，雖然NKT淋巴細胞在人體中的數(shù)量相對較少，但是機體抵御感染、抵抗腫瘤、調(diào)節(jié)自身免疫平衡的重要細胞[10]。

惡性腫瘤患者普遍存在免疫功能下降，主要體現(xiàn)在細胞免疫功能方面，且腫瘤的發(fā)生、發(fā)展與T淋巴細胞亞群有密切聯(lián)系，機體抗腫瘤細胞免疫功能紊亂是腫瘤發(fā)生的重要原因之一[11]。細胞免疫是人體特異性免疫功能的一部分，相關(guān)研究表明惡性血液腫瘤患者體內(nèi)執(zhí)行細胞免疫功能的淋巴細胞數(shù)量減少和功能缺陷，使機體抗腫瘤能力減弱，從而導致惡性腫瘤細胞的生成和發(fā)展[12]。外周血中的CD3+、CD4+、CD8+、CD3+CD16+CD56+T淋巴細胞是反映細胞免疫功能的主要細胞，檢測T淋巴細胞亞群的變化可以評估疾病的進展和預后，T淋巴細胞各亞群之間有截然不同的細胞生理功能，在數(shù)量和功能上出現(xiàn)異常時，可導致機體正常細胞一系列的病理生理變化。本研究結(jié)果顯示，惡性血液病組患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD3+CD16+CD56+T淋巴細胞比例較正常對照組明顯下降，其中AL、CL、LM和MM患者外周血CD3+、CD4+、CD4+/CD8+、CD3+CD16+CD56+T淋巴細胞比例低于對照組，而CD8+T淋巴細胞較對照組明顯升高，說明惡性血液病患者出現(xiàn)免疫功能失衡，其抗腫瘤細胞數(shù)量減少，導致機體抗腫瘤能力減弱，與相關(guān)文獻報道基本一致[13-14]。

綜上所述，分析惡性血液病患者外周血T淋巴細胞亞群變化情況，可以評估惡性血液病患者的免疫功能狀況，明確其在血液病發(fā)病機制和疾病診斷中的作用，為患者進一步治療及判斷預后提供一定的理論依據(jù)。

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Detection and analysis of T lymphocyte subset in patient with hematologic malignancy

ZHEN Zhen YE Fang▲LI Guo-xia REN Fang-gang WANG Hong-weiWEI Bai-he
Department of Hematology，the Second Hospital of Shanxi Medical University，Taiyuan 030001，China

ObjectiveTo explore the feature and clinical significance of T lymphocyte subset in patient with hematologic malignancy.MethodsThe peripheral blood T lymphocyte subset of 120 cases of patients with hematologic malignancy（acute leukemia，chronic leukemia，lymphoma，multiple myeloma）and 40 cases of normal people was detected by flow cytometry respectively，the difference between each group was analyzed.ResultsCD3+,CD4+,CD4+/CD8+,CD3+CD16+CD56+T lymphocyte cell in hematologic malignancy group was lower than that in control group respectively,CD8+T lymphocyte cell in hematologic malignancy group was higher than that in control group,with statistical difference(P＜0.05).CD3+,CD4+, CD4+/CD8+,CD3+CD16+CD56+T lymphocyte cell in AL group,CL group,LM group and MM group was lower than that in control group respectively,CD8+T lymphocyte cell in AL group,CL group,LM group and MM group was higher than that in control group respectively,with statistical difference(P＜0.05).ConclusionThe imbalanced immunity function of patients with hematologic malignancy leads to decreased organism immunity,weakens the ability of resisting tumor.The detection of T lymphocyte cell subset can provide evidence for diagnosis,treatment and prognosis judgment for hematologic malignancy.

T lymphocyte subset;Hematologic malignancy;Immunity function

R733

A

1674-4721（2014）03（c）-0101-03

2014-02-18本文編輯：李亞聰）

山西省國際科技合作項目（2012081044-1）；山西省留學基金（晉留管辦發(fā)[2009]9號106）；山西省人事廳歸國留學人員擇優(yōu)資助項目（晉財社[2011]172號）

▲通訊作者