注射用水溶性維生素中葉酸、生物素含量測定方法學研究

【摘要】 目的 建立水溶性維生素中葉酸、生物素的含量測定方法。方法 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，磷酸二氫鉀緩沖液-乙腈（93：7）用磷酸調節pH值至3.0為流動相，流速為1.5ml/min，柱溫30℃，檢測波長為200nm。結果 葉酸在濃度為6.09μg/ml-30.47μg/ml、生物素在濃度為1.01μg/ml-5.06μg/ml的范圍內，具有良好的線性關系，葉酸平均回收率為99.60%，生物素平均回收率為99.52%。結論 該方法專屬性良好、準確度高、耐用性好、具有良好的穩定性。適合作為水溶性維生素中葉酸、生物素的含量測定方法。

【關鍵詞】 含量測定；水溶性維生素；葉酸；生物素

doi：10.3969/j.issn.1004-7484（x）.2014.04.089

文章編號：1004-7484（2014）-04-1883-03

1 資料與方法

1.1 儀器 高效液相色譜儀（島津LC-10ATvp溶劑輸送泵與島津SPD-10Avp紫外-可見檢測器），配有LC-solutionlite色譜工作站。

1.2 色譜條件與系統適用性試驗

1.2.1 色譜條件 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填料，磷酸二氫鉀緩沖液[精密稱取磷酸二氫鉀（KH2PO4F）2.27g和磷酸0.96g，加水溶解并稀釋至5000ml-乙腈（93∶7）用磷酸調節pH值至3.0為流動相，流速為1.5ml/min，柱溫30℃，檢測波長為200nm，各組分分離度應符合要求。

1.2.2 系統適用性試驗

1.2.2.1 空白干擾試驗 分別取樣品1瓶與空白輔料適量（相當于1瓶藥劑的重量），分別用水定量稀釋并轉移至25ml容量瓶中，即得。分別量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。結果：輔料不干擾葉酸、生物素的含量測定。

1.2.2.2 葉酸、生物素對照品峰定位 取葉酸對照品約32mg、生物素對照品約12mg，精密稱定，分別置100ml容量瓶中，葉酸用（2mmol/L）氫氧化鈉溶液溶解并稀釋至刻度，生物素用乙醇∶水（1∶3）混合液溶解并稀釋至刻度，作為對照品母液。

精密量取上述葉酸對照品母液5ml，生物素對照品母液2ml分別置100ml容量瓶中，加水至刻度，即為對照品溶液。

取上述溶液各20μl注入液相色譜儀。結果：葉酸的保留時間為18.427分鐘，生物素的保留時間為20.694分鐘。

1.2.2.3 葉酸、生物素分離度與理論塔板數測定 取供試品1瓶，加水溶解并稀釋至25ml，搖勻，量取20μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖，見表1。

結論：葉酸在濃度為6.09μg/ml-30.47μg/ml、生物素在濃度為1.01μg/ml-5.06μg/ml的范圍內，具有良好的線性關系，具有良好的穩定性，專屬性良好、準確度高、耐用性好、適合作為水溶性維生素中葉酸、生物素的含量測定方法。

參考文獻

[1] 國家藥典委員會.中華人民共和國藥典（二部）[M].中國醫藥科技出版社，2010：137.

[2] YBH07992003，國家藥品標準[S].