鴨源鼠傷寒沙門(mén)氏菌的分離鑒定及致病性觀察

2014-05-04 18:31:18蔡雙雙等

湖北農(nóng)業(yè)科學(xué) 2014年2期

蔡雙雙等

摘要：從湖北省黃陂地區(qū)肉鴨養(yǎng)殖場(chǎng)送檢病料中分離到2株疑似鴨沙門(mén)氏菌（Salmonella），經(jīng)普通培養(yǎng)基培養(yǎng)、生化試驗(yàn)、PCR鑒定、藥物敏感性試驗(yàn)，鑒定為鴨源鼠傷寒沙門(mén)氏菌，分別命名為HP-2和HP-3株。該菌對(duì)多種抗生素具有耐藥性，用分離鑒定的沙門(mén)氏菌HP-2株感染小鼠，小鼠全部死亡。經(jīng)皮下注射途徑感染13日齡雛鴨，致病性試驗(yàn)結(jié)果顯示，試驗(yàn)雛鴨死亡率達(dá)60%，引起纖維素性心包炎、纖維素性肝被膜炎和纖維素性肺炎，說(shuō)明此株沙門(mén)氏菌具有強(qiáng)致病性。藥物敏感性試驗(yàn)結(jié)果顯示，沙門(mén)氏菌HP-2和HP-3株對(duì)氯潔霉素、萬(wàn)古霉素、麥迪霉素、氧哌嗪青霉素、苯唑青霉素有耐藥性。

關(guān)鍵詞：鴨；沙門(mén)氏菌（Salmonella）；分離鑒定；致病性

中圖分類(lèi)號(hào)：S834 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：0439-8114（2014）02-0378-04

Identification and Pathogenicity of Salmonella typhimurium Isolated from Duckling

CAI Shuang-shuang1，YANG Xu2，ZHONG Xiao-li3，YANG Jun3，XIANG Yu3，GU Chang-qin3，

ZHANG Wan-po3，CHENG Guo-fu3，HU Xue-ying3

（1. Hubei Three Gorges Vocational and Technical College， Yichang 443000， Hubei， China；2. Animal Disease Prevention and Control Center in Enshi Prefecture of Hubei Province， Enshi 445000， Hubei， China；3. College of Veterinary Medicine， Huazhong Agricultural University， Wuhan 430070， China）

Abstract：Two suspected strains of Salmonella were isolated from the clinical samples of meat ducks belonging to a meat duck farm located in Huangpi District of Hubei province. By cultured on normal medium， biochemical test， PCR identification， animal regression， drug susceptibility test， the two strains were identified duck intestine as Salmonella typhimurium and named as HP-2 and HP-3. The two strains were resistant to multiple antibiotics. Mice were all dead after infected with the HP-2 strain. After subcutaneous infection of 13-days-old ducklings， it showed that the mortality could approach 60% and there were fibrinous pericarditis，fibrinous glissonitis and fibrinous pneumonia， indicating that the HP-2 strain was of serious pathogenicity. The results of drug susceptibility tests showed the HP-2 and HP-3 strains were resistant to clindamycin，vancomycin，mydecamycin，piperacillin and oxacillin.

Key words：duck； Salmonella； identification；pathogenicity

沙門(mén)氏菌（Salmonella）是一種重要的食源性細(xì)菌病病原，由于沙門(mén)氏菌存在著地域性、高發(fā)病率和大范圍的食物污染性等特點(diǎn)，成為了世界公共衛(wèi)生安全的關(guān)注重點(diǎn)[1]。人類(lèi)多是由于接觸或食用被污染的食物、水而感染沙門(mén)氏菌，而攜帶沙門(mén)氏菌的家禽的糞便、肉、蛋類(lèi)等成為重要的污染源。相對(duì)雞肉和雞蛋而言，鴨肉因其低脂肪和高蛋白組成，更有利于沙門(mén)氏菌的生存[2]。鴨獨(dú)特的生物學(xué)特性和生活習(xí)性往往使其成為隱性帶菌者，從而更加重了沙門(mén)氏菌對(duì)人類(lèi)的潛在危害，因此，對(duì)鴨沙門(mén)氏菌的研究具有重要意義。

沙門(mén)氏菌廣泛存在于環(huán)境中，可通過(guò)消化道、生殖道、呼吸道等多種途徑感染多種家禽、家畜，導(dǎo)致沙門(mén)氏菌病的暴發(fā)和流行[3，4]，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。鴨沙門(mén)氏菌病的報(bào)道并不多見(jiàn)，本試驗(yàn)從臨床疑似感染病鴨體內(nèi)分離到2株鴨沙門(mén)氏菌，并以分離的鴨沙門(mén)氏菌感染小鼠和雛鴨，觀察其致病性及致病特點(diǎn)，從而為鴨沙門(mén)氏菌病的診斷提供依據(jù)，有助于鴨沙門(mén)氏菌病的預(yù)防和控制。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物

