歐洲水仙的繁殖技術(shù)研究

摘要 [目的]研究歐洲水仙的繁殖技術(shù)，為歐洲水仙的種質(zhì)資源栽培提供依據(jù)。[方法]在查閱相關(guān)資料的基礎(chǔ)上，系統(tǒng)介紹歐洲水仙的4種主要的繁殖方式：側(cè)球繁殖、鱗片繁殖、雙鱗片繁殖以及組織培養(yǎng)繁殖，并對4種繁殖方式進行簡單比較。[結(jié)果]鱗片扦插方法操作較簡單，但繁殖材料易污染腐爛，且扦插用材料較組織培養(yǎng)多，繁殖系數(shù)低。用組織培養(yǎng)方法進行快速繁殖，環(huán)境相對容易控制，污染率低，且所需材料少，繁殖系數(shù)高。[結(jié)論]組織培養(yǎng)方法極大地提高了水仙的繁殖速度。

關(guān)鍵詞 歐洲水仙（Narcissus pseudonarcissus）；繁殖；鱗片；組織培養(yǎng)

中圖分類號 S188 文獻標(biāo)識碼

A 文章編號 0517-6611（2014）17-05372-02

Abstract [Objective] To study propagation technique of Narcissus pseudonarcissus， and provide reference for germplasm resource cultivation. [Method] On the basis of reviewing relevant literatures， four main propagation methods were introduced： side of the bulb propagation， scale propagation， double scale propagation and propagation by tissue culture. And a simple comparison of four kinds of propagation technique was compared. [Result] The operation of scale cutting method is simple， but the propagation material is easy to decay， the propagation coefficient is low. The tissue culture method is superior with advantages of low pollution rate， less materials， high propagation coefficient. [Conclusion] Tissue culture method significantly improved the propagation speed of Narcissus pseudonarcissus.

Key words rcissus pseudonarcissus； Propagation； Scale； Tissue culture

歐洲水仙（Narcissus pseudonarcissus）又叫洋水仙，是從歐洲引入我國水仙品種的統(tǒng)稱[1]，為石蒜科水仙屬植物，同屬有30余種，園藝栽培品種現(xiàn)已超過2萬個；主要分布在中歐、地中海和西亞地區(qū)，喜溫暖、濕潤和陽光充足的環(huán)境。歐洲水仙與國內(nèi)廣泛栽培的中國水仙相比，花大，色多更美觀[2]。歐洲水仙自20世紀(jì)80年代被大規(guī)模引入中國后，已為越來越多的人所喜愛，市場需求廣泛。

目前，我國的水仙種球主要依賴于進口，雖然國內(nèi)已有關(guān)于水仙繁殖的研究，但繁殖的數(shù)量和質(zhì)量都不甚理想。李正芬[3]認(rèn)為水仙繁殖速度慢是因為水仙鱗莖為層狀鱗莖，由多年形成的鱗片（即變態(tài)葉）和鱗莖（即鱗莖盤）所組成，鱗片呈環(huán)狀著生在鱗莖盤上，包裹著中心的葉鞘和葉片；在顯微鏡下可以看到，在2個鱗片間的鱗莖盤上，有很多小突起，呈環(huán)狀排列，即腋芽原基，這是水仙能夠快速繁殖的內(nèi)在條件；但是在自然狀態(tài)下，并不是所有的腋芽原基都可以發(fā)育成腋芽，而只有少量在同化葉中脈基部的芽原基，才容易形成腋芽。一個腋芽形成以后，到休眠之前能形成4枚鱗片，這些鱗片第1年抽出2枚葉鞘和2枚同化葉，在第2年又形成第3年抽出地面的2～3枚葉鞘和3～4枚同化葉。每片同化葉在其活動的后期又形成了一個腋芽。通常情況下，一個鱗莖每年只能形成2～3個腋芽，所以在3年中能分離供繁殖用的小仔球僅3～4個，多的也只有5～6個，這大大的影響了水仙的繁殖速度。同時因為多年的無性繁殖，病毒累積，鱗莖和花變小，使得水仙退化嚴(yán)重，質(zhì)量不高。筆者介紹幾種比較常見的水仙繁殖方法，現(xiàn)報道如下。

