聚乙二醇/碳酸鈉雙水相萃取蛋清溶菌酶

摘 要 采用分子量適中且價格低廉的聚乙二醇（PEG 2000）與碳酸鈉組成雙水相體系萃取蛋清溶菌酶。通過制作相圖，分析得出25%（w/w）PEG 2000-15%（w/w）Na2CO3比例的雙水相是萃取蛋清溶菌酶較為合適的雙水相體系。研究表明PEG 2000-Na2CO3雙水相體系可將雜蛋白沉到下相，而溶菌酶則富集在上相中。當萃取體系組成為25%PEG 2000-15% Na2CO3時，蛋清溶菌酶的選擇性為6.697，雙水相萃取過程溶菌酶回收率為90.1%。

關鍵詞 雙水相萃取 PEG 2000 碳酸鈉 蛋清溶菌酶

中圖分類號：S816.7 文獻標識碼：A

Abstract The moderate molecular weight and low cost polyethylene glycol and sodium carbonate aqueous two-phase system was studied in lysozyme extraction from egg white. The results indicated that the lysozyme was concentrated in the upper-phase， while other proteins in the down-phase and the 25%（w/w）PEG 2000-15%（w/w）Na2CO3 aqueous two-phase system was best. Then the lysozyme was extracted and purified by PEG 2000-15% Na2CO3 aqueous two-phase system， which exhibited an efficient selectivity coefficient and recovery. While， the separation system composed of 25%（w/w）PEG 2000-15%（w/w）Na2CO3 was found to be efficient with a selectivity coefficient of 6.697， a recovery of 90.1%.

Key words aqueous two-phase extraction； PEG2000； Na2CO3； lysozyme from egg white

溶菌酶①②是一種專門作用于微生物細胞壁的糖苷水解酶，又稱N-乙酰己糖胺酶，相對分子質量14600 Da，由129個氨基酸構成，含較多堿性氨基酸，其等電點高達11左右。溶菌酶因水解細菌細胞壁而具有殺菌、抗病毒等功效。溶菌酶是一種天然安全的蛋白質，能在胃腸內作為營養物質被消化和吸收，對人體無毒性，是一種安全性很高的營養保健品、食品保鮮劑和藥品。③

目前蛋清溶菌酶的提純方法多較為復雜，成本高，操作時間長，且制備的酶活力與純度較低。④⑤⑥⑦⑧雞蛋清中溶菌酶含量約為0.3%，⑨是提取溶菌酶的良好材料。本文采用熱變性、等電點沉淀及聚丙烯酸⑩處理相結合的方法從新鮮雞蛋清中粗提溶菌酶。聚丙烯酸是一種多聚電解質，在特定的pH和離子強度條件下，與某些蛋白質一起凝聚沉淀，而不作用于多糖、核酸等物質。利用雙水相萃取技術從溶菌酶粗提物中進一步分離純化溶菌酶。

雙水相萃取技術 （Aqueous two-phase system，ATPS）是兩種高聚物或者一種高聚物和鹽組成系統中利用這兩種物質對水的親和性和兩種物質間的疏水性的綜合作用而形成兩相。利用被提取的物質在雙水相中受到各種作用力的綜合作用不同而達到分離的效果。分離過程中能夠有效保留酶等萃取物的生物活性。 操作方便，經濟環保，因此較其他方法具有較大的優點。

3 結論

本試驗建立了PEG 2000-Na2CO3雙水相相圖，確立了PEG 2000-Na2CO3的成像區域。同時發現溶菌酶的萃取效率與Na2CO3濃度及PEG濃度有關。萃取蛋清溶菌酶的最佳體系為25% PEG 2000-15%Na2CO3，此時蛋清溶菌酶的選擇性為6.697，雙水相萃取過程溶菌酶回收率為90.1%。但雙水相體系萃取的影響因素較多，這可能不是最佳選擇，還需要進一步探索。

*通信作者：付加芳

注釋

① 俞其林，勵建榮.溶菌酶及其應用[J].農產品加工，2007（8）：78-81.

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④ 齊曉岑.蛋清提取溶菌酶技術[J].適用技術之窗，1999（2）：10.

⑤ 孫京新，姜連芳，李文香.蛋清中溶菌酶的提取[J].萊陽農學院學報，1998.15（4）：285-288.

⑥ 李宗孝，原春蘭，張建超.蛋清中溶菌酶的提取研究[J].精細化工，2001.18（2）：103-105.

⑦ 楊景芝，孫衍華，白吉剛.雞蛋清溶菌酶提取工藝的改進[J].食品與發酵工業，2004.30（5）：85-87.

⑧ 遲玉杰，高興華，孔寶華.雞蛋清中溶菌酶的提取工藝研究[J].工藝技術，2002.23（3）：44.

⑨ 林翠花.溶菌酶結構特點及其應用[J].濰坊學院學報，2005.2（5）：108-110.

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