太白貝母不同器官愈傷組織誘導培養研究

賈 晗，付紹智*，陳洪源，李琳莉，郭芳琴

(1.重慶三峽醫藥高等專科學校，重慶 萬州 404120；2.重慶三峽中藥研究所，重慶 萬州 404120；3.重慶綠萊生物科技有限公司，重慶 開縣 405400)

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太白貝母不同器官愈傷組織誘導培養研究

賈 晗1，2，付紹智1，2*，陳洪源1，2，李琳莉1，2，郭芳琴3

(1.重慶三峽醫藥高等專科學校，重慶 萬州 404120；2.重慶三峽中藥研究所，重慶 萬州 404120；3.重慶綠萊生物科技有限公司，重慶 開縣 405400)

分別選用不同生長年齡的太白貝母鱗莖、種子和幼嫩葉片為實驗材料，探索研究不同濃度6-BA與NAA組合對其不同器官的愈傷組織誘導和不定芽的發生情況。結果表明，不同濃度6-BA與NAA組合對太白貝母種子的誘導發芽效果差別不大；MS+NAA 1.0mg/L +6-BA 6mg/L的配方較適合太白貝母鱗片分化；MS+NAA 1.0mg/L +6-BA 2mg/L的配方較適合太白貝母幼葉分化。

太白貝母；組織培養；實驗研究

太白貝母(FritillariataipaiensisP.Y. Li.)為百合科貝母屬多年生草本植物，以3～5年生植物地下鱗莖入藥，是2010年版《中國藥典》川貝母藥材新收載的基源品種之一[1]。近年來，川貝母的需求量不斷增加，其價格一路飆升，但由于川貝母的主要來源暗紫貝母對氣候、溫度、土質等生長環境條件要求特殊，人工栽培很困難，商品藥材全靠采挖野生資源，過度采挖造成資源日趨減少并面臨枯竭[2]。為了滿足市場對川貝母的需求，課題組開展了對三峽地區地產藥材太白貝母不同組織的誘導培養實踐，探索太白貝母的組培技術，為其快速繁育和種苗工廠化生產提供技術參考。

國內外有關貝母類鱗莖組織培養方面的研究很多，但有關太白貝母的組織培養技術研究報道比較少。為探索太白貝母組織培養的方法，課題組分別選用了不同生長年齡的太白貝母鱗莖、種子和幼嫩葉片為實驗材料，研究不同濃度6-BA與NAA組合對其不同器官的愈傷組織誘導和不定芽的發生情況，期望能夠為太白貝母產業化生產提供一定的參考價值。

1 材料與方法

1.1 供試材料

采集自重慶市巫溪縣蘭英鄉黃草坪太白貝母種植基地的6年生種子，2～4年生的太白貝母(FritillariataipaiensisP.Y. Li.)新鮮鱗莖及幼嫩葉片。

1.2 實驗方法

分別將太白貝母的新鮮鱗莖、成熟種子及幼嫩葉片經過消毒處理后，接種至不同激素及濃度組合的培養基上進行培養，觀察其愈傷組織的形成及分化情況。

1.3 培養基配制

以MS為基礎培養基，初代培養基和增殖培養基添加蔗糖40g/L，瓊脂4.5%，pH值為5.8，分別按照不同比例添加6-BA、NAA、KT等植物生長調節劑，L-半胱氨酸、VC等抗褐化有機物以及活性炭。所有培養基均在121℃條件下高壓滅菌20min。

1.4 供試材料處理

1.4.1 鱗莖處理 取無病蟲害的太白貝母鱗莖，去掉最外面一層腐爛、褐化的鱗片，再將根系切除。先用清水沖洗去鱗莖表面的泥土，然后將鱗瓣剝離，放入稀的洗潔精溶液中浸泡10min，流水沖洗10～15min，之后轉入超凈工作臺，先用70%酒精浸泡2～3min，無菌水清洗3～4次，浸入0.1%升汞液8～10min，無菌水沖洗7～8次，之后用無菌刀片將鱗莖切成5mm左右厚度的小片備用。

1.4.2 種子處理 取新采收的太白貝母種子300粒，先用70%酒精浸泡2min，無菌水清洗3次，之后浸入0.1%升汞液8～10min，無菌水沖洗7～8次，濾干水分備用。

1.4.3 嫩葉處理 取新長出的太白貝母嫩葉若干，先用自來水洗凈，再用稀的洗潔精溶液浸泡10min，流水沖洗10min，之后用75%酒精處理葉片30s，無菌水沖洗3次，無菌濾紙吸干水分后，用無菌剪刀剪成1～2mm寬的小片備用。

1.5 愈傷組織誘導培養

分別將無菌處理后的太白貝母鱗片、種子和嫩葉接種于不同激素配比組合的培養基上，培養條件為光強1 000lux，溫度20℃，光照10h。接種10d后統計污染率，45d后統計愈傷組織誘導率。

