慢性應激對大鼠血清活性腎素與血管緊張素Ⅱ的影響及電針的干預作用*

宋洪濤 姚海江 莫雨平 唐銀杉 許安萍 楊 娟 賽音朝克圖 李志剛△

（1.北京中醫藥大學針灸推拿學院，北京 100029；2.內蒙古國際蒙醫醫院，內蒙古 呼和浩特 010065）

慢性應激對大鼠血清活性腎素與血管緊張素Ⅱ的影響及電針的干預作用*

宋洪濤1姚海江1莫雨平1唐銀杉1許安萍1楊 娟1賽音朝克圖2李志剛1△

（1.北京中醫藥大學針灸推拿學院，北京 100029；2.內蒙古國際蒙醫醫院，內蒙古 呼和浩特 010065）

目的觀察慢性應激抑郁模型大鼠血清活性腎素與血管緊張素Ⅱ的變化以及電針的干預作用，探討腎素-血管緊張素系統在抑郁病與心血管疾病之間的關聯。方法采用慢性應激刺激結合孤養的方式建立大鼠慢性應激抑郁模型，分組后分別采用電針、氟西汀治療21 d，通過敞箱試驗觀察大鼠的行為學變化；采用ELISA檢測各組大鼠血清活性腎素和血管緊張素Ⅱ水平。結果模型組大鼠敞箱試驗水平運動得分和垂直運動得分明顯降低，電針和氟西汀可逆轉此變化；模型組大鼠血清中活性腎素水平和血管緊張素Ⅱ的水平升高，電針和氟西汀均可降低兩者的變化。結論慢性應激抑郁模型大鼠的循環RAS系統被過度激活，電針和氟西汀可降低其激活程度。

抑郁電針腎素-血管緊張素系統活性腎素大鼠

1 材料與方法

1.1 動物與分組雄性SD大鼠，清潔級，體質量（200±10）g，購于北京維通利華實驗動物技術有限公司，合格證號：SCXK（京）2012-0001。實驗前適應性飼養1周后進行初步篩選，將水平活動大于120次或小于30次的予以剔除，剩余28只大鼠隨機分為4組，空白組、模型組、氟西汀組、電針組，每組7只。

1.2 儀器與試劑MULTISKAN EX PRIMARY EIA V 2.3酶標儀（美國）。大鼠血管緊張素Ⅱ酶聯免疫試劑盒購于武漢華美生物工程有限公司；大鼠活性腎素酶聯免疫試劑盒購于上海研謹生物科技有限公司。LH202型韓氏穴位神經刺激儀（北京大學神經科學研究所監制，北京華衛產業開發公司生產）。

1.3 模型制備采用慢性不可預知性溫和應激模型結合孤養的方式進行造模，隨機接受21 d 7種不同的應激刺激，平均每種刺激給予3次。包括冷水游泳（4℃，5min）、晝夜顛倒（24 h）、禁食（24 h）、夾尾（距尾尖2 cm，3min）、禁水（24 h）、電擊足底（30 V，每次持續5 s）、潮濕飼養（將200mL水加入有鋸末的籠底，24 h）。

1.4 干預方法空白組：不給予任何處理。模型組：每日給予慢性應激刺激結合孤養。電針組：每天給予慢性應激刺激結合孤養，參照全國針灸學會實驗針灸研究會制定的《實驗動物針灸穴位圖譜》選取相當于人體解剖部位的百會穴和印堂穴，用華佗牌0.30mm×13mm毫針進行針刺，針柄接韓氏LH202型電針儀，于每日進行應激刺激前1 h進行電針，平刺進針，進針深度為0.5～1 cm，電針頻率為2 Hz，電流強度為1mA，每次20min，每日1次。氟西汀組：每天給予慢性應激刺激結合孤養，將鹽酸氟西汀以生理鹽水配制成1mg/mL質量濃度，按照2mg/kg體質量，灌胃給藥，每日1次。

1.5 行為學檢測行為學檢測采用敞箱試驗（openield test），底面為80 cm×80 cm×40 cm敞箱，內側周壁及底面均為黑色，底面用白線劃分為面積相等的25個等邊方格，周圍高40 cm。將大鼠置于中心方格內，實驗者距離大鼠1m以外，觀察大鼠5min內穿越格數（4爪均進入的方格方可記數）記為水平運動次數，后肢直立次數（2前爪騰空或攀附墻壁）記為垂直運動次數。每只動物實驗完成后徹底清洗敞箱內壁及底面，再進行下1只實驗。

1.6 標本采集與檢測應激21 d結束后，斷頭處死大鼠，取血5mL，在4℃，3000 r/min的條件下，離心15 min，-20℃保存待測。采用ELISA檢測大鼠血清活性腎素和血管緊張素Ⅱ水平。嚴格按照試劑盒說明操作。

1.7 統計學處理應用SPSS13.0統計軟件。數據以（±s）表示，組間差異采用單因素方差分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 各組大鼠敞箱試驗結果比較見圖1。圖1示大鼠應激前活動度水平相同（P＞0.05），應激刺激21 d后模型組水平運動及垂直運動均明顯減少，與空白組比較，水平運動及垂直運動均有顯著差異，說明造模成功（P＜0.05或0.01）。與模型組比較，氟西汀組與電針組明顯升高（P＜0.05或0.01），說明氟西汀和電針均具有抗抑郁作用。

2.2 各組大鼠血清活性腎素和血管緊張素Ⅱ的含量比較見表1。結果示與空白組比較，模型組大鼠血清中活性腎素水平升高（P＜0.01）；與模型組比較，氟西汀組和電針組大鼠血清中活性腎素水平明顯下降（P＜0.01）；與空白組比較，模型組大鼠血清中血管緊張素Ⅱ的水平升高（P＜0.05）；與模型組比較，氟西汀組和電針組大鼠血清中血管緊張素Ⅱ水平明顯下降（P＜0.05）；模型組與電針組的大鼠血清活性腎素水平和血管緊張素Ⅱ水平均無顯著差異（P＞0.05）。

