桃金娘果實提取物抗氧化活性研究

楊為海等

摘 要 以去除種子后的桃金娘果實為試驗材料，分別采用等體積的水與體積分數(shù)80%甲醇進行提取，測定2種提取物的總酚與總黃酮含量，并對2種提取物的DPPH自由基與ABTS自由基清除能力以及總抗氧化能力進行評價。結(jié)果表明，桃金娘果實的2種提取物均具有不同程度的多酚含量與抗氧化活性，體積分數(shù)80%甲醇提取物的總酚與總黃酮含量、DPPH與ABTS自由基清除能力以及總抗氧化能力均顯著高于水提取物。研究結(jié)果表明，桃金娘果實多酚物質(zhì)具有良好的抗氧化活性。

關鍵詞 桃金娘果實；多酚；抗氧化活性；清除自由基

中圖分類號 S667.9 文獻標識碼 A

Antioxidant Activity of Rhodomyrtus tomentosa Fruit Extracts

YANG Weihai1，2， LIU Suifei3， ZOU Minghong1，2， ZENG Hui1，2，

ZHANG Hanzhou1，2， LU Chaozhong1，2*

1 South Subtropical Crops Research Institute， CATAS， Zhanjiang， Guangdong 524091， China

2 Key Laboratory of Tropical Fruit Biology， Ministry of Agriculture， Zhanjiang， Guangdong 524091， China

3 Jiang Xi Agricultural Engineering College， Zhangshu， Jiangxi 331200， China

Abstract The contents of the total phenolics and total flavonoids from the extracts of Rhodomyrtus tomentosa fruit without seeds were extracted with the same volume solvents water and 80% methanol and quantified. The antioxidant activities of the two extracts were screened using the total antioxidant capacity and the scavenging activities of DPPH and ABTS radicals. The results showed that both extracts of R. tomentosa fruit exhibited varying degrees of the polyphenol content and the antioxidant activity， the extractives from the 80% methanol exhibited significant higher contents of total phenolics， total flavonoids， stronger total antioxidant capacity and radical scavenging abilities on DPPH and ABTS than that from water. The results revealed that the polyphenol extractives from R. tomentosa fruit had good antioxidant activity.

Key words Rhodomyrtus tomentosa fruit；Polyphenols；Antioxidant activity；Radical scavenging

doi 10.3969/j.issn.1000-2561.2014.06.020

桃金娘[Rhodomyrtus tomentosa（Ait.）Hassk]，又稱桃娘、崗稔、山稔、稔子、豆稔等，系桃金娘科（Myrtaceae）桃金娘屬（Rhodomyrtus）常綠小灌木，主要分布于中國廣東、廣西、福建、臺灣、海南等地。桃金娘的根、葉和果均可入藥，是一種重要的藥用野生植物資源，具有較高的開發(fā)利用價值。

桃金娘果實為漿果，成熟時果皮呈紫黑色，果肉則呈紫紅色，肉質(zhì)多汁，營養(yǎng)豐富，具有良好的營養(yǎng)與保健功能。研究表明，桃金娘果實不僅富含人體所需的維生素、氨基酸、有機酸、礦物質(zhì)、糖類等營養(yǎng)成分[1-3]，而且含有黃酮苷[4-5]、花色苷[6-9]以及植物多糖類[10]等生物活性物質(zhì)。然而，有關桃金娘果實酚類物質(zhì)的抗氧化活性的研究尚未見報道。本文以去除種子后的桃金娘果實為材料，采用水與體積分數(shù)80%甲醇為溶劑獲得提取物，研究了2種提取物的總酚和總黃酮含量及其抗氧化活性的差異，旨在為開發(fā)和利用桃金娘果實這一傳統(tǒng)的營養(yǎng)保健食品資源提供理論指導和實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

供試桃金娘果實：已成熟的桃金娘果實采自廣東省湛江市中國熱帶農(nóng)業(yè)科學院南亞熱帶作物研究所種質(zhì)資源圃，將種子分離后，于-80 ℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/p>

主要儀器：紫外可見分光光度計UV-1200，上海美譜達儀器有限公司；電子分析天平ML204，梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司；高速冷凍離心機Heraeus Multifuge X1R，德國Thermo Fisher Scientific公司。

