塞來(lái)昔布聯(lián)合長(zhǎng)效蘭瑞肽抑制人胃癌轉(zhuǎn)移體內(nèi)研究

田豐，張艷，盧磊

（自貢市第四人民醫(yī)院消化內(nèi)科，四川自貢 643000）

塞來(lái)昔布聯(lián)合長(zhǎng)效蘭瑞肽抑制人胃癌轉(zhuǎn)移體內(nèi)研究

田豐，張艷，盧磊

（自貢市第四人民醫(yī)院消化內(nèi)科，四川自貢 643000）

目的對(duì)胃癌患者予以術(shù)前口服塞來(lái)昔布聯(lián)合肌注長(zhǎng)效蘭瑞肽，探討該方案是否有助于抑制胃癌轉(zhuǎn)移。方法將2011年3月至2012年3月期間在自貢市第四人民醫(yī)院對(duì)經(jīng)組織學(xué)確診的40例胃癌擬行手術(shù)患者，根據(jù)患者自己的選擇，分為對(duì)照組和試驗(yàn)組。對(duì)照組20例，術(shù)前不使用塞來(lái)昔布及長(zhǎng)效蘭瑞肽，接受胃大部切除術(shù)或胃癌D2根治術(shù)；試驗(yàn)組20例，術(shù)前1周口服塞來(lái)昔布200 mg，qd 7 d，長(zhǎng)效蘭瑞肽40 mg，im，1次，接受胃大部切除術(shù)或胃癌D2根治術(shù)。通過(guò)檢測(cè)術(shù)后腫瘤組織中E-Cad和MMP-2量的變化及病理組織學(xué)變化進(jìn)行分析。結(jié)果對(duì)照組65%(13/20)的胃癌細(xì)胞E-Cad呈異常染色，試驗(yàn)組胃癌細(xì)胞E-Cad異常染色率為25%(5/20)，兩組比較差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.025)；對(duì)照組MMP-2陽(yáng)性染色率為80%，試驗(yàn)組MMP-2陽(yáng)性染色率為40%，試驗(yàn)組較對(duì)照組明顯降低，其差異也具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.022)。結(jié)論塞來(lái)昔布聯(lián)合長(zhǎng)效蘭瑞肽方案可在改善E-Cad表達(dá)、降低MMP-2方面具有抑制胃癌轉(zhuǎn)移的效果。

