膠體金快速診斷技術在動物疫病診斷中的應用

【摘 要】膠體金快速診斷技術是指在現場或試驗室對動物疫病進行快速診斷的一種方法，具有方便快捷、特異敏感、穩定性強、不需要特殊設備和試劑、價格低廉、結果判斷直觀的特點，特別適合于基層。本項技術推廣主要是應用快速診斷方法對我市轄區內的主要動物疫病進行診斷、預警監測，以全面掌握疫情動態，為制訂防控方案提供基礎依據，達到降低疫病發病率的目的。選擇養豬場4個，養雞場4個，用膠體金快速診斷技術和常規診斷技術分別進行監測診斷，豬場發病率降低了9.35%，死亡率降低了5.24%，雞場發病率降低了13.25%，死淘率降低了5.52%。目前，膠體金診斷技術在我市診斷、監測病種達7種，為養殖場挽回大量經濟損失，社會效益和環保效益顯著。

【關鍵詞】膠體金；動物疫病；快速診斷技術

1 多點控制示范試驗

1.1 試驗畜禽場選擇

2010年3月至今，根據我市各區養殖畜禽種類分布，選定了遵化市崔家莊鄉印華養豬場，劉備寨鄉久順養豬場，崔家莊鄉宏泰養豬場，興旺寨鄉壽松養豬場；遵化市平安城鎮張貴民養雞場，崔家莊鄉寧九方養雞場，平安城鎮建忠養雞場，崔家莊鄉靳廣田養禽場為試驗示范場，前兩個豬/雞場使用快速診斷技術，后兩個豬/雞場使用常規診斷技術。

1.2 膠體金檢測卡選擇

深圳康百得生物科技有限公司、北京新勝安科技發展有限公司等生產的豬瘟、H5禽流感、H9禽流感、藍耳病、偽狂犬病、圓環病毒、口蹄疫等病原、抗體診斷產品。

1.3 工藝技術路線

畜禽飼養場→用常規監測診斷技術（對照場）和膠體金快速監測技術（試驗場）→確診疫病或判定抗體高低→調整免疫程序，及時免疫、合理用藥→控制疫病發生或發展。

1.4 膠體金檢測卡的使用方法與判定

A 根據所要檢測的項目選擇所需的檢測卡；

B 將檢測卡從鋁箔袋中取出，水平放置并做好標記；

C 取血液或棉拭子加入稀釋液中，混勻后吸取2～4滴稀釋液滴入檢測卡的檢測孔內；

D 待稀釋液慢慢滲過顯示區，20min內觀察并記錄結果。

E 結果判定：

陽性：顯示區中對照線（C）和檢測線（T）各出現1條紫紅色線，說明抗原或抗體存在，為陽性反應；

陰性：只在對照線區（C）出現1條紫紅色線，說明無抗體或無抗原病毒感染；

無效：對照區未出現紫紅色線或只在檢測線區（T）出現紫紅色線，說明膠體金無效，不能使用。

1.5 試驗結果與分析

1.5.1 養豬場的試驗結果

經1年的比較試驗，試驗場較對照場發病率、死亡率分別降低了9.35%、5.24%，詳細數據見表1。

表1 養豬場多點控試試驗結果一覽表（單位：頭、%）

經卡方檢驗（x2test），試驗前后發病率、死亡率x2值分別為29.54、32.02，從x2界值表查得υ=1時，α=0.05、α=0.01的x2值分別為3.84、6.63，發病率、死亡率x2值均大于α=0.01的x2值，即P<0.01，差異極顯著，說明該項技術的應用對降低養豬場豬只發病率、死亡率具有顯著作用。

1.5.2 養雞場的試驗結果

經1年的比較試驗，試驗場較對照場發病率、死淘率分別降低了13.25%、5.53%，詳細數據見表2。

表2 養雞場多點控試試驗結果一覽表（單位：頭、%）

經卡方檢驗（x2test），試驗前后發病率、死亡率x2值分別為414.17、129.93，均大于α=0.01的x2值，即P<0.01，差異極顯著，說明該項技術的應用對降低養雞場雞的發病率、死淘率具有顯著作用。

2 技術要點

2.1 建立防疫檔案

規模養殖場均要建立防疫檔案、詳細記錄生產狀況、發病情況、診斷情況、發病率和死亡率、免疫程序、免疫時間、所用疫苗生產廠家和疫苗批號、監測時間、監測病種和檢測結果等有關生產和防疫的相關內容，以備診斷和監測時參考。

2.2 疫病診斷

2.2.1 診斷病種的確定

膠體金使用前，依據發病的臨床癥狀、傳播速度、病理變化等臨床特征，進行初步診斷，然后選擇相應疫病的膠體金檢測試紙進行檢測。

臨床上不能排除的高致病性禽流感、高致病性豬藍耳病等烈性傳染病要先進行檢測，排除后再進行其他疫病的檢測。懷疑為多種疫病混合感染的，選擇多種疫病檢測試紙同時進行檢測。

2.2.2 檢測數量

每次診斷檢測數量不低于3頭（只）份，有1頭只份出現陽性的即判定該養殖場有該病原感染。

2.3 免疫效果監測

使用免疫抗體檢測試紙對免疫后的動物進行定期檢測，不少于20頭（只）份/場次，檢測合格率低于70%時要進行加強免疫。

2.4 流行病學調查

2.4.1 區域性某種疫病的病原學調查

根據調查區域內養殖分布，結合地理特征確定疫病監測場點，但不少于2個養殖場/鄉鎮、2個自然村/鄉鎮，采集樣本數量不少于20頭（只）份/次。定期開展病原學檢測。

2.4.2 養殖場的病原分布調查

將養殖場內散養的動物按種類、日齡分群，按群隨機進行樣品采集，不少于5頭份/群次，分別進行病原和免疫抗體檢測，統計結果，繪制病原分布圖和免疫抗體合格率曲線圖，結合該場疫病流行情況分析該病的高發日齡和免疫程序是否合理，制定防控措施。

3 技術關鍵

（1）所采集的樣本具有代表性，以確保檢測結果的可信度。

（2）膠體金使用應嚴格按程序步驟操作。

（3）以流行病學調查和血清學、病原學檢測結果相結合，確定畜禽疫病的高發時段，從而及時免疫用藥以防控重點疫病。

4 創新點

（1）此項技術方便快捷，不需要特殊設備和試劑，可在野外、田間現場操作，特別適合于基層畜禽疫病監測和診斷。

（2）此項技術特異敏感，穩定性強，檢測診斷準確率較高。

（3）試劑價格低廉、經濟適用。