山茱萸不同部位提取物對α—葡萄糖苷酶的抑制作用

摘要[目的]測定山茱萸果肉和果核提取物對α葡萄糖苷酶的抑制作用，為山茱萸資源的藥用開發提供參考。[方法]采用乙醇和水分別對山茱萸果肉和果核進行提取，并測定其對α葡萄糖苷酶的抑制作用。[結果]山茱萸果核提取物對α-葡萄糖苷酶的抑制率分別為20倍醇提99.23%、30倍醇提98.96%、40倍醇提99.29%、20倍水提99.36%、30倍水提99.32%、40倍水提99.17%。山茱萸果肉提取物對α葡萄糖苷酶的抑制率分別為20倍醇提52.10%、30倍醇提60.77%、40倍醇提21.67%、20倍水提11.88%、30倍水提0.53%、40倍水提1.59%。[結論]山茱萸不同部位的水提取物和乙醇提取物對α葡萄糖苷酶均有一定的抑制作用，其中山茱萸果核部位對α葡萄糖苷酶的抑制作用最為顯著，其抑制率可高達99%以上，可見山茱萸果核中含有豐富的抑制α葡萄糖苷酶活性的物質，可作為藥用資源予以開發利用。

關鍵詞山茱萸；α葡萄糖苷酶；抑制作用

中圖分類號S567文獻標識碼A文章編號0517-6611（2014）23-07741-02

作者簡介張夙夙（1993- ），女，山東營口人，本科生，專業：生物技術。

收稿日期20140703山茱萸（Cornus officinalis Sieb.et Zucc.）別名蜀棗、鼠矢、雞足、山萸肉、實棗兒、棗皮、萸肉等，原植物為山茱木屬落葉小喬木[1]。我國河南、浙江、陜西、山西、安徽、四川等地均有分布和種植[2-3]。其性味酸、澀，微溫，歸肝、腎經，是中醫臨床常用的名貴傳統抗衰老藥物之一[4]。已有研究表明，山茱萸主要具有免疫調節、降血糖、抗氧化及抗癌等作用[5]。山茱萸常出現在中藥降血糖的組方中，目前的研究表明山茱萸的水提取物、乙醇提取物及其具體成分苷類、鞣質、糖蛋白、多糖、有機酸等均有降血糖的作用[6-7]。該試驗采用乙醇和水分別對山茱萸果肉和果核進行提取，并測定其對α-葡萄糖苷酶的抑制作用，進而反應山茱萸的降血糖作用。

1材料與方法

1.1試驗材料試驗所用的山茱萸來自陜西佛坪。將采摘的山茱萸果實洗凈晾干，果肉和果核分離并分別粉碎備用。試驗試劑主要包括乙醇、α葡萄糖苷酶、對硝基苯酚αD葡萄糖苷（PNPG）、K3HPO4、K3HPO4·3H2O等，主要儀器包括超聲儀、抽濾泵、抽濾瓶、布氏漏斗、試管、濾紙、96孔板、玻璃棒、水浴鍋、離心管、移液槍、酶標儀等。

1.2樣品制備分別精密稱取1 g山茱萸果核和果肉，加入20 ml 70%乙醇，于37 ℃下超聲提取30 min，抽濾，定容至20 ml。用乙醇稀釋為20、30和40倍的體系作為樣品溶液。分別精密稱取1 g山茱萸果核和果肉，加入20 ml蒸餾水，于37 ℃下超聲提取30 min，抽濾，定容至20 ml。用水稀釋為20、30和40倍的體系作為樣品溶液。

以醇提山茱萸果肉為例說明稀釋倍數，稀釋20倍為50 μl醇提樣品+950 μl 70%乙醇，稀釋30倍為30 μl醇提樣品+870 μl 70%乙醇，稀釋40倍為25 μl醇提樣品+975 μl 70%乙醇。

