不同激素濃度配比對蘿卜愈傷組織形成的影響

摘要：以蘿卜直根形成層為試驗材料，比較不同激素NAA、2，4-D和6-BA濃度配比對蘿卜外植體形成愈傷組織誘導率和質量的影響。結果表明：（1）與不添加任何激素相比，不同激素濃度配比對蘿卜愈傷組織誘導效果明顯。（2）6-BA分別與NAA、2，4-D配比誘導蘿卜愈傷組織的比較表明，2，4-D較NAA更適于誘導蘿卜愈傷組織。（3）6-BA與2，4-D濃度均為0.050～0.075 mg/mL的配比對蘿卜愈傷組織誘導效果最好。

關鍵詞：蘿卜；激素；直根；愈傷組織；誘導率

中圖分類號： Q943.1；S631.104+.3 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）07-0060-03

收稿日期：2014-04-01

基金項目：發酵資源與應用四川高校重點實驗室項目（編號：2012KFJ002）；宜賓學院青年基金（編號：2012Q14）。

作者簡介：胡偉（1981—），男，寧夏吳忠人，碩士，講師，主要從事有機農業及作物生產系統模擬與決策研究。E-mail：wh_1981225@163.com

通信作者：陳豫，博士，副教授，主要從事農村沼氣及生態農業研究。E-mail：chenyu@nwsuaf.edu.cn。蘿卜（Raphanus sativus）是中國主要的大眾化蔬菜作物之一，在民間有“小人參”之美稱，具有較高的食用價值和醫用價值。蘿卜采用常規育種手段需時長且勞動強度大，通過組織培養能夠大量擴繁原種，并能更好地保持蘿卜良種的性狀。關于蘿卜組織培養的研究，國內外都有大量報道[1-9]，但大多數研究中應用的激素種類比較單一，外植體的類型從蘿卜的帶柄子葉、子葉、下胚軸、花藥等進行研究，但未涉及外植體蘿卜根部對愈傷組織的影響。本試驗旨在研究不同激素濃度配比下，以蘿卜根部形成層為外植體進行愈傷組織的培養，分析不同激素配比對蘿卜愈傷組織形成的影響及愈傷組織的生長情況，找出蘿卜組織培養過程中適宜的激素配比濃度范圍，為蘿卜的組培技術提供理論參考。

1材料與方法

1.1試驗材料

選用生長健壯、體型勻稱、表面無傷痕的市場銷售的新鮮蘿卜。試驗所用的3種激素為分裂素6-BA（6-芐氨基嘌呤）和生長素2，4-D（2，4-二氯苯氧乙酸）、NAA（萘乙酸）。

1.2試驗方法

1.2.1誘導培養基的配制在MS培養基中添加3%蔗糖、0.8%瓊脂和不同激素濃度配比（表1），作為本試驗誘導愈傷組織的培養基。配制好培養基后，用0.1 mol/L的NaOH或0.1 mol/L的HCl溶液在滅菌前將培養基pH值調至5.8～60，然后將培養基分裝到100 mL的三角培養瓶中，用封口膜封好瓶口，在121 ℃下濕熱滅菌30 min，滅菌后冷卻待用。

1.2.2愈傷組織的誘導用自來水將蘿卜直根表面污物沖洗干凈，用小刀切成小段放入燒杯中。先用75%乙醇對蘿卜小段消毒5 min，用無菌吸水紙吸干，再用0.2%氯化汞溶液消毒3 min，放入無菌水中漂洗2～3次，用無菌吸水紙吸干。在無菌操作臺上操作，把消毒好的蘿卜直根放入無菌培養皿中，用消毒好的解剖剪將蘿卜的形成層切成0.5 cm3左右的小塊，置于含有不同激素濃度配比的愈傷組織誘導培養基上，25 ℃暗培養，無需光照。外植體培養每隔3～5 d觀察1次，并記錄蘿卜切塊愈傷組織的產生情況，25～30 d后統計誘導率，計算公式如下：誘導率=形成愈傷組織的外植體數/接種的外植體數×100%。

2結果與分析

2.1不添加任何激素時蘿卜愈傷組織的誘導率

在不添加任何激素的MS培養基上，蘿卜愈傷組織誘導率為6%，且愈傷組織出現的時間較晚，大約為19 d，其形態為白色疏松狀（表2）。

2.2不同濃度6-BA和NAA配比對蘿卜愈傷組織誘導率的影響

由表2（MS2至MS17）可以看出，無菌根形成層接種到不同濃度6-BA和NAA配比的MS培養基中，大部分培養基上的根在接種后4 d少部分膨大，1周后全部膨大，大多數外植體在14 d后開始出現愈傷組織，愈傷組織顏色為淡黃色，質地較為緊密。與不添加任何激素相比，蘿卜愈傷組織誘導率有了明顯的提高，且愈傷組織出現的時間縮短了5 d。當 6-BA 和NAA濃度均為0.025 mg/mL時其誘導率最低，為20%；當NAA為0.075 mg/mL、6-BA濃度為0.1 mg/mL時，愈傷組織誘導率最高，為31%。同時可以看出，6-BA和NAA配比下，當NAA濃度不變時，隨著6-BA濃度增大，蘿卜愈傷組織的誘導率明顯增大。

