正交試驗篩選平田頭菇菌絲體液體培養(yǎng)基

摘要：采用正交試驗對平田頭菇菌絲體液體培養(yǎng)基進行篩選。結果表明，平田頭菇菌絲體液體培養(yǎng)基最佳配方是25 g/L葡萄糖、250 g/L馬鈴薯（浸提液）、40 g/L麥麩（浸提液）、4 g/L蛋白胨、5 g/L KH2PO4、2.5 g/L MgSO4·7H2O、16 mg/L 維生素B1，pH值自然，28 ℃靜置培養(yǎng) 10 d，其菌絲體生物量（干質量）可達13.52 g/L。

關鍵詞：平田頭菇；液體培養(yǎng)基；菌絲體；生物量；正交分析

中圖分類號： S646.104+.3 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）07-0261-02

收稿日期：2013-10-17

作者簡介：劉西周（1984—），男， 甘肅隴南人，碩士，助理實驗師，研究方向為蕈菌設施化栽培與植物組織培養(yǎng)。

通信作者：郭成金，教授，研究方向為蕈菌與植物細胞營養(yǎng)生理。E-mail：chengjin6866@163.com。平田頭菇[Agrocybe pediades（Fr.）Fayod]屬糞傘科（Bolbitiaceae）田蘑屬（Agrocybe），因具有獨特的風味、豐富的營養(yǎng)及特殊的抑腫瘤等藥用價值，受到越來越多的關注[1-2]。平田頭菇主要分布在蘆葦濕地等區(qū)域，但近些年由于濕地面積不斷萎縮，環(huán)境受到嚴重破壞，野生菌種資源數量急劇下降。目前對平田頭菇的研究鮮見報道，未見其液體培養(yǎng)基篩選相關研究。本研究通過對平田頭菇菌絲體液體培養(yǎng)基篩選，旨在為其人工馴化等進一步研究開發(fā)提供支持。

1材料與方法

1.1供試菌種

平田頭菇子實體采自天津市七里海濕地，菌種保藏于天津師范大學蕈菌研究所。

1.2培養(yǎng)基

1.2.1PDA綜合培養(yǎng)基[3]200 g/L馬鈴薯，200 g/L棉籽皮，18 g/L瓊脂，20 g/L葡萄糖，3 g/L KH2PO4，1.5 g/L MgSO4，4 mg/L維生素B1，pH值自然。

1.2.2碳源初選培養(yǎng)基及其配制方法碳源初選培養(yǎng)基：分別以15 g/L葡萄糖、15 g/L蔗糖、15 g/L甘露醇、15 g/L麥芽糖、200 g/L馬鈴薯（浸提液）、20 g/L玉米渣（浸提液）為供試碳源，加入3 g/L蛋白胨、3 g/L KH2PO4、1.5 g/L MgSO4·7H2O、微量維生素B1，pH值自然，配制碳源初選培養(yǎng)基，分裝于100 mL錐形瓶中，每瓶50 mL，每個處理3次重復，加紗布通氣塞后，0.12 MPa滅菌20 min，備用。

1.2.3氮源初選培養(yǎng)基及其配制方法氮源初選培養(yǎng)基：分別以3 g/L蛋白胨、3 g/L酵母粉、30 g/L麥麩（浸提液）、3 g/L 硝酸銨、 3 g/L硝酸鉀、3 g/L氯化銨為供試氮源，加入20 g/L葡萄糖、3 g/L KH2PO4 、1.5 g/L MgSO4·7H2O，pH值自然，分裝于100 mL錐形瓶，每瓶50 mL，每個處理3次重復，加紗布通氣塞后，0.12 MPa滅菌20 min，備用[4]。

1.3試驗方法

1.3.1菌絲體培養(yǎng)及其稱重提前4 d將菌種活化。無菌條件下挑取強壯菌絲體前端，接于平板培養(yǎng)基上，28 ℃培養(yǎng) 4～5 d 備用。

從菌落邊緣挑取直徑0.8 cm均勻大小的菌種圓塊，接種于對應的液體培養(yǎng)基，每瓶3塊，28 ℃靜置2 d，搖瓶 5 min/d。

將濾紙編號、稱重，恒溫培養(yǎng)10 d后將培養(yǎng)產物抽濾，于80 ℃烘干至恒重并稱重，2次質量差值為菌絲體生物量（干質量）。

1.3.2碳源、氮源培養(yǎng)基正交試驗根據碳源、氮源初選培養(yǎng)基篩選試驗結果，從中各選出2個最適合的碳源和氮源，按L9（34）設計4 因素3 水平正交試驗進行復選，與3 g/L KH2PO4、1.5 g/L MgSO4·7H2O、4 mg/L 維生素B1組成9個試驗配方，正交因素與水平設計見表1。

3結論

研究表明，平田頭菇培養(yǎng)基最佳配方是25 g/L葡萄糖、250 g/L馬鈴薯（浸提液）、40 g/L麥麩（浸提液）、4 g/L蛋白胨、5 g/L KH2PO4、2.5 g/L MgSO4·7H2O、16 mg/L 維生素B1，pH值自然，28 ℃靜置培養(yǎng) 10 d，其菌絲體生物量（干重）可達13.52 g/L。本研究為平田頭菇人工馴化等進一步研究奠定了基礎。

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