湖北省黃陂地區(qū)肉鴨養(yǎng)殖場(chǎng)送檢疑似感染病鴨；1日齡櫻桃谷雛鴨20羽，購(gòu)自武漢市畜牧科學(xué)研究所；昆明小鼠20只，購(gòu)自中國(guó)科學(xué)院武漢病毒研究所實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.2 沙門(mén)氏菌的分離及初步鑒定

2 結(jié)果與分析

2.1 鴨沙門(mén)氏菌的分離及結(jié)果鑒定

細(xì)菌經(jīng)37 ℃培養(yǎng)18～24 h，在TSA培養(yǎng)基上形成圓形、隆起、表面光滑濕潤(rùn)、直徑大部分約1 mm、少部分2～3 mm的無(wú)色透明菌落。挑取菌落涂片做革蘭氏染色鏡檢，可見(jiàn)細(xì)菌為革蘭氏陰性短桿菌，無(wú)芽孢，單個(gè)或成雙排列。病料中共分離到2株細(xì)菌，分別命名為HP-2和HP-3。

2.2 生化試驗(yàn)結(jié)果

生化試驗(yàn)結(jié)果顯示分離的沙門(mén)氏菌HP-2和HP-3均對(duì)硫化氫、葡萄糖、山梨醇、枸櫞酸鹽、賴氨酸、鳥(niǎo)氨酸試驗(yàn)為陽(yáng)性；尿素、葡萄糖酸鹽、蛋白胨水、側(cè)金盞花醇、棉子糖、苯丙氨酸、木糖試驗(yàn)為陰性。MR試驗(yàn)陽(yáng)性，VP試驗(yàn)陰性。

2.3 藥敏試驗(yàn)結(jié)果

對(duì)分離的沙門(mén)氏菌進(jìn)行了藥敏試驗(yàn)，此次鴨場(chǎng)分離的沙門(mén)氏菌對(duì)氯潔霉素、萬(wàn)古霉素、麥迪霉素、紅霉素、氧哌嗪青霉素、苯唑青霉素、青霉素不敏感。而對(duì)氯霉素、痢特靈、復(fù)方新諾明、多年霉素B、奧復(fù)星、氟哌酸、美滿霉素、強(qiáng)力霉素、四環(huán)素、新霉素、卡那霉素、慶大霉素、丁胺卡那霉素、菌必治、復(fù)達(dá)欣、頭孢呋肟、先鋒霉素Ⅵ、先鋒霉素Ⅴ、先鋒霉素Ⅳ、羧芐青霉素、氨芐青霉素敏感。

2.4 鴨沙門(mén)氏菌的16S rRNA 的 PCR鑒定結(jié)果

HP-2和HP-3兩株細(xì)菌16S rRNA的PCR產(chǎn)物經(jīng)過(guò)凝膠電泳后發(fā)現(xiàn)兩株菌分別在750 bp處有特異性條帶。將擴(kuò)增到的沙門(mén)氏菌16S rRNA產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序，并進(jìn)行BLAST比對(duì)。該菌與腸道沙門(mén)氏菌腸道亞種鼠傷寒血清型（Acc： AP011957，F(xiàn)Q312003等）序列分別達(dá)到100%和99%相似性，表明2個(gè)菌屬同源性較高。結(jié)合培養(yǎng)特征，確定該菌為鼠傷寒沙門(mén)氏菌，分別命名為HP-2和HP-3株。

2.5 鴨沙門(mén)氏菌對(duì)小鼠的致病性

試驗(yàn)組小鼠于接種后12 h內(nèi)全部死亡，剖檢各臟器無(wú)明顯眼觀病變，死亡小鼠體內(nèi)分離到接種的沙門(mén)氏菌。

2.6 鴨沙門(mén)氏菌對(duì)雛鴨的致病性

2.6.1 試驗(yàn)雛鴨的發(fā)病情況及臨床癥狀雛鴨接種后1 d開(kāi)始出現(xiàn)有精神沉郁，腳軟喜臥，站立不穩(wěn)的癥狀；有的病鴨出現(xiàn)下痢，糞便呈水樣，肛門(mén)附近多有白色糊狀物。接種1 d就有試驗(yàn)鴨死亡，共死亡6羽，死亡率達(dá)60%。

