2010—2011年蚌埠市手足口病的病原學(xué)檢測分析

【摘要】 目的 對(duì)2010——2011年蚌埠市哨點(diǎn)醫(yī)院手足口病病原進(jìn)行檢測分析，以調(diào)查本地區(qū)手足口病流行情況。為手足口病的綜合防治提供參考資料。方法 收集哨點(diǎn)醫(yī)院2010——2011年送檢的手足口病病例咽拭子標(biāo)本，應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)檢測手足口病病原（腸道病毒7l型、柯薩奇病毒A組16型）。結(jié)果 2010年共檢測332份咽拭子標(biāo)本，陽性101份，陽性率30.42%，分別是腸道病毒71型55份，柯薩奇A組16型46份；2011年檢測447份咽拭子標(biāo)本，陽性215份，陽性率48.08.%，腸道病毒71型200份，柯薩奇A組16型15份。結(jié)論 腸道病毒71型是2011年蚌埠市手足口病流行的主要病原。

【關(guān)鍵詞】 手足口病；實(shí)時(shí)熒光定量PCR；腸道病毒71型；柯薩奇病毒A組16型

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2014.04.603

文章編號(hào)：1004-7484（2014）-04-2289-02

【Abstract】Objective To investigate the pathogen of hand-foot-mouth disease（HFMD）in Bengbu city.Methods Specimen of throat swabs of HFMD cases were collected from the sentinel hospital from 2010 to 2011.Nucleic acids In three type，which were enterovirus71（EV71），enterovirus coxasckie virus A16（CA16）and universal enterovirus（EV）were detected by real-time-PCR.Result Among 332 cases in 2010，101 were positive including 55 strains of EV71 and 46 strains of CVAl6 respectively.positive rate is 30.42%；Among 447 cases in 2011，all 215 were positive including 200 strains of EV71 and 15 strains of CVAl6 respectively.positive rate is 48.08%.Conclusion s EV71 was the major pathogens for the epidemic of HFMD in the sentinel hospital in Bengbu city.

【Key words】 Hand-foot-mouth disease（HFMD）；Real-time-PCR；Enterovirus71（EV71）；Enterovirus coxasckie virus A16（CA16）

手足口病（HFMD）是一種常見于5歲以下的兒童急性傳染病，其臨床癥狀主要表現(xiàn)為發(fā)熱和手、足、口等部位的皮疹、皰疹，伴或不伴口腔潰瘍，病情嚴(yán)重者可引起心肌炎、肺水腫、無菌性腦膜腦炎等致命性并發(fā)癥。手足口病病原為小RNA科、腸道病毒屬的一些不同血清學(xué)腸道病毒，包括柯薩基病毒A組4、5、7、9、10、16型以及B組2、5型，埃可病毒和腸道病毒71型，其中以柯薩基病毒A組16型和腸道病毒71型最為常見[1]。其傳染性強(qiáng)，常引起爆發(fā)性流行。2008年3月安徽阜陽市發(fā)生手足口病大規(guī)模流行[2]，使本病得到空前的重視，為了解2010——2011年蚌埠市HFMD的流行病學(xué)和病原學(xué)特征，本研究對(duì)轄區(qū)內(nèi)哨點(diǎn)醫(yī)院采集的HFMD患兒的咽拭子標(biāo)本應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR進(jìn)行了病原學(xué)檢測，現(xiàn)將檢測結(jié)果報(bào)告如下。

1 材料與方法

1.1 標(biāo)本來源 2010——2011年，蚌埠市市轄三縣四區(qū)各哨點(diǎn)醫(yī)院每月送檢的手足口病患兒咽拭子標(biāo)本，2010年332份；2011年447份。具體哨點(diǎn)醫(yī)院分別是：龍子湖區(qū)為蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院；蚌山區(qū)為蚌埠市第三人民醫(yī)院；禹會(huì)區(qū)、淮上區(qū)為蚌埠市第一人民醫(yī)院；懷遠(yuǎn)縣為懷遠(yuǎn)縣一院和懷遠(yuǎn)縣二院；五河縣為五河縣醫(yī)院；固鎮(zhèn)縣為固鎮(zhèn)縣醫(yī)院。診斷標(biāo)準(zhǔn)參照《手足口病診療指南（2010年版）》，樣本采集運(yùn)送及儲(chǔ)存均按《手足口病診療指南（2010年版）》的要求操作。