1.3測定酶抑制率

1.3.196孔板的加樣。在96孔板中依次加樣，其中樣品對照組為樣品溶液8 μl+磷酸鉀緩沖液150 μl，樣品測定組為樣品溶液8 μl+3 U/ml α-葡萄糖苷酶15 μl+磷酸鉀緩沖液150 μl，對照組為3 U/ml α-葡萄糖苷酶15 μl + 磷酸鉀緩沖液150 μl，空白對照組為磷酸鉀緩沖液150 μl。以果肉對α-葡萄糖苷酶抑制作用的測定為例，A1、A3和A5為果肉醇提取物的樣品對照組，A2、A4和A6為果肉醇提物的樣品測定組，其中A1和A2加的樣品溶液為果肉的20倍醇提取物，A3和A4加的樣品溶液為果肉的30倍醇提取物，A5和A6加的樣品溶液為果肉的40倍醇提取物；A7、A9和A11為果肉水提取物的樣品對照組，A8、A10和A12為果肉水提取物的樣品測定組，其中A7和A8加的樣品溶液為果肉的20倍水提取物，A9和A10加的樣品溶液為果肉的30倍水提取物，A11和A12加的樣品溶液為果肉的40倍水提取物；B和C兩行分別是A的重復試驗，E和F兩行分別是D的重復試驗（）。

1.3.2光密度的測定。37 ℃恒溫水浴15 min后，對照組和樣品測定組分別加入10 mmol/L的PNPG 30 μl，37 ℃恒溫反應15 min后，樣品對照組、樣品測定組、對照組和空白對照組分別加入濃度為0.2 mol/L的Na2CO3溶液40 μl，利用酶標儀于405 nm波長下測定光密度（OD）。

1.3.3酶抑制率的計算。根據該試驗方法按公式計算樣品的抑制率，即樣品的百分抑制率I（%）=[1-（c-d）/（a-b）]×100%，式中，a、b、c、d分別為對照組、空白對照組、樣品測定組、樣品對照組的OD值。

2結果與分析

從山茱萸不同部位提取物對葡萄糖苷酶的抑制率（）可以看出，山茱萸果核提取物對α葡萄糖苷酶的抑制率分別為20倍醇提99.23%、30倍醇提98.96%、40倍醇提9929%，20倍水提9936%、30倍水提99.32%、40倍水提9917%；山茱萸果肉提取物對α葡萄糖苷酶的抑制率分別為20倍醇提52.10%、30倍醇提60.77%、40倍醇提21.67%，20倍水提11.88%、30倍水提0.53%、40倍水提1.59%。可見，山茱萸果核提取物對α葡萄糖苷酶的抑制率明顯高于山茱萸果肉提取物對α葡萄糖苷酶的抑制率；其中對于山茱萸果肉有效成分的提取，20倍醇提和30倍醇提的效果較好，水提的效果并不理想；而對于山茱萸果核有效成分的提取，水提和醇提的效率均很高，基本維持在99%以上。該研究結果表明，山茱萸不同部位的水提取物和乙醇提取物對α葡萄糖苷酶均有一定的抑制作用，其中山茱萸果核部位對α-葡萄糖苷酶的抑制作用最為顯著，其抑制率可高達99%以上，可見山茱萸果核中含有豐富的抑制α葡萄糖苷酶活性的物質，可作為藥用資源予以開發利用。

96孔板的加樣順序

山茱萸不同部位提取物對葡萄糖苷酶的抑制率%

提取物果肉20倍30倍40倍果核20倍30倍40倍乙醇提取物52.1060.7721.6799.2398.9699.29水提取物11.880.531.5999.3699.3299.17

3結論

采用乙醇和水分別對山茱萸果肉和果核進行提取，測定山茱萸果肉和果核提取物對α葡萄糖苷酶的抑制作用，進而反應山茱萸的降血糖作用。研究結果表明，山茱萸果核提取物對α葡萄糖苷酶的抑制率明顯高于山茱萸果肉提取物對α葡萄糖苷酶的抑制率；其中對于山茱萸果肉有效成分的提取，20倍醇提和30倍醇提的效果較好，水提的效果并不理想；而對于山茱萸果核有效成分的提取，水提和醇提的效率均很高。可見，山茱萸不同部位的水提取物和乙醇提取物對α葡萄糖苷酶均有一定的抑制作用，其中山茱萸果核部位對α葡萄糖苷酶的抑制作用最為顯著，其抑制率可高達99%以上，說明山茱萸果核中含有豐富的抑制α-葡萄糖苷酶活性的物質，可作為藥用資源予以開發利用，為山茱萸資源的藥用開發提供參考。

參考文獻

[1] 周京華，李春生，李電東.山茱萸有效化學成分的研究進展[J].中國新藥雜志，2001，10（11）：808-812.

[2] 叔小燕，侯大斌，阮期平.山茱萸的研究進展[J].中國藥業，2007，16（10）：60-62.

[3] 張聰，金德莊.山茱萸的研究進展[J].上海醫藥，2008，29（10）：464-467.

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