2.3不同濃度6-BA和2，4-D配比對蘿卜愈傷組織誘導率的影響

由表2（MS18至MS33）可以看出，添加不同濃度6-BA與2，4-D配比的MS培養基對蘿卜外植體進行培養，大約在10 d后開始出現愈傷組織，愈傷組織顏色為淡黃色，質地較為緊密。與不添加任何激素相比，蘿卜愈傷組織誘導率有了明顯的提高，且愈傷組織出現的時間縮短了9 d。當6-BA和2，4-D濃度均在0.050～0.075 mg/mL時，愈傷組織誘導率在40%以上，在此范圍內，隨著激素濃度的升高，誘導率也隨之升高；但超過其濃度臨界點以后，誘導率隨著激素濃度的升高有一定下降。

變更加嚴重[16]。李冬杰等研究紅豆杉細胞培養中的褐化問題時，認為細胞分裂素類中6-BA有刺激多酚氧化酶（POO）活性提高、加重褐變的作用[17]。

本試驗以蘿卜的根為外植體，6-BA分別與NAA、2，4-D配比誘導蘿卜愈傷組織，研究表明2，4-D較NAA更適于誘導蘿卜愈傷組織，且當6-BA和2，4-D濃度均在0050～0.075 mg/mL時，愈傷組織誘導效果最好。本研究結果與龍雯虹等[18]不同，可能是由供試材料的基因型和外植體的不同引起的，可見，蘿卜愈傷組織的再分化仍然是一個需努力探索的問題。

參考文獻：

[1]Jeong W J，Min S R，Liu J R. Somatic embryogenesis and plant regeneration in tissue cultures of radish（Raphanus sativus L.）[J]. Plant Cell Reports，1995，14（10）：648-651.

[2]Pua E C，Sim G E，Chi G L. Synergistic effect of ethylene inhibitors and putrescine on shoot regeneration from hypocotyl explants of Chinese radish（Raphanus sativus L. var. longipinnatus Bailey）in vitro[J]. Plant Cell Report，1996，15（9）：685-690.

[3]武劍，龔義勤，鄧波，等. 蘿卜雄性不育組織培養的研究[J]. 貴州農業科學，2003，31（5）：8-11.

[4]張麗，趙秋菊，付傳翠，等. 蘿卜花藥培養技術研究[J]. 華北農學報，2006，21（6）：55-58.

[5]王紹輝，高遐虹，程繼鴻，等. 蘿卜花藥愈傷組織誘導及褐變因素初探[J]. 中國農學通報，2008，24（11）：350-354.

[6]熊秋芳，張雪清，駱海波，等. 蘿卜組織培養的研究與應用[J]. 長江蔬菜，2006（5）：36-38.

[7]龍雯虹，楊榮萍，王建飛，等. 蘿卜誘導愈傷組織較適外植體及激素的篩選[J]. 河南農業科學，2006（2）：93-95.

[8]王輝，田義軻，劉維信，等. 蘿卜組織和器官的離體培養[J]. 青島農業大學學報：自然科學版，2009，26（2）：109-112.

[9]龍雯虹，許彬，張麗萍，等. 蘿卜誘導愈傷組織的影響因素[J]. 西南農業大學學報：自然科學版，2006，28（1）：131-133，138.

[10]姜靈敏，徐有明，張冬梅，等. 紅刺玫愈傷組織誘導再生體系的建立[J]. 江蘇農業學報，2012，28（4）：914-916.

[11]劉浩，李勝，馬紹英，等. LED不同光質對蘿卜愈傷組織誘導、增殖和蘿卜硫素含量的影響[J]. 植物生理學通訊，2010，46（4）：347-350.

[12]余桂紅，張旭，孫曉波，等. 大麥蘇啤4號幼胚愈傷組織的誘導及植株的高頻再生[J]. 江蘇農業學報，2013，29（5）：953-956.

[13]周玲艷，秦華明，梁紅，等. 胡蘿卜再生體系的建立[J]. 農業與技術，2005，25（3）：94-95.

[14]張寧寧，夏明霞，張瓊，等. 卡特蘭組織培養研究進展[J]. 江蘇農業科學，2013，41（4）：42-44.

[15]王玲，李勇軍，房亞南，等. 魔芋組織培養的一步成苗技術研究[J]. 西南農業學報，2004，17（5）：636-638.

[16]張海蘭，林曉佳，趙博光. 激素對黑松愈傷組織褐變和增殖的作用[J]. 山東農業大學學報：自然科學版，2002，33（4）：413-417.

[17]李冬杰，張進獻，魏景芳，等. 培養基和培養條件與紅豆杉細胞培養中褐化的關系[J]. 植物生理學通訊，2005，41（1）：95-98.

[18]龍雯虹，許 彬，張麗萍，等. 蘿卜誘導愈傷組織的影響因素[J]. 西南農業大學學報：自然科學版，2006，28（1）：131-133，138.