應(yīng)用TLC法鑒別區(qū)分中藥生品與炮制品的探討

摘要：目的： 探討應(yīng)用薄層層析（TLC）法鑒別區(qū)分中藥生品與炮制品的可行性。方法：篩選臨床常用5種中藥材（地黃、何首烏、大黃、黃芩、黃精生品、炮制品）作為研究對(duì)象，采用TLC法進(jìn)行鑒別區(qū)分，常規(guī)方法制備試品溶液。對(duì)照品選用5-羥甲基糠醛（5-HMF）、硅膠G層析板，展開劑采用石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（1：1），后對(duì)試品噴15%α-萘酚乙醇溶液，水浴90℃至斑點(diǎn)完全顯色，于日光下觀察，并對(duì)圖譜進(jìn)行制表分析。結(jié)果 地黃、何首烏、大黃、黃精在于對(duì)照品色譜相應(yīng)位置比較中，炮制品存在相同顏色的斑點(diǎn)，生品無(wú)相同顏色斑點(diǎn)，黃芩生品炮制品均顯現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)。結(jié)論：應(yīng)用TLC鑒別法可準(zhǔn)確鑒別部分中藥生品與炮制品。

關(guān)鍵詞：TLC法；中藥生品；炮制品

【中圖分類號(hào)】R943.1 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】A【文章編號(hào)】1002-3763（2014）02-0004-01

中藥的化學(xué)成分比較復(fù)雜，其經(jīng)過(guò)炮制后藥性會(huì)發(fā)生改變，部分中藥須經(jīng)炮熟后，才可表現(xiàn)出其特定的藥理效果[1]。通常炮制品可根據(jù)生品的薄層層析（TLC）法進(jìn)行鑒別，研究發(fā)現(xiàn)，生地黃炮制后可檢測(cè)出5-羥甲基糠醛（5-HMF），而單純檢測(cè)生地黃中不含5-HMF，在何首烏的生品與炮制品TLC鑒別中也可根據(jù)5-HMF進(jìn)行鑒別[2]。本次實(shí)驗(yàn)探討應(yīng)用TLC法以5-HMF為鑒別標(biāo)準(zhǔn)是否可準(zhǔn)確區(qū)分中藥生品與炮制品，對(duì)臨床常用5種中藥材進(jìn)行色譜分析，比較其炮制品與生品的色譜斑點(diǎn)區(qū)別。現(xiàn)報(bào)道如下：

1資料與方法

1.1 材料與儀器

篩選常用5種中藥地黃、何首烏、大黃、黃芩、黃精作為研究對(duì)象，所有中藥材根據(jù)《中華人民共和國(guó)藥典》進(jìn)行炮制[3]。對(duì)照品由實(shí)驗(yàn)室提供熟品何首烏中提取純度95%以上的5-HMF，硅膠G層析板、石油醚（60～90℃）、乙酸乙酯、15%α-萘酚乙醇均采用市場(chǎng)標(biāo)準(zhǔn)品（北京化學(xué)試劑公司）。應(yīng)用薄層掃描成像系統(tǒng)（CAMAG）進(jìn)行色譜分析。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

將5-HMF混合95%乙醇制成50%濃度的5-HMF溶液，作為對(duì)照品。取5種中藥的生品與炮制品混合40ml 95% 乙醇超聲處理后進(jìn)行過(guò)濾蒸干，濾渣混合無(wú)菌蒸餾水5ml，應(yīng)用蒸餾水30ml洗脫過(guò)聚酰胺柱，采集洗脫液后低溫低壓蒸干（40℃以下），結(jié)晶再次混合95%乙醇溶解作為試品。將對(duì)照品與試品滴加至硅膠G層析板，展開劑石油醚（60～90℃）-乙酸乙酯（1：1）進(jìn)行標(biāo)本展開，干燥后噴以15%α-萘酚乙醇溶液進(jìn)行加熱直至斑點(diǎn)完全顯色，日光下進(jìn)行觀察色譜。每種藥材進(jìn)行多次TLC鑒別，用以組內(nèi)比較消除誤差。