1 側(cè)球繁殖

側(cè)球繁殖是最常用的方法。側(cè)球著生于鱗莖球外的2側(cè)，僅基部與母球相連，很容易脫離母體，秋季將側(cè)球與母球分離，單獨種植，次年就可以生出新球。但這種方法繁殖系數(shù)低，多的每鱗莖球每年可獲得5個子球，有些品種只能得到2個子球[4]。

2 鱗片繁殖

取飽滿、健康的水仙母球莖，先剝?nèi)[莖表面腐爛或干枯的鱗片，切除頂端的枯黃葉部，并用清水將表面臟物清洗干凈。用稀釋50倍的‘84’消毒液，浸泡20 min，取出后晾干，之后將鱗莖按8分法縱切成小塊，注意切分時不要損傷基部并使同種分法盡量帶相同大小的鱗莖盤。鱗莖塊消毒用藥劑配方如下：多菌靈與甲基托布津質(zhì)量比1 ∶1混合后加入細(xì)砂，比例為1 ∶1 000，用珍珠巖作為扦插基質(zhì)[4]。

3 雙鱗片繁殖

用帶有2個鱗片的鱗莖盤作為繁殖材料，稱之為雙鱗片繁殖。其方法是，先把鱗莖放在4～10 ℃環(huán)境中預(yù)處理4～8周，然后在常溫下把鱗莖盤分成小塊，使每塊帶有2個鱗片，并將鱗片上端切除留下2 cm作為繁殖材料，然后把含水50%的砂石放入塑料袋中，再把繁殖材料放入砂石中，封閉袋口，置于20～28 ℃溫度中暗培養(yǎng)，經(jīng)2～3月即可長出小鱗莖，成球率可達80%～90%。此法可四季進行，但以4～9月為最好。生成的小鱗莖移栽成活率可達80%～100%[5]。李穎[6]在此基礎(chǔ)上進行改進，采用整塊的雙鱗莖片（上部未切除）及鱗莖心作為繁殖材料，污染得到改善，污染比例大大降低。

4 組織培養(yǎng)繁殖

20世紀(jì)70年代初，Stone等人首次報道水仙離體組織培養(yǎng)成功[7]。現(xiàn)在用水仙的子房、種子、雙鱗片、花莖、葉片等作為組織培養(yǎng)的外植體的研究均已有報道。和傳統(tǒng)的繁殖方式相比，水仙的組織培養(yǎng)及植株再生技術(shù)為水仙的大量生產(chǎn)和無病毒種球資源庫的建立提供了一條有效的技術(shù)途徑[8]。

4.1 營養(yǎng)器官繁殖 水仙的營養(yǎng)器官繁殖是以種球的鱗莖盤、鱗片和葉片等為外植體的離體培養(yǎng)，通過誘導(dǎo)產(chǎn)生叢生芽，經(jīng)再分化形成植株的一種技術(shù)。

王小敏[9]以歐洲水仙品種“Dutch Master”為試材，總結(jié)出一套完整的水仙繁殖技術(shù)：選取飽滿的水仙種球，去掉鱗莖最外層干皺的鱗片和基部殘余的老根，流水沖洗30 min后置于濃度 75%的酒精中1 min，用無菌水沖洗3遍后去除上部1/3鱗片，用0.1% HgCl2溶液浸泡8 min，再用無菌水沖洗4遍，取內(nèi)層鱗片的下部作為初代培養(yǎng)的外植體，愈傷組織誘導(dǎo)培養(yǎng)基為 MS+2.0 mg/L 6BA+0.3 mg/L 2，4D+30 g/L 蔗糖，小鱗莖的誘導(dǎo)分化培養(yǎng)基為 MS+2.0 mg/L 6BA+0.2 mg/L NAA+30 g/L 蔗糖，小鱗莖繼代增殖培養(yǎng)基為 MS+ 1.5 mg/L 6BA+ 0.3 mg/L NAA+30 g/L 蔗糖，生根培養(yǎng)基為1/2MS+ 0.3 mg/L 6BA+ 0.5 mg/L NAA+ 20 g/L蔗糖，煉苗移栽基質(zhì)配比為 V（蛭石） ∶V（泥炭土） ∶V（園土） =1 ∶1 ∶2。一定濃度的多效唑（PP333）可以抑制植物內(nèi)源生長素和赤霉素合成，加速乙烯和脫落酸合成，從而控制莖葉生長，有效的促進植物生根[10]。呂曉會在荷蘭水仙組培繼代培養(yǎng)的培養(yǎng)基中加入一定濃度的PP333后，外植體出芽率增加，平均出芽數(shù)提高，芽長縮短，有效的抑制了繼代培養(yǎng)時葉片的生長[11]。姜麗麗[12]以蘇州三山島上野生水仙鱗莖為材料，將其4 ℃低溫預(yù)處理4～10周，污染率比未經(jīng)預(yù)處理的降低很多，其增殖率達322.22%。胡毅敏[13]等以舟山特有的優(yōu)良新品種普陀水仙（Narcissus tazetta var. chinensis Rome）為材料，經(jīng)過3年試驗研究，取得在適宜的組培條件下，1只種球1年可以繁殖250多只鱗莖的效果。

