萎縮芽孢桿菌生理生化特征與檢測鑒定

李萌萌等

摘 要：萎縮芽孢桿菌舊稱“枯草芽孢桿菌黑色變種”，是芽孢桿菌屬的一個重要種。該研究以其生理生化特征試驗為基礎，探索萎縮芽孢桿菌的便捷檢測方法。通過生化試驗完成的萎縮芽孢桿菌ATCC 9372 生化譜，可用于萎縮芽孢桿菌的檢測。

關鍵詞：萎縮芽孢桿菌；生理生化特征；檢測鑒定

中圖分類號 Q93-331 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）07-33-03

1952年，Smith等人[1]發現萎縮芽孢桿菌原始菌株 NRS-1221A能在含酪氨酸培養基上產生黑色素，根據這一特性將NRS-1221A歸到枯草芽孢桿菌黑色變種新種中。1989年，Nakamura[2]提出將枯草芽孢桿菌黑色變種改名為萎縮芽孢桿菌，以區別于枯草芽孢桿菌。目前，國際上將ATCC 9372稱為萎縮芽孢桿菌，國內仍使用枯草桿菌黑色變種這一命名方式。萎縮芽孢桿菌細胞寬0.5～1.0μm，長2.0～4.0μm，可運動，好氧生長；芽孢橢圓形、中生、不膨大，無芽孢壁[3]。萎縮芽孢桿菌能產生孢子而耐受不良環境，能在80℃以上的溫度生長，抗性強[4]，無致病性，廣泛應用于醫療[5]、工業、農業和衛生[6]等領域。國際上將萎縮芽孢桿菌ATCC 9372作為消毒檢測以及滅菌質量控制標準菌株[7]。目前，萎縮芽孢桿菌的研究重點在于其應用，在生理生化特征方面，如何便捷地有效區分萎縮芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌，還未見文獻報道。本文從生理生化方面對萎縮芽孢桿菌進行研究，旨在為檢測萎縮芽孢桿菌提供實驗基礎。

1 材料與方法

1.1 菌株 本研究中萎縮芽孢桿菌ATCC 9372有2種形式：一種為萎縮芽孢桿菌菌粉；另一種為萎縮芽孢桿菌的芽孢懸液。另選取8種芽孢桿菌屬菌株，本研究中使用的菌株均購自中國工業微生物菌種保藏管理中心CICC，列于表1中。

3 討論與結論

萎縮芽孢桿菌ATCC 9372，國內稱“枯草芽孢桿菌黑色變種”，芽孢桿菌屬新種，在干熱、環氧乙烷等殺菌效果評價試驗作為指示菌運用廣泛。近年來對萎縮芽孢桿菌的生化鑒定和產黑色素特征研究較少。目前，國內外的研究方向主要是對萎縮芽孢桿菌的抗逆性研究[11-12]，但如何便捷有效地區分萎縮芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌卻鮮有報道。本研究主要通過對萎縮芽孢桿菌生理生化特征的研究，提出便捷的萎縮芽孢桿菌檢測方法。

黑色素是一種廣泛存在于微生物、植物和動物中的色素。黑色素的形成是通過酪氨酸酶催化L-酪氨酸成多巴，再經過一系列聚合反應合成的[10]。萎縮芽孢桿可在本研究中使用的酪氨酸培養基上產生黑色素。而其它8種芽孢桿菌能生長但不產生黑色素。因此，在酪氨酸平板上產生黑色素這一特性應可用于萎縮芽孢桿菌的初步判定。

法國梅里埃API微生物鑒定系統由于其簡單、可靠和快速而應用廣泛。本研究中選用了用于鑒定芽孢桿菌的API 50 CHB試劑條檢測供試菌株，結果表明其無法區分萎縮芽孢桿菌與枯草芽孢桿菌。而本研究生化試驗得到的萎縮芽孢桿菌ATCC 9372生化譜不僅有效豐富了萎縮芽孢桿菌的生化特征，而且能清晰地將萎縮芽孢桿菌ATCC 9372與其它8種類似芽孢桿菌區別開來，可用于萎縮芽孢桿菌的檢測鑒定。

參考文獻

[1]Fritze，D.，and Pukall，R.2001.Reclassification of bioindicator Bacillus subtilis DSM 675 and Bacillus subtilis DSM 2277 as Bacillus atrophaeus[J].Int J Syst Evol Micr，2001，51： 35-37.

[2]Nakamura，L K.Taxonomic relationship of black-pigmented Bacillus subtilis strains and a proposal for Bacillus atrophaeus sp.nov[J].International Journal of Systematic Bacteriology，1989，39（3）： 295–300.

[3]劉波，李紅，姚栗.枯草芽孢桿菌黑色變種ATCC 9372的特性及其應用[J].中國消毒學雜志，2009，26（2）：236.