塞來(lái)昔布；蘭瑞肽；胃癌

手術(shù)是目前胃癌最主要的治療手段，但臨床資料表明，單純胃癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率高達(dá)50%～70%，大多數(shù)患者最終死于腫瘤復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。化療是目前圍手術(shù)期處理的主要治療方案，但副反應(yīng)大，部分患者難以耐受，且會(huì)抑制機(jī)體抗腫瘤免疫。近年研究[1-2]顯示，非細(xì)胞毒性藥物環(huán)氧合酶-2(Cyclooxygenase-2，COX-2)抑制劑塞來(lái)昔布聯(lián)合生長(zhǎng)抑素類似物奧曲肽可以協(xié)同抑制胃癌生長(zhǎng)轉(zhuǎn)移，且?guī)缀鯚o(wú)毒副作用，但奧曲肽半衰期短，需每日頻繁注射用藥，不便于臨床長(zhǎng)期應(yīng)用。本研究對(duì)胃癌患者予以術(shù)前口服塞來(lái)昔布聯(lián)合肌注長(zhǎng)效蘭瑞肽，通過(guò)檢測(cè)術(shù)后腫瘤組織中上皮性鈣黏附蛋白(Epithelial cadherin，E-Cad)、基質(zhì)金屬蛋白酶-2(Matrix metalloproteinase-2，MMP-2)量的變化，探討該方案是否有助于抑制胃癌轉(zhuǎn)移。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取2011年3月至2012年3月期間在自貢市第四人民醫(yī)院經(jīng)組織學(xué)確診的40例胃癌擬行手術(shù)患者。納入標(biāo)準(zhǔn)：無(wú)淺表淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及影像學(xué)轉(zhuǎn)移證據(jù)、術(shù)前未接受過(guò)放化療，近一個(gè)月未服用非甾體類抗炎藥，無(wú)消化道明顯梗阻及活動(dòng)性大出血，患者無(wú)消化系統(tǒng)及其他系統(tǒng)嚴(yán)重疾病。排除標(biāo)準(zhǔn)：對(duì)磺胺、塞來(lái)昔布及長(zhǎng)效蘭瑞肽過(guò)敏者，妊娠及哺乳期婦女。40例患者知情同意，以自愿原則自己選擇分為對(duì)照組和試驗(yàn)組。對(duì)照組20例，術(shù)前不使用塞來(lái)昔布及長(zhǎng)效蘭瑞肽，接受胃大部切除術(shù)或胃癌D2根治術(shù)；試驗(yàn)組20例，術(shù)前1周口服塞來(lái)昔布(Celecoxib，商品名：西樂(lè)葆，輝瑞制藥有限公司，美國(guó))200 mg，qd 7 d，長(zhǎng)效蘭瑞肽(Lanreotide，商品名：索馬杜林，博福-益普生公司，法國(guó))40 mg，im，1次，接受胃大部切除術(shù)或胃癌D2根治術(shù)。兩組在年齡、性別、腫瘤部位等方面具有可比性，見(jiàn)表1。

表1 兩組患者基本情況比較

1.2 標(biāo)本采集及檢測(cè)方法術(shù)中采集手術(shù)標(biāo)本，切除的胃癌組織經(jīng)10%福爾馬林液固定，石蠟包埋備用。用免疫組化法檢測(cè)胃癌組織E-Cad及MMP-2的表達(dá)，主要試劑包括：PV-9000免疫組化二步法試劑盒(北京中杉生物技術(shù)有限公司，北京，中國(guó))、E-Cad鼠抗人單抗?jié)饪s液(Zymed公司，舊金山，美國(guó))，MMP-2兔抗人單抗?jié)饪s液(Zymed公司，舊金山，美國(guó))，二氨基聯(lián)苯胺(DAB)顯色劑。二甲苯，梯度乙醇，蘇木精，中性樹(shù)膠等。

1.3 結(jié)果判斷

1.3.1 E-Cad結(jié)果判斷E-Cad免疫染色陽(yáng)性呈棕褐色，正常胃黏膜染色陽(yáng)性，呈連續(xù)的細(xì)胞膜染色；染色陰性或弱陽(yáng)性，不連續(xù)細(xì)胞膜染色，稱E-Cad異常染色。染色記分參照文獻(xiàn)[3]，0分：細(xì)胞膜、細(xì)胞質(zhì)均未染色；1分：細(xì)胞質(zhì)染色為主；2分：異質(zhì)性染色(細(xì)胞膜不連續(xù)染色、混有細(xì)胞質(zhì)染色)；3分：連續(xù)的細(xì)胞膜染色。同一切片，以主導(dǎo)染色為主，將不連續(xù)的細(xì)胞膜染色視為異常，即0～2分為異常染色，3分為正常染色。

1.3.2 MMP-2結(jié)果判斷免疫陽(yáng)性染色主要位于胃癌細(xì)胞質(zhì)內(nèi)，為棕黃色顆粒。根據(jù)Kim等[4]及Kabashima等[5]的方法，在低倍鏡下選擇主要染色區(qū)域，再在高倍鏡下(×400)對(duì)免疫組化染色陽(yáng)性反應(yīng)分級(jí)：(-)陽(yáng)性細(xì)胞＜10%；(+)10%～40%陽(yáng)性細(xì)胞、染色程度輕-中度；(++)40%以上陽(yáng)性細(xì)胞、染色程度中-重度。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法兩組E-Cad異常染色率以及MMP-2陽(yáng)性染色評(píng)分比較均采用四格表χ2檢驗(yàn)，使用SPSS15.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 兩組患者的E-Cad表達(dá)和染色評(píng)分比較對(duì)照組65%(13/20)的胃癌細(xì)胞E-Cad呈異常染色，試驗(yàn)組胃癌細(xì)胞E-Cad異常染色率為25%(5/20)，較對(duì)照組明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.645，P= 0.025)。兩組E-Cad染色及評(píng)分見(jiàn)圖1和表2。