2.6.2 試驗(yàn)雛鴨的眼觀病理變化試驗(yàn)組雛鴨可見(jiàn)心包、腹膜增厚，心包液、腹水增多，纖維素性滲出，甚至導(dǎo)致臟器粘連；肝臟表面有一層黃白色的纖維素附著，且肝被膜與胸壁、心臟，腹膜發(fā)生粘連（圖1）；膽囊充盈；脾臟腫大，表面暗紅色網(wǎng)格狀，布滿白色斑塊，呈花斑狀（圖2）；腦、胸腺、法氏囊、腎組織未見(jiàn)明顯病變。對(duì)照組各器官組織無(wú)明顯眼觀病理變化。

2.6.3 試驗(yàn)雛鴨的組織病理變化試驗(yàn)組雛鴨心外膜增厚，可見(jiàn)大量異嗜性粒細(xì)胞浸潤(rùn)，有纖維素性滲出，還可見(jiàn)肉芽腫結(jié)構(gòu)（圖3）出現(xiàn)；肝被膜增厚，呈漿液纖維素性滲出，肝組織有局灶性壞死，壞死處呈均質(zhì)無(wú)結(jié)構(gòu)狀；血管周?chē)g隙增寬，有炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；肺臟被膜增厚，呈漿液纖維素性滲出，有大量異嗜性粒細(xì)胞浸潤(rùn)（圖4），肺組織明顯淤血，血管周?chē)M織間隙增寬，血管周?chē)醒仔约?xì)胞圍繞；腎臟的腎小葉邊緣可見(jiàn)大量異嗜性粒細(xì)胞浸潤(rùn)聚集（圖5），間質(zhì)有輕微出血。對(duì)照組雛鴨各器官組織未見(jiàn)明顯組織病理變化。

3 小結(jié)與討論

本試驗(yàn)自湖北省黃陂地區(qū)肉鴨養(yǎng)殖場(chǎng)送檢病料中分離到2株疑似鴨沙門(mén)氏菌，經(jīng)細(xì)菌培養(yǎng)、生化試驗(yàn)、PCR鑒定、藥物敏感性試驗(yàn)，鑒定為鴨源鼠傷寒沙門(mén)氏菌，分別命名為HP-2和HP-3株。沙門(mén)氏菌有2 500多種血清型[5]，只有約10%分離自家禽。沙門(mén)氏菌的血清型分布具有地域性，而相同地區(qū)不同國(guó)家間的沙門(mén)氏菌血清型分布差別不大[6]。據(jù)報(bào)道鼠傷寒沙門(mén)氏菌和腸炎沙門(mén)氏菌是分離率最多的血清型[4]。不同血清型沙門(mén)氏菌的致病性、感染宿主范圍和對(duì)象不同，因此實(shí)驗(yàn)室以及診療機(jī)構(gòu)對(duì)沙門(mén)氏菌血清型的鑒定對(duì)疾病的治療尤為重要。

禽感染鼠傷寒沙門(mén)氏菌的許多病例有纖維素性肝周炎和心包炎，本試驗(yàn)分離的HP-2株人工感染雛鴨，感染雛鴨出現(xiàn)典型的心包炎和肝周炎的病變，表明該分離株的致病性強(qiáng)。在臨床病理診斷上，易與鴨大腸桿菌病、鴨疫里默氏桿菌病、鴨鏈球菌病相混淆[7-9]，因此應(yīng)做進(jìn)一步的細(xì)菌分離鑒定進(jìn)行確診。

近年來(lái)，由于養(yǎng)殖人員在養(yǎng)殖過(guò)程中為了預(yù)防某些疾病或是獲得短期治療效果往往濫用抗生素，導(dǎo)致沙門(mén)氏菌的耐藥現(xiàn)象越來(lái)越嚴(yán)重，甚至出現(xiàn)多重耐藥現(xiàn)象。通過(guò)藥敏試驗(yàn)發(fā)現(xiàn)此次分離到的2株沙門(mén)氏菌的藥敏性略有不同，可能是由于不同地區(qū)用藥不同而導(dǎo)致菌株藥敏性的變化。但這2株菌整體上的耐藥現(xiàn)象并不嚴(yán)重，對(duì)大多數(shù)藥物都極為敏感。沙門(mén)氏菌在環(huán)境中廣泛存在且存活時(shí)間長(zhǎng)，可通過(guò)多種途徑和方式感染多種畜禽及人類(lèi)，對(duì)養(yǎng)殖業(yè)造成巨大損失，對(duì)環(huán)境造成嚴(yán)重污染，對(duì)人的健康造成嚴(yán)重危害，故對(duì)其藥敏試驗(yàn)的研究有利于養(yǎng)殖場(chǎng)的正確用藥，以及時(shí)快速地控制病情的蔓延和發(fā)展，將損失降到最低。從長(zhǎng)遠(yuǎn)角度看，正確用藥也是生物安全的一種表現(xiàn)。

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