4.2 生殖器官繁殖 水仙的生殖器官繁殖主要是指以花梗、花藥、子房和胚珠等為外植體，通過誘導(dǎo)愈傷組織，再分化形成不定芽，進而形成完整植株的一種技術(shù)。張曉晴[14]發(fā)現(xiàn)6BA與Ad的合理組合對水仙花梗愈傷組織誘導(dǎo)、鱗莖芽的分化有很好的促進及增殖效應(yīng)，并確定了其最佳培養(yǎng)基配方。Sellés M[15]、呂柳新[16]和Chen L[17]也分別用水仙的用種子、胚珠和花藥開展了水仙離體培養(yǎng)的研究，通過誘導(dǎo)愈傷組織建立了完整的水仙生殖器官的再生體系。

4.3 體細(xì)胞繁殖 體細(xì)胞繁殖是指以水仙鱗片、葉片、花梗、子房和種子的成熟或未成熟胚等為外植體進行培養(yǎng)，通過誘導(dǎo)愈傷組織、發(fā)生胚狀體進而形成再生植株的一種技術(shù)。體細(xì)胞培養(yǎng)是水仙進行基因遺傳轉(zhuǎn)化的理想途徑[18]，為功能基因組學(xué)、細(xì)胞信號傳導(dǎo)及植物發(fā)育研究展示了一個廣闊的平臺。Lu G[19]首次報道了用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法研究水仙遺傳轉(zhuǎn)化的技術(shù)，并成功獲得轉(zhuǎn)化植株，但轉(zhuǎn)化率只有1.24%。Malik[20]以Narcissus largecupped‘Carlton’的子房為試驗材料對水仙的體細(xì)胞胚培養(yǎng)方式、培養(yǎng)基的種類、激素種類及配比進行了深入研究，成功建立了水仙體細(xì)胞胚培養(yǎng)植株再生的體系。魏開發(fā)[21]也通過一系列的試驗確定了水仙的胚培養(yǎng)的培養(yǎng)基，并且在胚性愈傷誘導(dǎo)和分化體系優(yōu)化基礎(chǔ)上實現(xiàn)農(nóng)桿菌介導(dǎo)GUS基因轉(zhuǎn)化。

5 小結(jié)與展望

鱗片扦插方法操作較簡單，但繁殖材料易污染腐爛，且扦插用材料較組織培養(yǎng)多，繁殖系數(shù)低，已不能滿足當(dāng)前的市場需求。為了適應(yīng)社會需求，近年來圍繞組織培養(yǎng)進行快速繁殖的研究越來越來。用組織培養(yǎng)方法，環(huán)境相對容易控制，污染率低，且所需材料少，繁殖系數(shù)高，一個大鱗莖通過一年的切塊繁殖，可獲得以萬計的小鱗莖[22]，這極大地提高了水仙的繁殖速度。但仍然還有一些難題阻礙荷蘭水仙通過組織培養(yǎng)技術(shù)進行工廠化生產(chǎn)，比如繼代培養(yǎng)過程中組培材料出芽、小鱗莖形成、生根和葉片生長過快、影響基部小鱗莖，懸浮細(xì)胞振蕩培養(yǎng)研究較少，試材內(nèi)源激素含量與所需最適外源激素濃度水平之間關(guān)系研究較少，科研成果轉(zhuǎn)化率低[18]等，這些問題都亟待解決。

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