青天葵組織培養條件優化

摘要：分別以MS、1/2MS為基本培養基，采用正交試驗研究植物生長調節劑對青天葵根狀莖繁殖和新球莖誘導的影響，進而優化青天葵組織培養繁殖技術。結果表明：MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L IAA利于根狀莖增殖，增殖倍數為6.5；MS+1.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA適于誘導新球莖獲得再生植株，誘導系數為11.5，球莖移栽發芽成活率達到90%。

關鍵詞：青天葵；根狀莖；球莖；誘導；增殖

中圖分類號： Q943.1 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）07-0066-03

收稿日期：2013-10-17

基金項目：廣西自然科學基金（編號：2011GXNSFA018189）。

作者簡介：李林軒（1986—），男，廣西全州人，助理研究員，從事中藥資源保護與開發利用研究。E-mail：starry1125@sina.com。

通信作者：白隆華，研究員，從事中藥資源保護與利用研究。E-mail：whitefh2008@126.com。青天葵為蘭科植物毛唇芋蘭[Nervilia fordii （Hance）Schitr]的葉或帶球莖的葉，別名獨葉蓮、獨腳蓮、珍珠葉、墜千斤、鐵帽子、山米子、青蓮。青天葵性平，味苦，甘、涼，有清肺止咳、健脾消積、清熱解毒、消結散疬等功效，主治肺癆咯血、肺熱咳嗽、小兒肺炎、急性喉炎、 口腔炎、咽喉腫痛、瘰疬、瘡瘍腫毒、跌打損傷等[1]。青天葵是廣西特產藥材，也是我國出口創匯主要藥材，經濟價值較高，主產于廣西、廣東、四川、云南等地，屬于多年生宿根小草本。該物種瀕臨近危，已被列入中國物種紅色名錄[2]。栽培試驗發現，青天葵組培球莖不僅能正常生長，而且在相同條件下栽培組培球莖優于野生球莖[3]。為了解決青天葵產業發展中種源短缺的問題[4-7]，本研究利用現代生物技術優化青天葵組織培養條件，以期為青天葵組織培養規模化生產育苗提供技術支撐。

1材料與方法

1.1材料

供試材料采自廣西藥用植物園科研基地內引種栽培、生長健壯、無病蟲害的植株，經廣西藥用植物園鑒定，選取其球莖為外植體。將球莖在洗潔精溶液中浸泡5 min，清洗干凈，用自來水沖洗10 min，置于0.1%氯化汞溶液（加1～2點的吐溫）浸泡消毒10 min，再用無菌水浸洗5次，然后直接將球莖接種于1/2MS+2.0 mg/L 6-BA培養基上[8]，培養條件為pH 值5.8，平均照度2 000 lx，光照時間12 h/d，溫度（25±3） ℃，30 d后將其誘導出芽形成根狀莖，作為試驗材料（圖1）。

1.2方法

1.2.1根狀莖繁殖取無菌根狀莖約2 cm長的小段，接入添加不同濃度的6-BA、NAA、IAA（表1）的MS基本培養基中，觀察其對青天葵根狀莖繁殖的影響。

3結論與討論

6-BA是最重要的細胞分裂素，能促進細胞分裂、非分化組織分化、側芽生長等；NAA是植物生長調節劑，具有促進細胞分裂與擴大、誘導形成不定根等作用；IAA是植物生長素，能促進細胞分裂與細胞生長，誘導形成不定根[9]。多種因素組合能更有效促進植物生長，因此在MS培養基中配合使用6-BA、NAA、IAA對青天葵生長具有較大影響。本研究表明，青天葵根狀莖增殖的最適培養基為MS+2.0 mg/L 6-BA+0.5 mg/L NAA+0.2 mg/L IAA，在該培養基上形成根狀莖的數量最多，增殖數為6.5倍，且根狀莖粗細適中。

青天葵為蘭科植物，和其他蘭科植物一樣靠球莖繁殖。蘭科植物球莖的增殖方式在蘭科植物工業化上尤為重要[10]。杜勤等對青天葵組織培養研究發現，在1/2MS+2.0 mg/L 6-BA+2.0 mg/L NAA的生根培養基上培養1個月，根莖上長出綠色的芽，并伸展成為葉柄和葉片，并在葉柄下端長出白色的根[8]，這與本研究結果相似，都是使用細胞分裂素和生長激素按1 ∶1比例進行培養，青天葵根狀莖可以直接形成植株。但是直接形成植株的誘導率遠低于新球莖誘導率，植株移栽成活率也低于球莖，且試管苗沒有球莖便于攜帶和運送，不利于青天葵大規模生產與種植。但可為新品種遺傳改良提供材料。本研究表明，球莖誘導的最佳培養基為MS+1.5 mg/L NAA+0.5 mg/L 6-BA+0.2 mg/L IBA，在該培養基中青天葵球莖誘導系數為11.5，且球莖質量好，球莖發芽成活率達到90%。這與凌征柱等使用的MS+2.0 mg/L NAA誘導培養基[11]稍有不同，但都是使用高濃度生長激素進行球莖誘導。

參考文獻：

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