喜馬拉雅紫茉莉營養器官的產量和boeravinoneC的空間動態變化

摘要：為了確定喜馬拉雅紫茉莉的最佳采收年限和采收時期，采用HPLC法研究了不同生長年限的喜馬拉雅紫茉莉營養器官的生物量、魚藤酮類化合物boeravinone C（R1）總量及其分布的動態變化。結果表明：林芝地區喜馬拉雅紫茉莉的最佳采收年限為2年，最佳采收時期是9月中旬；喜馬拉雅紫茉莉的根、莖、葉等營養器官中都含有R1，從而在一定程度上擴大了其藥源，可以在一定程度上緩解喜馬拉雅紫茉莉根產量的不足。

關鍵詞：喜馬拉雅紫茉莉；營養器官；魚藤酮類化合物；HPLC；動態變化

中圖分類號：S567.230.1 文獻標志碼： A 文章編號：1002-1302（2014）07-0255-03

收稿日期：2013-10-26

基金項目：國家科技支撐計劃（編號：2011BAI13B06）；第四次全國中藥資源普查項目（編號：20120716-540000）；西藏自治區科技廳重大專項（編號：2011-68-20）。

作者簡介：李連強（1981—），男，云南彌渡人，碩士，講師，主要從事生物技術、瀕危藏藥材人工種植與示范的研究。E-mail：tibetfred@163.com。

通信作者：蘭小中，副教授，主要從事藥用植物資源教學與研究工作。E-mail：lanxiaozhong@163.com。喜馬拉雅紫茉莉常指紫茉莉科植物喜馬拉雅紫茉莉[Mirabilis himalaica （Edgew.） Heimerl]的根[1]，藏語名為巴朱，具有溫腎、益腎滋補、生肌、利尿、排石等功效，臨床上主要用于治療胃寒、腎寒、下身寒、陽萎浮腫等[2]。喜馬拉雅紫茉莉是十余個具有國藥準字號的藏藥產品的主要原料之一，年需求量約500 t左右[3]，隨著喜馬拉雅紫茉莉制劑品種的不斷增多，喜馬拉雅紫茉莉藥材的需求量急劇上升。筆者所在課題組通過近3年的調查發現，野生的喜馬拉雅紫茉莉基本上以雜草的形式零星分布于西藏林芝、昌都、山南地區和拉薩市的田間地頭，嚴重限制了以喜馬拉雅紫茉莉為原料的藏藥產業的發展。經過近6年的不斷摸索，筆者所在課題組已經系統掌握了喜馬拉雅紫茉莉的人工種植關鍵技術，提高了喜馬拉雅紫茉莉的產量，改善了野生喜馬拉雅紫茉莉資源匱乏的現狀。但是喜馬拉雅紫茉莉的傳統藥用部位是根，其莖葉通常被人們棄之不用，若將其地上部位全部入藥，其藥源將明顯擴大。

范海霞綜合應用硅膠柱層析、凝膠柱層析和半制備HPLC 等技術，從喜馬拉雅紫茉莉根中分離得到了一種魚藤酮類化合物（rotenoids）-boeravinone C（以下簡稱R1），并證實R1對多種癌細胞株都有較強的抑制作用[4]，表明R1可能是喜馬拉雅紫茉莉的主要活性成分之一。本研究表明，喜馬拉雅紫茉莉的根、莖、葉等營養器官中均含有R1；本研究用HPLC法對筆者所在課題組在西藏林芝地區的西藏大學農牧學院動物科學學院實習基地人工種植的1年生、2年生、3年生喜馬拉雅紫茉莉根、莖、葉中的R1總量及其所占比例的動態變化進行研究，以期為擴大藏藥巴朱的藥源提供參考依據。

1材料與方法

1.1儀器與試藥

島津LC-20高效液相色譜儀（A泵：LC-20AD、B泵：LC-20AD、DGU-20A3R在線脫氣、SIL-20A自動進樣器、柱溫箱、SPD-20A紫外檢測器）；Mettler toledo PL203分析天平；Mettler toledo B-S天平；BUCHI B-491旋轉蒸發器；KQ5200型超聲波清洗儀；BL-200型高速多功能粉碎機。

