不同貝母的指紋圖譜鑒別研究

閔會 吳健 胡江寧 葉劍鋒

摘要 [目的]建立指紋圖譜方法，區分與鑒別浙貝母、平貝母、川貝母藥材。[方法]采用高效液相色譜法，蒸發光散射檢測器。[結果]測定方法穩定可靠，3種貝母測定精密度、重復性RSD均小于5%，同時色譜峰均具有各自的特征性。[結論]該方法穩定可靠，可作為浙貝母、平貝母、川貝母區分與判定的有效途徑。

關鍵詞 浙貝母;平貝母;川貝母;HPLCELSD;指紋圖譜

中圖分類號 S188 ?文獻標識碼 A ?文章編號 0517-6611（2014）34-12051-02

The Identification of Different Fritillaria Species by Fingerprints

MIN Hui2， WU Jian2， HU Jiangning2， YE JianFeng1

（

1. Zhejiang Conba Drug Discovery & Development Co. Ltd.， Hangzhou， Zhejiang 310052;2. Zhejiang Conba Pharmaceutical Co. Ltd.， Hangzhou， Zhejiang 310052）

Abstract [Objective] To establish a fingerprint determination method to distinguish and identify Fritillariae thunbergii bulbus， Fritillariae cirrhosae bulbus， Fritillariae ussuriensis bulbus.[Method] HPLC and ELSD were adopted. [Result] The method is reliable， the reproducibility and precision of Fritillariae thunbergii bulbus， Fritillariae cirrhosae bulbus， Fritillariae ussuriensis bulbus are all less than 5%， and the chromatographic peaks are characterized. [Conclusion] This method is stable and reliable， it can be a good method to distinguish and identify Fritillariae thunbergii Bulbus， Fritillariae cirrhosae bulbus， Fritillariae ussuriensis bulbus.

Key words Fritillariae thunbergii bulbus; Fritillariae cirrhosae bulbus; Fritillariae ussuriensis bulbus; HPLCELSD; Fingerprint

基金項目 國家科技支撐計劃項目（2011BAI04B06）;浙江省重點實驗室和中試基地計劃項目（2009E10009）;浙江省企業研究院項目（2010E90011）。

浙貝母（Fritillariae thunbergi ibulbus.）為百合科貝母屬浙貝母的干燥鱗莖，為傳統常用中藥之一，被列為著名的“浙八味”之一，其味苦、性寒，有清熱潤肺、化痰止咳、散結消腫等功效。川貝母（Fritillariae cirrhosae bulbus.）為百合科植物川貝母的干燥鱗莖，是潤肺止咳的名貴中藥材，具有良好的止咳化痰功效，且能養肺陰、宣肺、潤肺而清肺熱，是一味治療久咳痰喘的良藥。平貝母（Fritillariae ussuriensis bulbus.）為百合科植物平貝母的干燥鱗莖，有清熱潤肺、止咳化痰的作用，為一種常用中藥，與川貝母、漸貝母同屬貝母屬，但在藥用上有一定差別，3種貝母藥材均具有止咳化痰功效，其有效成分均為生物堿類物質。但由于其內在生物堿類成分種類不同，藥用上存在一定差別。目前市場上的貝母品種較多，且價格差別大，以川貝母價格最高，存在互相代替或者以偽替真的現象。由于眾多原因，從性狀、顯微、理化上不易將它們區別開，同時采用傳統的薄層鑒別法人為影響因素大，重現性不好，無法將三者共性與特性進行良好的展現與區分，故急需建立一種良好的方法將三者進行有效的指認與區分。

高效液相色譜法具有高效、快速、穩定的特點，重現性好，靈敏度高。同時中藥材指紋圖譜的建立是藥材鑒別的新標準，能夠全面反映中藥材化學成分的種類與數量，從整體上反映中藥材的特性。采用高效液相色譜法建立中藥材指紋圖譜用以鑒定中藥材特性，穩定、可靠、重現性高，目前已得到國際公認，亦是未來發展趨勢。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

浙貝母樣品來自浙江寧波、磐安、舟山產地，川貝母樣品分別購自華東中藥飲片有限公司及康恩貝集團醫療保健品有限公司，平貝母樣品購自吉林省藥房。貝母素甲標準品（11750201311）、貝母素乙標準品（110751201110）均購自中國食品藥品檢定研究院，含量分別以97.3%、99.9%計。

表1 不同貝母樣品信息

樣品名稱批號樣品名稱批號

平貝母1103001川貝母120118

平貝母20100412浙貝母120538

平貝母070118浙貝母120552

平貝母110710868浙貝母120572

川貝母120308浙貝母1205114

川貝母110501浙貝母1205136

川貝母120401

1.2 儀器

BS210S電子天平（德國賽多利斯）、HH.S電熱恒溫水浴鍋（上海精宏實驗設備有限公司）、Agilent1200液相色譜儀（ELSD）（美國Aglient公司）。