[4]曾新平，李磊，唐文偉.酸性氧化電位水對枯草桿菌黑色變種芽孢的殺滅效果與影響因素研究[J].中國消毒學雜志，2013，30（3）：208.

[5]Lewis，D.L.，M.Arens.Resistance of microorganisms to disinfection in dental and medical services[J].Nat.Med.1995，1：956–958.

[6]Dancer，S.J.Importance of the environment in meticillin-resistant Staphylococcus aureus acquisition： the case for hospital cleaning[J].Lancet Infect.Dis，2008，8：101–113.

[7]The United States Pharmacopoeial Convention.USP35-NF30.United States Pharmacopoeia[S].THE United States： United States Pharmacopoeia Convection Rockyille，2011：2 357-2 361.

[8]EDQM.European Pharmacopoeia（Seven Edition）[S].France：European Pharmacopoeia Commission，2010.

[9]中華人民共和國衛生部.GB/T 15981–1995消毒與滅菌效果的評價方法與標準[S].北京：中國標準出版社，1995：257.

[10]徐燕，陳越英，吳曉松.環氧乙烷滅菌生物指示物抗力實驗研究[J].中國消毒學雜志，2013，30（3）：208.

[11]Sella，B.R，Guizelini，B.P，Gouvea，P.M，et al.Relations between phenotypic changes of spores and biofilm production by Bacillus atrophaeus ATCC 9372 growing in solid-state fermentation[J].Arch Microbiol，2012，194：815–825.

[12]Nicholson，W.L.，N.Munakata，et al.Resistance of Bacillus endospores to extreme terrestrial and extraterrestrial environments[J].Microbiol.Mol.Biol. Rev，2000，64：548-572.

[13]朱琳，商倩倩，游偲.一株產黑色素海洋細菌的篩選、鑒定及發酵條件優化[J].海洋環境科學，2011，30（5）：686.

（責編：施婷婷）

摘 要：萎縮芽孢桿菌舊稱“枯草芽孢桿菌黑色變種”，是芽孢桿菌屬的一個重要種。該研究以其生理生化特征試驗為基礎，探索萎縮芽孢桿菌的便捷檢測方法。通過生化試驗完成的萎縮芽孢桿菌ATCC 9372 生化譜，可用于萎縮芽孢桿菌的檢測。

關鍵詞：萎縮芽孢桿菌；生理生化特征；檢測鑒定

中圖分類號 Q93-331 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）07-33-03

1952年，Smith等人[1]發現萎縮芽孢桿菌原始菌株 NRS-1221A能在含酪氨酸培養基上產生黑色素，根據這一特性將NRS-1221A歸到枯草芽孢桿菌黑色變種新種中。1989年，Nakamura[2]提出將枯草芽孢桿菌黑色變種改名為萎縮芽孢桿菌，以區別于枯草芽孢桿菌。目前，國際上將ATCC 9372稱為萎縮芽孢桿菌，國內仍使用枯草桿菌黑色變種這一命名方式。萎縮芽孢桿菌細胞寬0.5～1.0μm，長2.0～4.0μm，可運動，好氧生長；芽孢橢圓形、中生、不膨大，無芽孢壁[3]。萎縮芽孢桿菌能產生孢子而耐受不良環境，能在80℃以上的溫度生長，抗性強[4]，無致病性，廣泛應用于醫療[5]、工業、農業和衛生[6]等領域。國際上將萎縮芽孢桿菌ATCC 9372作為消毒檢測以及滅菌質量控制標準菌株[7]。目前，萎縮芽孢桿菌的研究重點在于其應用，在生理生化特征方面，如何便捷地有效區分萎縮芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌，還未見文獻報道。本文從生理生化方面對萎縮芽孢桿菌進行研究，旨在為檢測萎縮芽孢桿菌提供實驗基礎。

1 材料與方法

1.1 菌株 本研究中萎縮芽孢桿菌ATCC 9372有2種形式：一種為萎縮芽孢桿菌菌粉；另一種為萎縮芽孢桿菌的芽孢懸液。另選取8種芽孢桿菌屬菌株，本研究中使用的菌株均購自中國工業微生物菌種保藏管理中心CICC，列于表1中。

3 討論與結論

萎縮芽孢桿菌ATCC 9372，國內稱“枯草芽孢桿菌黑色變種”，芽孢桿菌屬新種，在干熱、環氧乙烷等殺菌效果評價試驗作為指示菌運用廣泛。近年來對萎縮芽孢桿菌的生化鑒定和產黑色素特征研究較少。目前，國內外的研究方向主要是對萎縮芽孢桿菌的抗逆性研究[11-12]，但如何便捷有效地區分萎縮芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌卻鮮有報道。本研究主要通過對萎縮芽孢桿菌生理生化特征的研究，提出便捷的萎縮芽孢桿菌檢測方法。

