湖北省桑屬植物親緣關系RAPD分析

陳祥平　范小敏　柯皓天　陳仁芳　朱一平　李螢　劉玲　張佳鈺　沈曦彤

摘要[目的]采用RAPD和ITS方法分析湖北省桑屬植物親緣關系。[方法]利用RAPD分析湖北省桑屬植物的親緣關系，并與ITS分支圖進行比較，研究湖北省桑屬植物親緣關系。[結果]兩者在分析桑屬的親緣關系時，均把桑屬分為2大支。其中，RAPD多態性高，適合居群遺傳多樣性分析；但RAPD資料屬等位基因頻率資料，不同種的RAPD擴增產物往往并不同源，不宜假定外類群，無法確定樹根。ITS為核糖體基因內轉錄間隔區的差異，位點的變異往往能反映出桑屬種間的差異，宜假定外類群，進行分支分析。但ITS資料并不能把桑屬所有桑種分開。[結論]在研究桑屬的親緣關系時，先用ITS進行粗略的分類后，再用RAPD進行細分的結果較準確。

關鍵詞湖北省；桑屬；RAPD；ITS；親緣關系；再分析

中圖分類號S888.3；Q948文獻標識碼A文章編號0517-6611（2014）07-01917-04

作者簡介陳祥平（1955-），男，四川成都人，副教授，碩士，從事蠶桑科學研究。*通訊作者，副教授，碩士生導師，博士，從事蠶桑新品種選育研究。

收稿日期20140210隨機擴增片段長度多態性DNA（random amplified polymorphic DNA，RAPD）標記，發明于20世紀90年代[1-2]，是在PCR基礎上發展起來的一種對未知序列基因組DNA進行隨機擴增，根據擴增的DNA條帶長度的多態性，判斷供試材料間的遺傳多樣性及親緣關系。桑樹隨機擴增多態性DNA，已有較多人研究[3-17]，但關于RAPD與核糖體內轉錄間隔區 （Internal Transcribed Spacer，ITS）對比分析的研究鮮有報道。筆者在前報《基于ITS標記分析湖北省收集桑種質資源的親緣關系》的基礎上[18]，選取相同材料，利用RAPD標記，對湖北省桑樹種質資源的親緣關系進行再分析，試圖比較2種方法各自的優缺點，以期為RAPD技術的進一步應用提供理論依據。

1 材料與方法

1.1材料 材料同前報，并增加浙江瑞穗桑、四川川桑、新疆黑桑、廣東荊桑、欽州長果桑、云南滇桑和外類群湖北構樹，增加的材料分別取自浙江農業大學桑品種園、新疆維吾爾自治區和田桑品種園、四川絲綢公司桑品種園、廣東省蠶桑研究所桑品種園、廣西欽州百果園和昆明植物園，所有材料經鑒定后采集（表1）。

1.2DNA提取及質量檢測 總DNA提取采用稍加改進的CTAB法[19]，從0.150 g的硅膠干燥桑葉中提取。質量和濃度用Nanodrop 2000微量紫外分光光度計檢測確認。