1.3 方法

1.3.1 標準品溶液的制備。取貝母素甲標準品、貝母素乙標準品適量，精密稱定，加甲醇溶解，即得。

1.3.2 供試品溶液的制備。

取本品粉末（過四號篩）約2.0 g，精密稱定，置具塞燒瓶中，加濃氨試液4 ml浸潤1 h，精密加入氯仿∶甲醇（4∶1）的混合溶液40 ml，稱定重量，混勻，置于80 ℃水浴中加熱回流2 h，放冷，精密加入6 ml無水乙醇，用力搖勻，濾過，精密量取續濾液20 ml，水浴蒸干，殘渣加5 ml甲醇溶解，濾過，取續濾液，即得。

1.3.3 測定方法。

色譜條件：色譜柱：以十八烷基鍵合硅膠為固定相;流動相：甲醇（含0.05%三乙胺）[1]，水梯度洗脫：0～10 min甲醇（含0.05%三乙胺）由60到70;10～35 min甲醇（含0.05%三乙胺）由70到90，35～50 min甲醇（含0.05%三乙胺）由90到100，50～60 min甲醇（含0.05%三乙胺）保持100;流速1.0 ml/min;記錄60 min色譜圖;進樣量：供試品及對照品溶液各20 μl;ELSD條件：漂移管溫度70 ℃;氮氣流速1.6 L/min。

2 結果與分析

2.1 方法學驗證

2.1.1 浙貝母。

2.1.1.1 精密度試驗。

取“1.3.2”方法制備供試品溶液，參照“1.3.3”測定方法連續進樣6次，記錄色譜圖，以貝母素乙的色譜峰為參照峰，各色譜峰相對保留時間和相對峰面積的RSD分別在0～0.16%、0～4.02%，精密度良好。

2.1.1.2 重復性試驗。

參照“1.3.2”方法制備供試品溶液6份，參照“1.3.3”測定方法測定，記錄色譜圖，以貝母素乙的色譜峰為參照峰，各色譜峰相對保留時間和相對峰面積的RSD分別在0～0.32%、0～4.46%，重復性良好。

2.1.1.3 穩定性試驗。

取“1.3.2”方法制備供試品溶液，參照“1.3.3”測定方法記錄0、4、8、12、24 h的色譜圖。各色譜峰相對保留時間、相對峰面積的RSD分別在0～0.33%、0～3.82%，供試品溶液在24 h內穩定。

2.1.2 平貝母。

2.1.2.1 精密度試驗。

取“1.3.2”方法制備供試品溶液，參照“1.3.3”測定法連續進樣6次，記錄色譜圖，以貝母素乙的色譜峰為參照峰，各色譜峰相對保留時間、相對峰面積的RSD分別在0～0.30%、0～1.97%，精密度良好。

2.1.2.2 重復性試驗。

參照“1.3.2”方法制備供試品溶液6份，參照“1.3.3”測定方法測定，記錄色譜圖，以貝母素乙的色譜峰為參照峰，各色譜峰相對保留時間和相對峰面積的RSD分別在0～0.26%、0～3.15%，重復性良好。

2.1.2.3 穩定性試驗。

取“1.3.2”方法制備供試品溶液，參照“1.3.3”測定法記錄0、4、8、12、24 h的色譜圖。各色譜峰相對保留時間、相對峰面積的RSD分別在0～0.22%、0～3.20%，供試品溶液在24 h內穩定。

2.1.3 川貝母。

2.1.3.1 精密度試驗。

取“1.3.2”方法制備供試品溶液，參照“1.3.3”測定法連續進樣6次，記錄色譜圖，以貝母素乙的色譜峰為參照峰，各色譜峰相對保留時間、相對峰面積的RSD分別在0～0.47%、0～3.80%，精密度良好。

2.1.3.2 重復性試驗。

參照“1.3.2”方法制備供試品溶液6份，參照“1.3.3”測定法測定，記錄色譜圖，以貝母素乙的色譜峰為參照峰，各色譜峰相對保留時間和相對峰面積的RSD分別在0～0.47%、0～4.82%，重復性良好。

2.1.3.3 穩定性試驗。

取“1.3.2”方法制備供試品溶液，參照“1.3.3”測定法記錄0、4、8、12、24 h的色譜圖。各色譜峰相對保留時間、相對峰面積的RSD分別在0～0.30%、0～4.80%，供試品溶液在24 h內穩定。

2.2 不同貝母指紋圖譜 由圖1可知，不同貝母指紋圖譜特征存在明顯差異。浙貝母色譜峰個數最多，且峰響應也最大，其次為平貝母，川貝母樣品色譜峰個數較少，且峰響應亦較小。與此同時，浙貝母、平貝母、川貝母亦存在共有峰峰1、峰2、峰4、峰7。

浙貝母樣品其特征圖譜中峰5、峰6為各色譜峰中相應最大色譜峰，且滿足峰5<峰6;平貝母樣品其特征圖譜中峰1、峰2響應最大，峰5、峰6響應較小;川貝母樣品其特征圖譜中峰1、峰2響應最大，但在峰5、峰6出峰處無明顯色譜峰出現。

圖1 不同貝母指紋圖譜分析測定結果

3 討論

張建興[2]研究表明，浙貝母中含有浙貝甲素、浙貝乙素、

貝母辛、貝母芬，貝母啶、貝母替啶、原貝母堿、異浙貝甲素