黑色素是一種廣泛存在于微生物、植物和動物中的色素。黑色素的形成是通過酪氨酸酶催化L-酪氨酸成多巴，再經過一系列聚合反應合成的[10]。萎縮芽孢桿可在本研究中使用的酪氨酸培養基上產生黑色素。而其它8種芽孢桿菌能生長但不產生黑色素。因此，在酪氨酸平板上產生黑色素這一特性應可用于萎縮芽孢桿菌的初步判定。

法國梅里埃API微生物鑒定系統由于其簡單、可靠和快速而應用廣泛。本研究中選用了用于鑒定芽孢桿菌的API 50 CHB試劑條檢測供試菌株，結果表明其無法區分萎縮芽孢桿菌與枯草芽孢桿菌。而本研究生化試驗得到的萎縮芽孢桿菌ATCC 9372生化譜不僅有效豐富了萎縮芽孢桿菌的生化特征，而且能清晰地將萎縮芽孢桿菌ATCC 9372與其它8種類似芽孢桿菌區別開來，可用于萎縮芽孢桿菌的檢測鑒定。

參考文獻

[1]Fritze，D.，and Pukall，R.2001.Reclassification of bioindicator Bacillus subtilis DSM 675 and Bacillus subtilis DSM 2277 as Bacillus atrophaeus[J].Int J Syst Evol Micr，2001，51： 35-37.

[2]Nakamura，L K.Taxonomic relationship of black-pigmented Bacillus subtilis strains and a proposal for Bacillus atrophaeus sp.nov[J].International Journal of Systematic Bacteriology，1989，39（3）： 295–300.

[3]劉波，李紅，姚栗.枯草芽孢桿菌黑色變種ATCC 9372的特性及其應用[J].中國消毒學雜志，2009，26（2）：236.

[4]曾新平，李磊，唐文偉.酸性氧化電位水對枯草桿菌黑色變種芽孢的殺滅效果與影響因素研究[J].中國消毒學雜志，2013，30（3）：208.

[5]Lewis，D.L.，M.Arens.Resistance of microorganisms to disinfection in dental and medical services[J].Nat.Med.1995，1：956–958.

[6]Dancer，S.J.Importance of the environment in meticillin-resistant Staphylococcus aureus acquisition： the case for hospital cleaning[J].Lancet Infect.Dis，2008，8：101–113.

[7]The United States Pharmacopoeial Convention.USP35-NF30.United States Pharmacopoeia[S].THE United States： United States Pharmacopoeia Convection Rockyille，2011：2 357-2 361.

[8]EDQM.European Pharmacopoeia（Seven Edition）[S].France：European Pharmacopoeia Commission，2010.

[9]中華人民共和國衛生部.GB/T 15981–1995消毒與滅菌效果的評價方法與標準[S].北京：中國標準出版社，1995：257.

[10]徐燕，陳越英，吳曉松.環氧乙烷滅菌生物指示物抗力實驗研究[J].中國消毒學雜志，2013，30（3）：208.

[11]Sella，B.R，Guizelini，B.P，Gouvea，P.M，et al.Relations between phenotypic changes of spores and biofilm production by Bacillus atrophaeus ATCC 9372 growing in solid-state fermentation[J].Arch Microbiol，2012，194：815–825.

[12]Nicholson，W.L.，N.Munakata，et al.Resistance of Bacillus endospores to extreme terrestrial and extraterrestrial environments[J].Microbiol.Mol.Biol. Rev，2000，64：548-572.

[13]朱琳，商倩倩，游偲.一株產黑色素海洋細菌的篩選、鑒定及發酵條件優化[J].海洋環境科學，2011，30（5）：686.

（責編：施婷婷）

摘 要：萎縮芽孢桿菌舊稱“枯草芽孢桿菌黑色變種”，是芽孢桿菌屬的一個重要種。該研究以其生理生化特征試驗為基礎，探索萎縮芽孢桿菌的便捷檢測方法。通過生化試驗完成的萎縮芽孢桿菌ATCC 9372 生化譜，可用于萎縮芽孢桿菌的檢測。