1.2 儀器和試劑 ABI7300型實(shí)時(shí)熒光定量PCR基因擴(kuò)增儀（ABI公司美國）。RNA提取試劑盒（Rneasy Mini Kit，Cat No.74104）購自QIAGEN公司；腸道病毒（EV）通用型、柯薩基病毒A組16型和腸道病毒71型核酸檢測試劑盒購自北京金豪公司；嚴(yán)格按試劑說明書操作，效期內(nèi)使用。

1.3 方法

1.3.1 病毒RNA的提取 采用QIAGEN公司的Rneasy mini Kit，按照試劑盒說明書操作。最終收集RNA提取液40微升。

1.3.2 實(shí)時(shí)熒光定量PCR反應(yīng) 在ABI7300型實(shí)時(shí)熒光定量PCR基因擴(kuò)增儀上進(jìn)行PCR擴(kuò)增，反應(yīng)總體積為25微升，反應(yīng)程序?yàn)椋荒孓D(zhuǎn)錄及變性50℃30分鐘，95℃1分鐘；預(yù)擴(kuò)增95℃15秒，50℃30秒，72℃1分鐘，5個(gè)循環(huán)；擴(kuò)增及熒光收集95℃10秒，55℃40秒，40個(gè)循環(huán)。同時(shí)設(shè)置陽性梯度模板和陰性對(duì)照。結(jié)果判定嚴(yán)格按照ABI7300儀器操作說明書和PCR檢測試劑盒說明書進(jìn)行。

1.3.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS13.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)處理。

2 結(jié) 果

檢測結(jié)果見表1、表2、表3。

3 討 論

HFMD在全球范圍內(nèi)廣泛流行，是嬰幼兒時(shí)期的常見傳染病，1958年最先發(fā)現(xiàn)CA16為HFMD病原體，1969年首次分離出EV71。此后CA16和EV71一直作為HFMD的主要病原出現(xiàn)于報(bào)道之中。在我國，1981年上海市首次報(bào)道HFMD，此后各地報(bào)道逐漸增多。2008年5月衛(wèi)生部將本病列入我國法定丙類傳染病，嚴(yán)格了HFMD的報(bào)告與管理。據(jù)2010年衛(wèi)生部統(tǒng)計(jì)數(shù)據(jù)，在丙類傳染病中，2009年HFMD報(bào)告發(fā)病數(shù)和報(bào)告死亡數(shù)均躍居首位，HFMD業(yè)已成為危害我國兒童健康的重要公共衛(wèi)生問題。

實(shí)時(shí)熒光定量PCR技術(shù)是新興的針對(duì)病原體核酸的快速檢測技術(shù)，該方法具有定量檢測、快速、靈敏度高、特異性強(qiáng)以及自動(dòng)化程度高的特點(diǎn)，使基因擴(kuò)增和產(chǎn)物分析全過程都在封閉條件下進(jìn)行，實(shí)現(xiàn)了實(shí)時(shí)監(jiān)測和自動(dòng)分析，從根本上解決了傳統(tǒng)PCR檢測過程中產(chǎn)物易受污染和不能定量的問題。

本研究結(jié)果顯示，蚌埠市HFMD病原2010年為EV71和CA16交替出現(xiàn)，而2011年則EV71為占絕對(duì)優(yōu)勢流行株（93.02%）。EV71感染性強(qiáng)，除引發(fā)和CoxAl6相似的手足口癥狀外，還可引起嚴(yán)重的神經(jīng)系統(tǒng)并發(fā)癥，如腦膜炎、腦炎、弛緩性癱瘓等。2008年全國監(jiān)測數(shù)據(jù)顯示，96%以上的實(shí)驗(yàn)室確診死亡病例由EV71感染引起[3]。本研究EV71高檢出率的結(jié)果與國內(nèi)北京、上海、浙江、湖南等地的報(bào)道結(jié)果一致[4-7]，提示EV71是國內(nèi)近年來HFMD流行的主要病原體。

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