圖1 各組大鼠敞箱試驗水平及垂直運動次數比較（±s，n=7）

表1 各組大鼠血清活性腎素和血管緊張素Ⅱ水平比較（±s）

表1 各組大鼠血清活性腎素和血管緊張素Ⅱ水平比較（±s）

組別n活性腎素血管緊張素Ⅱ空白組7 646.92±69.12 2.71±1.82模型組7 968.18±51.52**6.78±4.51*氟西汀組7 684.27±67.53△△3.25±1.81△電針組7 744.88±58.12△△3.73±2.26△

3 討論

RAS是一種類似的下丘腦-垂體-腎上腺皮質系統和交感-腎上腺髓質系統的應激激素反應系統。RAS主要包括各種酶（腎素、血管緊張素轉化酶、糜蛋白酶和氨基肽酶）、血管緊張素肽段、受體等。在血中，腎素有非活性和活性腎素兩種存在方式。體內循環中多達90％的腎素以非活性方式存在。然而，只有活性腎素能夠酶解血管緊張素原為血管緊張素Ⅰ，進而產生具有活性的血管緊張素Ⅱ。血管緊張素Ⅱ被認為是RAS的核心成分，通過與其特異的血管緊張素1型（AT1）受體結合，發揮多種生物學效應，包括強大的收縮血管、升高血壓、促進心肌肥大、成纖維細胞和血管平滑肌細胞增殖等作用。但是，如果血管緊張素Ⅱ產生過多，作用時間過長，會引起心血管組織細胞的損傷，最終導致動脈粥樣硬化、高血壓和心力衰竭等多種心血管疾病的發生發展［2］。

近年有報道表明，AngⅡ與抑郁、焦慮和認知功能有著密切的關系［3-7］。中醫學認為抑郁癥的主要病機是髓海虧虛、神機紊亂、臟腑陰陽氣血失調。印堂、百會為督脈穴位，督脈是諸陽經脈之總會，對整個經脈系統有統帥作用，與腦、脊髓等關系相當密切，歷代醫家素有“病變在腦，首取督脈”之說。此兩穴位于頭部，符合針灸治療的“經脈所過，主治所及”的取穴原則。另外，此二穴為臨床治療抑郁癥主穴，能調節髓海機能，使其紊亂的神機恢復正常，具有抗抑郁效果［8-11］。

本研究結果顯示，與空白組比較，模型組大鼠血清中活性腎素水平升高，模型組大鼠血清中血管緊張素Ⅱ的水平亦升高，這與臨床報道的抑郁患者血液血管緊張素Ⅱ水平升高的結果一致，大鼠在慢性應激刺激下，循環RAS出現過度激活。

與模型組比較，氟西汀組和電針組大鼠血清中活性腎素及血管緊張素Ⅱ水平明顯下降，針刺大鼠印堂、百會，可以調整過度激活的RAS系統，活性腎素和血管緊張素Ⅱ水平下降，其可能與其電針發揮抗抑郁作用，減少對大鼠機體刺激，降低了循環RAS系統的過度激活有關。

慢性不可預知性溫和應激模型結合孤養是國內外公認的復制抑郁模型大鼠的方式，本實驗結果顯示，抑郁模型大鼠的循環RAS系統被過度激活。近年大量的臨床及實驗室資料支持RAS與心血管疾病有關系，因此可以推斷，抑郁病與心血管疾病之間，RAS系統的過度激活發揮著重要的作用，具體的作用機制還有待深入研究。

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Effect of Chronic Stress Depression in Serum Active Renin and AngiotensinⅡand Effect of electro-

acupuncture in it

SONG Hong-tao，YAO Hai-jiang，MO Yu-ping，et al.School of Acupuncture-moxibustion and Tuina，Beijing University of Chinese Medicine，Beijing 100029，China

Objective：To observe the changes of serum active renin and AngiotensinⅡin chronicity stress depression model rat and the interference of electroacupuncture to them so as to explore the function of the reninangiotensin system between depression and cardiovascular disease.Methods：The chronic unpredictable mild stress combined with solitarily feedingmethod was used tomake the depression model.The locomotor activity of rats in blank control group，model control group，electro-acupuncture group and fluoxetine group were observed by open-field experiment.Serum active renin and AngⅡlevelswere determined by using enzyme-linked immunoabsorbent assay.Results：The cross and rear scores of the model group were significantly lower than those of the blank group，while electro-acupuncture and fluoxetine reversed it.Levels of active renin and AngⅡin serum in model group were higher than those in the control group.Electro-acupuncture and fluoxetine were obvious to improve those pathological changes.Conclusion：Circulatory pisma RASare activated excessive in chronicity stress depressionmodel rats.The electro-acupuncture and fluoxetine can improve those pathological changes.

Depression；Electro-acupuncture；RAS；Serum Active Renin；Rat腎素-血管緊張素系統（RAS）在維持血壓、水和電解質平衡及心血管系統穩態中發揮重要的作用，對心血管系統疾病的發生發展至關重要［1］。本研究觀察慢性應激抑郁模型大鼠血清活性腎素與血管緊張素Ⅱ的變化以及電針的干預作用，探討RAS在抑郁病與心血管疾病之間的關聯。

R285.5

A

1004-745X（2014）01-0001-03

10.3969/j.issn.1004-745X.2014.01.001

國家自然科學基金資助課題（81072860）

△通信作者

2013-09-16）