多潘立酮片人體生物等效性研究

摘要：目的：探討利用高效液相色譜的聯用法來對口服多潘立酮片的患者血藥濃度以及參比制劑和受試制劑的藥代動力學參數情況，研究制劑的等效性和利用度。方法：隨機選取設計實驗為30例男性健康受試者，口服受試制劑以及多潘立酮片，并測驗其濃度。結果：對兩種制劑中多潘立酮參數進行轉換以后進行方差分析，t檢驗，得出可信區間為95.17%～124.31%，T1=5.34，T2=3.28，t0.1（22）=1.69，而AUC90%可信區間為101.98%～121.13%，T1=6.73，T2=2.54，t0.1（22）=1.69，上述結果與SFDA相關要求相符，因此兩種制劑參數生物等效。結論：本研究選擇的兩種制劑藥動學參數與參考文獻報道的一致，但是因為多潘立酮血藥濃度具有時間曲線，并且在不同的受試者中具有一定的差異性，所以普遍表現是受試制劑在對應濃度方面要大于參比制劑，試驗效果良好。

關鍵詞：多潘立酮片；人體生物；等效性

【中圖分類號】R914.1 【文獻標識碼】A【文章編號】1002-3763（2014）02-0007-01

多潘立酮片是一種針對嘔吐癥狀能產生強力抵抗性的促動藥，主要是通過拮抗外周多巴胺D2受體，對胃腸道產生作用，從而增強胃蠕動，排空腸胃，預防出現膽汁反流的情況，保護胃液的分泌不受到影響，同時對消化不良癥狀以及飲食、感染或是放射性治療引發的嘔吐惡心癥狀有很好的治療作用。臨床實踐證明，多潘立酮能夠在人體內迅速吸收，很少出現不良反應，但是利用率卻較低。本研究對此展開探討，以提供更多的臨床參考依據。

資料與方法

1.1一般資料

本研究的受試制劑是多潘立酮片，參比制劑是多潘立酮對照品、文拉法辛對照品，以超純水作為試驗用水，色譜純取甲酸、甲醇、醋酸等，其余的是分析純。選用API4000LC-MS/MS聯用儀作為實驗儀器，此外還包括電子天平、高速離心機、超純水機以及離心濃縮儀。

1.2方法

1.2.1質譜色譜形成條件：（1）ESI源作為離子源，其電壓保持在5500V，溫度為500℃，采用正離子式進行檢測，多反應監測進行掃描，多潘立酮[M+H]+，（m/z）426/175.1為質荷比。（2）AgilentZOBAXSBC18（3.0mm×100mm，3.5μm），流動相甲醇4mmol/L，含1%0甲酸的醋酸銨為55：45，流速為400μl/min，保持30℃的柱溫[1]。

1.2.2受試者條件要求：選取30例健康的男性，年齡在23歲～32歲之間，身高在159cm～186cm之間，體重在50kg～77kg之間，經過檢查發現30例受試者在肝功能和腎功能、心電圖等方面都顯示正常，達到了受試者的要求。經過簽署知情同意書，審批以后成為合格受試者。

1.2.3用藥情況和樣品采集：30例受試者在進行實驗的前兩周要禁煙禁酒，不能服用其他的藥物。交叉實驗的設計要符合單劑量以及二乘二原則，也就是將30例受試者隨機分成2組，保證以1周為交叉間隔時間，讓受試者在早上8點200mL溫水口服20mg參比制劑或是試驗制劑，2小時以后飲水，4小時以后進食，在進行服藥和取血的時候讓受試者在I期臨床的病房中進行密切觀察。在進行藥物的服用之前要對受試者取4ml的空白血樣，服藥以后進行4ml靜脈采血分為為0.1667、0.333、0.5、0.75、1、1.5、2、3、5、8、12、24、30、36小時，采用肝素抗凝試管收集，離心分離血漿并將其存于-75℃的待測血藥濃度[2]。