圖1 對(duì)照組和試驗(yàn)組E-Cad表達(dá)比較（免疫組化染色）

表2 兩組E-Cad染色評(píng)分(例)

2.2 兩組患者的MMP-2免疫組化法染色比較對(duì)照組MMP-2陽(yáng)性染色率為80%，試驗(yàn)組MMP-2陽(yáng)性染色率為40%，試驗(yàn)組較對(duì)照組明顯降低，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(χ2=6.667，P=0.022)。兩組MMP-2表達(dá)見(jiàn)圖2，免疫組化染色陽(yáng)性反應(yīng)分級(jí)變化見(jiàn)表3。

圖2 對(duì)照和試驗(yàn)組MMP-2免疫組化法染色比較

表3 兩組MMP-2染色評(píng)分比較(例)

3 討論

臨床資料表明，單純胃癌根治術(shù)后復(fù)發(fā)轉(zhuǎn)移率高達(dá)50%～70%[6]，大多數(shù)患者最終死于腫瘤復(fù)發(fā)和遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。癌細(xì)胞的脫落、沖破細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜的屏障是胃癌細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移的重要環(huán)節(jié)。研究表明，手術(shù)本身可促進(jìn)癌細(xì)胞轉(zhuǎn)移[7]。因此，在胃癌確診后至手術(shù)前給予藥物，抑制胃癌細(xì)胞的遷襲能力，對(duì)改善患者的預(yù)后具有重要意義。

鈣粘附蛋白是一類主要介導(dǎo)細(xì)胞間同質(zhì)粘附的鈣依賴性跨膜糖蛋白。其中E-Cad是維持正常上皮完整性和極性的重要跨膜糖蛋白。當(dāng)E-Cad表達(dá)降低或表達(dá)異常時(shí)，細(xì)胞間粘附力降低，上皮組織完整性受到破壞，腫瘤細(xì)胞就易于脫離原發(fā)灶發(fā)生侵襲轉(zhuǎn)移。研究發(fā)現(xiàn)E-Cad的異常表達(dá)與腫瘤的侵襲和轉(zhuǎn)移有顯著的相關(guān)性[8-9]。本研究發(fā)現(xiàn)多數(shù)胃癌細(xì)胞漿內(nèi)E-Cad染色陽(yáng)性，細(xì)胞膜呈不連續(xù)染色，當(dāng)體內(nèi)應(yīng)用塞來(lái)昔布聯(lián)合長(zhǎng)效蘭瑞肽，明顯改善了胃癌細(xì)胞漿內(nèi)E-Cad的異常染色，胃癌細(xì)胞E-Cad陽(yáng)性染色呈連續(xù)細(xì)胞膜分布。提示本方案能顯著改善胃癌細(xì)胞E-Cad的表達(dá)，有助于防止癌細(xì)胞從原發(fā)灶脫落，降低其侵襲轉(zhuǎn)移能力。