主要試劑：Folin-Cioealteu試劑、沒食子酸、蘆丁、Trolox（水溶性維生素E類似物）、DPPH、ABTS、TPTZ，均購自美國Sigma-Aldrich公司。

1.2 方法

1.2.1 提取物制備 將桃金娘果實去除種子后，于研缽中加液氮研磨成干粉狀，準確稱量2.0 g樣品至50 mL離心管中，加入20 mL提取溶劑（蒸餾水或80%甲醇），80 ℃水浴中提取30 min后，于4 ℃下離心（2 200×g）15 min，取上清液。沉淀物再用20 mL提取溶劑重復提取一次，合并2次的上清液，定容至40 mL，即為等體積的水提取物和80%甲醇提取物。

1.2.2 總酚含量測定 總酚含量參照福林酚法[11]進行測定，以沒食子酸標準品制作標準曲線。將0.5 mL提取物與2.5 mL 10% 的福林酚試劑混勻，黑暗中孵育5 min后，再加入2.0 mL 20%的Na2CO3，30 ℃水浴中避光反應1 h，于765 nm處測吸光值。

1.2.3 總黃酮含量測定 總黃酮含量測定參照Benamar[12]的方法，以蘆丁標準品制作標準曲線。將0.5 mL提取物與0.5 mL 5%的NaNO2溶液混勻，反應5 min后加入0.5 mL 10% 的AlCl3，靜置6 min后，再加入1.5 mL 1.0 mol/L NaOH，40 ℃水浴中避光孵育15 min，于510 nm處測吸光值。

1.2.4 抗氧化活性測定 DPPH自由基清除能力：參照Vieira等[13]的方法，稍加改動。取2.9 mL現(xiàn)配的DPPH溶液，于517 nm下測定初始吸光值（t0），再加入0.1 mL提取物，于30 ℃水浴中避光反應15 min后，立即測定其吸光值（t15）。樣品的DPPH自由基清除率（%）按[100 -（t15/t0）×100]計算，用Trolox為標準物制作標準曲線計算其抗氧化活性（mmol TE/g FW）。

ABTS自由基清除能力：參照Re等[14]的方法，略作修改。將現(xiàn)配的ABTS反應液用80%乙醇稀釋至734 nm處的吸光值為0.70±0.02，作為初始吸光值（t0）。取0.1 mL提取物與2.9 mL稀釋了的ABTS反應液混勻，30 ℃水浴中避光反應7 min后，立即測定其吸光值（t7）。樣品的ABTS自由基清除率（%）按[100-（t7/t0）×100]計算，以Trolox為標準物制作標準曲線，其抗氧化活性表示為mmol TE/g FW。

FRAP總抗氧化能力：參照Benzie等[15]的方法，略加改動。取0.15 mL提取物與2.85 mL 現(xiàn)配的FRAP試劑混勻，37 ℃水浴中避光反應20 min后，于593 nm下測定其吸光值。以FeSO4為標準物制作標準曲線計算其總抗氧化能力，單位表示為Mmol FeSO4/g FW。

1.3 統(tǒng)計分析

所有試驗結(jié)果數(shù)據(jù)均以3個重復測定值的平均值±標準差表示，并運用SPSS 10.0統(tǒng)計分析軟件按方差分析（ANOVA）進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，各處理組間的差異比較用LSD法檢驗，p<0.05有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果與分析

2.1 桃金娘果實不同提取物的總酚和總黃酮含量

以等體積的水和體積分數(shù)80%甲醇為提取溶劑，測得從桃金娘果實中提取得到的總酚（沒食子酸等效物）和總黃酮（蘆丁等效物）含量見表1。表1結(jié)果表明，體積分數(shù)80%甲醇提取物的總酚和總黃酮含量均顯著高于水提取物（p<0.05），分別是后者的2.26倍和1.95倍，說明體積分數(shù)80%甲醇溶劑的提取效果好。