1.2.4血漿樣品的存放條件：加入0.5ml的血漿樣品到10ml的具塞玻璃試管當中，加入1.026μg/ml內標文拉法辛溶液50μl，進行10s旋渦并加入0.5mol/L的氫氧化鈉堿液100μl混勻，4ml乙酸乙酯并振蕩3min，保持10min300r/min離心，將上層有機相3.5ml取下，在40℃的濃縮離心儀揮干，同時加入100μl含50%的甲醇溶液進行復溶，1min旋渦，5min2000r/min離心，將上層清液吸取以后做LC-MS/MS分析取5μl。

1.3統計學方法

本研究采用BAPP3.0軟件進行處理，計算相對生物利用度以及藥動學參數，測出被試制劑和參比制劑的濃度，通過梯形法計算出轉換后的雙單側和方差，t檢驗，最后對參比制劑以及被試制劑是否生物等效進行評價。

結果

2.1方法學考證

2.1.1特異性分析

在LC-MS/MS條件下，將多潘立酮保留2.5min的時間，而內標文拉法辛則保留3min時間，保證多潘立酮以及內標峰形良好，不受到雜峰影響，并保持平穩的基線。

2.1.2標準線性及曲線范圍

以0.321μg/L～82.24μg/L為標準曲線范圍，其中0.321μg/L為最低定量限。

2.1.3準確度和精密度

0.648μg/L表示低，6.48μg/L表示中，64.8μg/L表示高，這三種濃度的日內相對標準偏差分別是7.04%，2.91%，1.90%，日間相對標準偏差分別是9.25%，7.81%，6.18%，因此，這三種濃度的多潘立酮準確度保持在97.29%～101.75%之間。

2.1.4回收率提取

三種濃度的多潘立酮回收率分別為88.24%、79.78%以及67.77%，內標文拉法辛的回收率則是92.19%。

2.1.5介質效應

經過LC-MS/MS介質效應分析，三種濃度的多潘立酮介質效應分別是100%、96.63%、99.25%，而內標文拉法辛的介質效應則為98.09%。

2.1.6樣品穩定性分析

從上述的實驗可以得出，低、中、高三種濃度的多潘立酮血漿樣品處在室溫下放置了24小時的情況下，經過反復的3次凍融，并在-75℃條件下放置15天，穩定性都能保持良好。

2.2人體藥動學

2.2.1藥動學參數

經過BAPP3.0進行程序處理后，參比制劑以及受試制劑的血漿藥物濃度用非房室模型估算藥動學參數，30例健康受試者的詳細情況見下表1。

2.2.2生物等效性研究

對兩種制劑中多潘立酮參數進行轉換以后進行方差分析，t檢驗，得出可信區間為95.17%～124.31%，T1=5.34，T2=3.28，t0.1（22）=1.69，而AUC90%可信區間為101.98%～121.13%，T1=6.73，T2=2.54，t0.1（22）=1.69，上述結果與SFDA相關要求相符，因此兩種制劑參數生物等效。

討論

對于多潘立酮血藥濃度的分析方法很多的文獻都有記載，包括高效液相色譜法等，但是很多方法操作比較繁瑣，線性的范圍比較窄，靈敏度也比較低，而且實驗的周期比較長。在本研究中采用的是高效LC-MS/MS聯用法檢測，操作比較簡單，具有很高的靈敏度，可以將其廣泛應用于多潘立酮的臨床藥動學研究工作中。

本研究選擇的兩種制劑藥動學參數與參考文獻報道的一致，但是因為多潘立酮血藥濃度具有時間曲線，并且在不同的受試者中具有一定的差異性，所以普遍表現是受試制劑在對應濃度方面要大于參比制劑，導致的原因很有可能是因為受試制劑在溶出度方面比參比制劑要大。此外，在本研究的I期臨床觀察中醫療監護受試者，并沒有任何的藥物不良反應發現，試驗效果良好。

參考文獻：

[1]吳婷.多潘立酮片人體生物等效性研究[J].中國藥物與臨床，2011，12（06）：22-23.

[2]趙剛.多潘立酮片的人體生物等效性研究[J].中國藥師，2012，11（12）：18-19.