豬瘟診斷技術的比較

曲春林

豬瘟（CSF）又稱為“爛腸瘟”，是一種高度接觸性傳染病，豬瘟病毒（CSFV）感染是引發該病的主要因素。豬瘟傳染性很強，其發病率和死亡率居高不下，不僅不利于養豬業的健康發展，而且還會造成巨大的經濟損失。因此，提高豬瘟診斷技術水平，以預防為主加強防控是減少養豬業損失的重要措施。本文就豬瘟診斷技術的研究現狀進行了綜述，同時也展望了該技術的發展方向，以供參考。

1 豬瘟的診斷技術

1.1 常規診斷方法

目前，實驗室常規診斷技術主要有免疫熒光實驗（FAT）和血清型診斷兩種。免疫熒光實驗是診斷豬瘟的常用方法，該法將抗豬瘟病毒抗體IgG提純后標記熒光物質，然后制成相應的熒光試劑。試劑制成后使用其著染患豬淋巴結、扁桃體等病料的觸片或冰凍切片，若通過熒光顯微鏡觀察到有亮綠色熒光則表明該病毒熒光抗體染色呈陽性，即存在豬瘟病毒感染。利用免疫熒光實驗檢測患豬內臟是否存在豬瘟病毒可有效提高豬瘟的早期診斷水平，對于防控豬瘟進一步發展，防止其擴大傳染具有重要意義。豬瘟病毒感染早期采用豬瘟熒光抗體染色技術進行檢測具有較高的檢出率，適應性較廣，除可檢出強毒抗原之外，還能檢出低毒力病毒感染。同時，與常規診斷技術相比，該技術的診斷時間更短，準確性更高，有效提高了診斷效率和質量，適宜在規模化豬場等大型養殖基地進行檢測和診斷。另外一種，血清型診斷。當前，豬瘟酶聯免疫吸附測定實驗是常用的血清抗體檢測方法，該診斷方法的敏感性與特異性較高，其試劑較為穩定，不會產生放射性危害，可操作性強，適用于各級檢驗部門。

1.2 分子生物學診斷技術

在豬瘟病毒的診斷中，反轉錄-聚合酶鏈式反應（RT-PCR）、巢式PCR、多重引物PCR以及環介導等溫擴增技術（LAMP）等分子生物學檢測技術發揮了重要作用，其特點各異，現具體介紹如下：反轉錄-聚合酶鏈式反應具有操作簡單、靈敏度和特異度高、重復性好和檢測范圍廣等優點，該技術對CSFV的識別性很強，其靈敏度高達100%，可在臨床診斷中發揮重要作用；巢式PCR是使用2對PCR引物擴增完整的片段，可增強擴增過程中的特異性，提高檢測靈敏度；多重引物PCR與普通PCR相比，該檢測技術的反應原理和操作過程基本一致，其主要是通過將2對或2對以上的引物加入同一PCR反應體系中以擴增出多個核苷酸片段，在臨床樣品中病原體的快速診斷中可發揮重要作用，為實驗室診斷CSFV提供了一種高效、快速的方法；環介導等溫擴增技術無需任何儀器便可進行觀察，為在基層和現場推廣使用提供了便利。曾小娜（2009）等經研究發現，采用RT-LAMP法對80份疑似豬瘟病料進行診斷后發現檢測陽性率為38.75%，而采用RT-PCR法檢測陽性率為36.25%；而Chen（2009）等采用上述方法檢測疑似病例血液和扁桃體樣本中的豬瘟病毒，結果發現RT-LAMP法的檢測陽性率為89%，而RT-PCR法的檢測陽性率為78%，這表明RT-LAMP法的檢測敏感性較高。

1.3 基因芯片診斷技術

隨著分子生物學的不斷發展，為與微電子學等多學科交叉融合創造了條件，基因芯片就是上述學科融合而成的產物。其應用前景十分廣闊，是生命科學領域的又一次重大革命。基因芯片是指在硅化玻璃等很小的表面覆蓋上數量巨大的寡核苷酸，每一個寡核苷酸均可反映出大量的拷貝互補信息，不僅可用于測定DNA序列、病原及基因突變體檢測，還能鑒定基因表達譜，研究基因組相關功能等。基因芯片診斷技術為豬瘟診斷提供了新的技術理念，其診斷效率較高，可替代傳統方法，有望大幅提高豬瘟的防控水平。

2 展望

目前，除了用于定性的診斷方法外，兔體測毒法（定量）在豬瘟疫苗的效力檢驗及病毒滴度確定中仍然發揮著重要作用，但這種方法費力耗時，價格也相對較高，給推廣使用帶來了較大的困難。同時，由于兔體的敏感性存在個體差異，在一定程度上降低了標定活體病毒量的準確性。因此，積極研究一種可替代兔體測毒法的技術已成為應時之需。我國當前用于豬瘟抗原、抗體診斷的方法很多，但這些方法之間的相關性研究相對較少，因此針對上述方法標準化的制定會成為日后研究的趨勢。■（編輯：何芳）