2.2 桃金娘果實不同提取物的抗氧化活性

2.2.1 DPPH自由基清除能力 DPPH自由基是一種很穩(wěn)定的以氮為中心的有機自由基，其醇溶液為特征的紫色團吸收峰，具有孤對電子，能夠與抗氧化劑提供的電子配對結(jié)合，使DPPH的特征紫色變淺，因此可用于抗氧化劑清除自由基能力的評價。本研究中，以標準抗氧化劑Trolox為等效物的桃金娘果實2種溶劑提取物的DPPH自由基清除能力如表2所示。表2表明，體積分數(shù)80%甲醇提取物的DPPH自由基清除能力顯著高于水提取物（p<0.05），是后者的1.52倍。

2.2.2 ABTS自由基清除能力 ABTS經(jīng)氧化后生成相對穩(wěn)定的藍綠色的ABTS+水溶性自由基。抗氧化劑與ABTS自由基反應后使其溶液褪色，特征吸光值降低。溶液褪色越明顯，則表明所檢測物質(zhì)的總抗氧化能力越強。本研究以Trolox為標準計算桃金娘果實2種溶劑提取物的ABTS自由基清除能力，結(jié)果見表2。表2表明，體積分數(shù)80%甲醇提取物的ABTS自由基清除能力顯著高于水提取物（p<0.05），是后者的1.40倍。

2.2.3 總抗氧化能力 FRAP法是一種快速簡便、易于操作、重復性好的測定總抗氧化能力的方法。在一定條件下，待測生物活性物質(zhì)將Fe3+還原為Fe2+的能力越大，其抗氧化活性越強。本研究是以Fe2+當量計算桃金娘果實不同提取物的總抗氧化能力，結(jié)果見表2。表2表明，體積分數(shù)80%甲醇提取物的總抗氧化能力顯著高于水提取物（p<0.05），是后者的1.51倍。

3 討論與結(jié)論

活性氧代謝失調(diào)是自由基大量產(chǎn)生的主要途徑。自由基生物學研究認為，許多疾病的發(fā)生與自由基導致的大分子功能障礙如蛋白質(zhì)修飾、脂質(zhì)過氧化以及DNA損傷等有關[16]。植物多酚類物質(zhì)是天然的抗氧化劑，具有抗氧化、抑菌、抗致突變、抗衰老、抗炎癥等活性[17]。攝取天然抗氧化劑可有效地協(xié)助維持體內(nèi)自由基代謝的平衡，減少或防止相關疾病的發(fā)生[18]。Geetha等[19-20]研究了桃金娘葉片的抗氧化活性，發(fā)現(xiàn)桃金娘葉片的乙醇提取物具有較強的抗氧化活性。從本實驗結(jié)果可以看出，桃金娘果實提取物中含有較高的總酚與總黃酮含量，含量分別達到1.74～3.94 mg GaA/g FW與1.14～2.22 mg RU/g FW，說明桃金娘果實提取物含有較為豐富的多酚類化合物，并且對DPPH與ABTS自由基具有較好的清除效果，分別達到26.66～40.40 μmol TE/g FW與32.57～45.76 μmol TE/g FW，同時通過總抗氧化能力的測試，均能表明桃金娘果實提取物具有較好的抗氧化活性。然而，對于桃金娘果實提取物中的活性成分及其作用機理，還有待于進一步研究。

不同溶劑制備的提取物，其抗氧化活性顯著不同，這主要是與提取劑的極性有關[21]。不同溶劑對桃金娘果實中抗氧化物質(zhì)的溶解能力不同，所獲得的提取物中總酚和總黃酮含量顯著不同，以致不同溶劑提取物的清除DPPH和ABTS自由基能力以及總抗氧化能力的差異顯著。本研究結(jié)果表明，以體積分數(shù)80%甲醇為提取溶劑獲得的桃金娘果實提取物在總酚與總黃酮含量以及清除DPPH和ABTS自由基能力、總抗氧化能力等方面均顯著高于以水為提取溶劑獲得的提取物，說明體積分數(shù)80%甲醇比水能更好地從桃金娘果實中獲取抗氧化物質(zhì)。此外，桃金娘果實提取物的抗氧化活性高低與其所含的酚類物質(zhì)含量有關，至于相關的顯著性如何，還有待于進一步測試。

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責任編輯：黃 艷