2結(jié)果

生地黃與熟地黃的TLC圖譜比較見圖1。通過(guò)圖1可發(fā)現(xiàn)生地黃與熟地黃檢測(cè)結(jié)果存在差異，熟地黃與對(duì)照品具有相同顏色斑點(diǎn)，生地黃不具有相同顏色斑點(diǎn)。

3 討論

薄層層析法（TLC）是一種分離混合物的技術(shù)，將被檢溶液滴加在具有吸附作用固定相的硅膠G層析板上，溶劑或流動(dòng)相因毛細(xì)現(xiàn)象而發(fā)生向上移動(dòng)，溶劑中不同的成分、分析物其在TLC硅膠G層析板上的移動(dòng)速度不同，可達(dá)到對(duì)被檢溶劑的分離比較目的[3]。中藥成分極為復(fù)雜，而且中藥材需經(jīng)過(guò)炮生為熟才可發(fā)揮其不同的藥理作用，其生品與炮制品的藥效差異較為顯著，如生地黃可用于熱病舌絳煩渴，而熟地黃卻具有增強(qiáng)涼血止血功效。故準(zhǔn)確的評(píng)價(jià)中藥方劑中的藥材生熟將直接影響中藥的治療效果。

文獻(xiàn)報(bào)道，部分中藥材炮制后可在其炮制品中檢測(cè)到5-羥甲基糠醛（5-HMF），為曼拉德反應(yīng)產(chǎn)物之一，曼拉德反應(yīng)是氨基化合物與還原糖化合物發(fā)生復(fù)雜的化合反應(yīng)中，其廣泛存在于中藥的煎煮、炮制加熱中，特別是含糖中藥材[4]。而通過(guò)對(duì)本次實(shí)驗(yàn)解果分析可知，地黃、何首烏、大黃、黃精在于對(duì)照品色譜相應(yīng)位置比較中，炮制品存在相同顏色的斑點(diǎn)，生品無(wú)相同顏色斑點(diǎn)，黃芩生品炮制品均顯現(xiàn)相同顏色的斑點(diǎn)。在本次實(shí)驗(yàn)中，黃芩的炮制品中未發(fā)現(xiàn)5-HMF，但并不能確定此標(biāo)本為黃芩生品，因曼拉德反應(yīng)主要受氨基酸種類、糖、溶液、PH、溫度等影像，并且中藥的炮制手法較多，炮制時(shí)間不一，可能對(duì)5-HMF檢測(cè)結(jié)果存在影響，在實(shí)驗(yàn)中針對(duì)同一種藥材組內(nèi)進(jìn)行檢測(cè)5-HMF可發(fā)現(xiàn)，炮制時(shí)間、溶液濃度、溫度的不同，雖結(jié)果均可檢測(cè)到相同顏色的斑點(diǎn)，但斑點(diǎn)大小存在差異，提示藥材炮制后的5-HMF濃度可與炮制手法、時(shí)間及其他影像因素有關(guān)。因此，TLC可初步鑒別區(qū)分部分中藥的生品與炮制品，而對(duì)于不能夠準(zhǔn)確區(qū)分的藥材可應(yīng)用多種方法綜合檢測(cè)，區(qū)分其生品與炮制品，以提高治療效果。

參考文獻(xiàn)：

[1]單學(xué)健.常用中藥生品、炮制品功效差異探討[J]. 中醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)， 2012，18（7）：87-88.

[2]劉振麗，宋志前， 巢志茂， 等.何首烏生品與炮制品薄層層析鑒別方法研究[J].中國(guó)中醫(yī)藥信息雜志， 2009，16（3）：41-42.

[3]劉振麗， 陳其鋒， 宋志前， 等.TLC鑒別方法區(qū)別部分中藥生品與炮制品的研究[J]. 中藥材， 2008， 31（9）：1313-1314.

[4]黎進(jìn)平.中藥TLC法鑒別檢驗(yàn)中的幾點(diǎn)體會(huì)[J].中國(guó)藥師，2006，9（3）：276-277.