MMPs是一組含有Zn2+、且能降解絕大多數(shù)細(xì)胞外基質(zhì)的肽鏈內(nèi)切酶，研究顯示腫瘤細(xì)胞可通過(guò)分泌大量IV型膠原酶MMP-2降解基質(zhì)[10-11]，突破基底膜，從而促進(jìn)侵襲轉(zhuǎn)移，MMP-2的高表達(dá)與腫瘤細(xì)胞的侵襲轉(zhuǎn)移具有顯著相關(guān)性。本研究發(fā)現(xiàn)塞來(lái)昔布聯(lián)合長(zhǎng)效蘭瑞肽顯著降低了胃癌細(xì)胞MMP-2表達(dá)陽(yáng)性率，提示本方案能抑制胃癌細(xì)胞MMP-2的合成，降低其降解基質(zhì)，突破基底膜能力，有助于抑制胃癌細(xì)胞侵襲轉(zhuǎn)移。

有研究對(duì)進(jìn)展期胃癌患者術(shù)前應(yīng)用塞來(lái)昔布聯(lián)合奧曲肽，發(fā)現(xiàn)其能明顯抑制人胃癌生長(zhǎng)及轉(zhuǎn)移[12]。本研究在此基礎(chǔ)上將短效生長(zhǎng)抑素類似物奧曲肽換為長(zhǎng)效生長(zhǎng)抑素類似物蘭瑞肽，在改善E-Cad表達(dá)、降低MMP-2等方面獲得同樣明顯的抗胃癌轉(zhuǎn)移的結(jié)果，但改用本方案可避免頻繁注射，減輕患者痛苦，降低治療費(fèi)用，提高患者依從性，便于臨床應(yīng)用。此外，胃癌術(shù)前化療方案如LFEP方案(順鉑，5-FU，表阿霉素，甲酰四氫乙酸)等均因毒副作用較大，患者不易耐受。相比之下，本方案無(wú)明顯不良反應(yīng)，患者依從性均良好。

盡管胃癌術(shù)前采用非細(xì)胞毒性藥物治療的遠(yuǎn)期效果還有待長(zhǎng)期的臨床觀察，優(yōu)化術(shù)前治療方案，有利于這一思路的臨床實(shí)施。

[1]黃茂濤,陳志新,魏兵,等.塞來(lái)昔布聯(lián)合奧曲肽抑制胃癌轉(zhuǎn)移的體內(nèi)試驗(yàn)研究[J].中華醫(yī)學(xué)雜志,2006,86(46):3255-3259.

[2]黃茂濤,陳志新,魏兵,等.塞來(lái)昔布聯(lián)合奧曲肽抑制人胃癌生長(zhǎng)的臨床研究[J].中華消化雜志,2005,9(25):534-538.

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Effect of celecoxib combined with long-acting lanreotide for inhibiting the metastasis of gastric caner.

TIAN Feng,ZHANG Yan,LU Lei.Department of Gastroenterology,the Forth People's Hospital of Zigong City,Zigong 643000, Sichuan,CHINA

ObjectiveTo investigate the effect of celecoxib combined with long-acting lanreotide for inhibiting the metastasis of gastric caner.MethodsForty gastric cancer patients diagnosed by biopsies from March 2011 to March 2012 in the Forth People's Hospital of Zigong City were divided into two groups,according to their choice.The control group(n=20)was treated with surgery only,while the study group(n=20)was treated with celecoxib(200 mg, qd 7 d)combined with long-acting lanreotide(40 mg,im)one week before surgery.The expression of E-Cad and MMP-2 in gastric cancer cells were evaluated by immunohistochemical methods.ResultsThe abnormal staining rate of E-Cad and the expression of MMP-2 in gastric cancer cells decreased significantly in the study group compared with those in control group[25%(5/20)vs 65%(13/20),P=0.025;40%vs 80%,P=0.022],with statistically significant difference between the two groups.ConclusionCelecoxib combined with long-acting lanreotide could reduce the abnormal expression rate of E-Cad and the synthesization of MMP-2 in gastric cancer cells,reducing the mobility of gastric cancer cells.

Celecoxib;Lanreotide;Gastric cancer

R735.2

A

1003—6350(2014)05—0636—03

10.3969/j.issn.1003-6350.2014.05.0249

2013-08-25)

田豐。E-mail：lcw261@163.com