R1對照品由西南大學藥學院的陳敏教授實驗室自制，用HPLC色譜歸一法測定純度> 98%；甲醇為色譜純；試驗用水為“娃哈哈”純凈水，均經0.45 μm濾膜濾過。

1.2試驗方法

1.2.1樣品的采集與處理1、2、3年生喜馬拉雅紫茉莉的根、莖、葉樣品采自西藏大學農牧學院動物科學學院的實習基地，經西藏大學農牧學院羅建副研究員鑒定為紫茉莉科植物喜馬拉雅紫茉莉[M.himalaica （Edgew.）Heimerl]，鑒定后保存于西藏大學農牧學院的分子生物學實驗室內。采樣時間為2012年7至10月，每月15日左右采樣，共采樣4次。1、2、3年生的喜馬拉雅紫茉莉分別平行采樣4株。將喜馬拉雅紫茉莉植株采挖后帶回分子生物學實驗室，洗凈泥沙后分成根、莖、葉3個部分，置于105 ℃烘箱中殺青15 min后，60 ℃烘干至恒重。將同一次采收的1、2、3年生的根、莖、葉樣品粉碎后分別混合，過100目篩，備用。

1.2.2色譜條件Kromosil 100-5 C18柱（150×4.6 mm，5 μm）；流動相為甲醇-水（70 ∶30）；流速0.8 mL/min；檢測波長294 nm，柱溫25 ℃。

1.2.3對照品及樣品溶液的制備

1.2.3.1對照品溶液的制備精確稱取4.05 mg烘干至恒重的R1對照品，用色譜純甲醇定容至25 mL即得濃度為0162 mg/mL的R1對照品母液。取1 mL R1對照品母液，用色譜純甲醇定容至5 mL即得濃度為0.0324 mg/mL的R1對照品溶液。

1.2.3.2R1標準曲線的繪制取濃度為0.032 4 mg/mL的R1對照品溶液，分別進樣1、3、5、7、9、12、15 μL（n=3），測定其峰面積。

1.2.3.3樣品溶液的制備精確稱取1.000 g左右樣品，加入20 mL甲醇浸泡數分鐘，超聲提取2次，每次30 min，濾過；合并濾液，濾液用旋轉蒸發儀蒸干后用甲醇定容至2 mL，經0.45 μm濾膜濾過，濾液作為樣品溶液。

1.2.4樣品中R1含量測定取5 μL上述樣品溶液，測定其峰面積。根據峰面積，由線性回歸方程計算R1的含量。

3結論

R1對多種癌細胞株都有較強的抑制作用，表明R1可能是喜馬拉雅紫茉莉的主要活性成分之一。喜馬拉雅紫茉莉的傳統藥用部位是根，其莖葉可棄之不用，本研究采用HPLC法初步證實，喜馬拉雅紫茉莉的根、莖、葉等營養器官中都含有R1，其藥源將明顯擴大，可以從一定程度上緩解喜馬拉雅紫茉莉根產量的不足。在此基礎上，本研究以1、2、3年生的喜馬拉雅紫茉莉為材料，采用HPLC法研究了不同采收期對喜馬拉雅紫茉莉營養器官中R1的總量和所占比例的動態變化，根據藥用植物適宜采收期的確定原則[5-7]，認為西藏林芝地區1年生喜馬拉雅紫茉莉的最佳采收時期是9月中旬，最佳采收年限為2年。筆者建議在9月中旬采收喜馬拉雅紫茉莉的根，并對喜馬拉雅紫茉莉的莖和葉加以利用，這不僅提高了生產效益，也使喜馬拉雅紫茉莉的藥用資源得到更充分的利用。

參考文獻：

[1]中華人民共和國衛生部藥典委員會. 中華人民共和國衛生部藥品標準：藏藥第一冊[S]. 1995：104.

[2]中國科學院西北高原生物研究所. 藏藥志[M]. 西寧：青海人民出版社，1991：14-16.

[3]松桂花. 淺析高海拔地區人工種植喜瑪拉雅紫茉莉技術市場推廣前景[J]. 中國民族醫藥雜志，2011，17（9）：85-86.

[4]范海霞. 喜馬拉雅紫茉莉抗腫瘤活性成分研究[D]. 重慶：西南大學，2012.

[5]陳榮，楊躍生，吳鴻. 不同采收期紫錐菊產量及菊苣酸動態變化研究[J]. 中草藥，2012，43（6）：1186-1190.

[6]漆小雪，韋 霄，陳宗游，等. 黃花蒿干物質的積累及青蒿素與N、P、K量的動態變化研究[J]. 中草藥，2011，42（12）：2541-2544.

[7]王德立，張興翠，孫瀅. 野葛主要成分積累動態變化研究[J]. 中國藥學雜志，2008，43（13）：974-977.