2 結果與分析

由于接種后，外植體感染率在50%以上，為了體現實際誘導效果，在計算發芽率時，將感染的外植體剔除后進行計算，計算公式：出芽率=[出芽外植體數/(接種外植體總數-感染外植體數)]×100%。

2.1 不同濃度6-BA與NAA組合對太白貝母新鮮鱗莖誘導效果

經過查閱相關文獻資料，選擇以下不同濃度6-BA與NAA組合進行太白貝母鱗莖的愈傷組織誘導，結果見表1、圖1。

表1 不同濃度6-BA與NAA組合對太白貝母鱗莖愈傷組織誘導效果

圖1 不同濃度6-BA與NAA組合對太白貝母麟莖愈傷組織誘導效果比較

從表1和圖1可以看出，1mg/L NAA與6mg/L 6-BA組合對太白貝母鱗莖的愈傷組織誘導效果較好，但在愈傷組織形成的同時，總計55.6%以上的接種組織出現了細菌感染，使后續的轉代培養無法繼續進行。

2.2 不同濃度6-BA與NAA組合對太白貝母種子誘導效果

經過查閱相關文獻資料，選擇以下不同濃度6-BA與NAA組合進行太白貝母種子的發芽誘導，結果見表2、圖2。

表2 不同濃度6-BA與NAA組合對太白貝母種子誘導效果

圖2 不同濃度6-BA與NAA組合對太白貝母種子誘導效果比較

從表2和圖2可以看出，不同濃度6-BA與NAA組合對太白貝母種子的誘導發芽效果差別不大。在愈傷組織形成的同時，總計57.3%以上的接種組織出現了細菌感染，使后續的轉代培養無法繼續進行。

2.3 不同濃度6-BA與NAA組合對太白貝母幼葉的誘導效果

經過查閱相關文獻資料，選擇以下不同濃度6-BA與NAA組合進行太白貝母幼葉的愈傷組織誘導，結果見表3、圖1。

表3 不同濃度6-BA與NAA組合對太白貝母幼葉的愈傷組織誘導效果

圖3 不同濃度6-BA與NAA組合對太白貝母幼葉愈傷組織誘導效果比較

從表3和圖3可以看出，1mg/L NAA與2mg/L 6-BA組合對太白貝母幼葉的愈傷組織誘導效果較好，分化出的不定芽葉色濃綠，葉片展開，芽健壯。但在愈傷組織形成的同時，55.4%的接種組織出現了細菌感染，使后續的轉代培養無法繼續進行。

3 討論

經過探索實驗，發現不同濃度6-BA與NAA組合對不同太白貝母器官的愈傷組織誘導效果不同。由表1可知，隨著6-BA濃度提高，鱗片的分化率也隨之提高，當6-BA濃度由2mg/L增加至6mg/L時，其出芽率達到最高；由表2可知，不同濃度6-BA與NAA組合對太白貝母種子的誘導發芽效果差別不大；由表3可知，隨著6-BA濃度提高，幼葉的分化率反而出現下降。因此，通過本組試驗對比，分別得出適合太白貝母鱗片分化的優化組合為MS+NAA1.0mg/L +6-BA 6mg/L；適合太白貝母幼葉分化的優化組合為MS+NAA 1.0mg/L +6-BA 2mg/L。但是，由于愈傷組織培養到后期，感染率非常大，所以后續的轉代培養未能進行。分析原因，可能是太白貝母鱗莖內存在某種內生細菌，在培養時出現了大量增殖，影響到愈傷組織的形成，這有待于進一步探索研究。

[1] 姜榮蘭，張天佑，王健生，等.川貝母主流品種原植物的地理分布及藥材研究[J].四川中草藥研究，1992(33-34):18

[2] 李隆云,周裕書,代敏,等.暗紫貝母鱗莖再生組織培養技術研究[J].中國中藥雜志,1995,20(2):78.

[3] 高山林,朱丹妮,等.暗紫貝母鱗莖器官培養生長特征和生物堿積累的研究[J].中國藥科大學學報,1992,23(3):144-147.

[4] 陳敏,陳和榮,鐘鳳林,等.川貝母組織培養的研究[J].中國中藥雜志,1995,20(8):414.

[5] 朱丹妮,蔣瑩,陳婷,等.組織培養川貝母化學成分和藥理作用的研究[J].中國藥科大學學報,1992,23(2):118-121.

[6] 余世春,肖培根.暗紫貝母生物堿成分研究[J].植物學報,1990,32(12):929-935.

[7] 高山林,夏艷,潭豐蘋.組織培養暗紫貝母的藥理作用[J].植物資源與環境學報,2000,9(1):4-8.

(責任編輯：魏 曉)

2014-06-17

重慶市教委科學技術研究項目(KJ092104)

賈晗(1984-)，女，重慶三峽醫藥高等專科學校講師，研究方向為藥用植物資源學、中藥科普等。

付紹智(1965-)，男，重慶三峽醫藥高等專科學校副教授，研究方向為中藥資源開發利用。E-mail：fushaozhi@sina.com。

S567.231

A

1673-2197(2014)19-0011-03