關鍵詞：萎縮芽孢桿菌；生理生化特征；檢測鑒定

中圖分類號 Q93-331 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）07-33-03

1952年，Smith等人[1]發現萎縮芽孢桿菌原始菌株 NRS-1221A能在含酪氨酸培養基上產生黑色素，根據這一特性將NRS-1221A歸到枯草芽孢桿菌黑色變種新種中。1989年，Nakamura[2]提出將枯草芽孢桿菌黑色變種改名為萎縮芽孢桿菌，以區別于枯草芽孢桿菌。目前，國際上將ATCC 9372稱為萎縮芽孢桿菌，國內仍使用枯草桿菌黑色變種這一命名方式。萎縮芽孢桿菌細胞寬0.5～1.0μm，長2.0～4.0μm，可運動，好氧生長；芽孢橢圓形、中生、不膨大，無芽孢壁[3]。萎縮芽孢桿菌能產生孢子而耐受不良環境，能在80℃以上的溫度生長，抗性強[4]，無致病性，廣泛應用于醫療[5]、工業、農業和衛生[6]等領域。國際上將萎縮芽孢桿菌ATCC 9372作為消毒檢測以及滅菌質量控制標準菌株[7]。目前，萎縮芽孢桿菌的研究重點在于其應用，在生理生化特征方面，如何便捷地有效區分萎縮芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌，還未見文獻報道。本文從生理生化方面對萎縮芽孢桿菌進行研究，旨在為檢測萎縮芽孢桿菌提供實驗基礎。

1 材料與方法

1.1 菌株 本研究中萎縮芽孢桿菌ATCC 9372有2種形式：一種為萎縮芽孢桿菌菌粉；另一種為萎縮芽孢桿菌的芽孢懸液。另選取8種芽孢桿菌屬菌株，本研究中使用的菌株均購自中國工業微生物菌種保藏管理中心CICC，列于表1中。

3 討論與結論

萎縮芽孢桿菌ATCC 9372，國內稱“枯草芽孢桿菌黑色變種”，芽孢桿菌屬新種，在干熱、環氧乙烷等殺菌效果評價試驗作為指示菌運用廣泛。近年來對萎縮芽孢桿菌的生化鑒定和產黑色素特征研究較少。目前，國內外的研究方向主要是對萎縮芽孢桿菌的抗逆性研究[11-12]，但如何便捷有效地區分萎縮芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌卻鮮有報道。本研究主要通過對萎縮芽孢桿菌生理生化特征的研究，提出便捷的萎縮芽孢桿菌檢測方法。

黑色素是一種廣泛存在于微生物、植物和動物中的色素。黑色素的形成是通過酪氨酸酶催化L-酪氨酸成多巴，再經過一系列聚合反應合成的[10]。萎縮芽孢桿可在本研究中使用的酪氨酸培養基上產生黑色素。而其它8種芽孢桿菌能生長但不產生黑色素。因此，在酪氨酸平板上產生黑色素這一特性應可用于萎縮芽孢桿菌的初步判定。

法國梅里埃API微生物鑒定系統由于其簡單、可靠和快速而應用廣泛。本研究中選用了用于鑒定芽孢桿菌的API 50 CHB試劑條檢測供試菌株，結果表明其無法區分萎縮芽孢桿菌與枯草芽孢桿菌。而本研究生化試驗得到的萎縮芽孢桿菌ATCC 9372生化譜不僅有效豐富了萎縮芽孢桿菌的生化特征，而且能清晰地將萎縮芽孢桿菌ATCC 9372與其它8種類似芽孢桿菌區別開來，可用于萎縮芽孢桿菌的檢測鑒定。

參考文獻

[1]Fritze，D.，and Pukall，R.2001.Reclassification of bioindicator Bacillus subtilis DSM 675 and Bacillus subtilis DSM 2277 as Bacillus atrophaeus[J].Int J Syst Evol Micr，2001，51： 35-37.

[2]Nakamura，L K.Taxonomic relationship of black-pigmented Bacillus subtilis strains and a proposal for Bacillus atrophaeus sp.nov[J].International Journal of Systematic Bacteriology，1989，39（3）： 295–300.

[3]劉波，李紅，姚栗.枯草芽孢桿菌黑色變種ATCC 9372的特性及其應用[J].中國消毒學雜志，2009，26（2）：236.

[4]曾新平，李磊，唐文偉.酸性氧化電位水對枯草桿菌黑色變種芽孢的殺滅效果與影響因素研究[J].中國消毒學雜志，2013，30（3）：208.

[5]Lewis，D.L.，M.Arens.Resistance of microorganisms to disinfection in dental and medical services[J].Nat.Med.1995，1：956–958.

[6]Dancer，S.J.Importance of the environment in meticillin-resistant Staphylococcus aureus acquisition： the case for hospital cleaning[J].Lancet Infect.Dis，2008，8：101–113.

[7]The United States Pharmacopoeial Convention.USP35-NF30.United States Pharmacopoeia[S].THE United States： United States Pharmacopoeia Convection Rockyille，2011：2 357-2 361.

[8]EDQM.European Pharmacopoeia（Seven Edition）[S].France：European Pharmacopoeia Commission，2010.

[9]中華人民共和國衛生部.GB/T 15981–1995消毒與滅菌效果的評價方法與標準[S].北京：中國標準出版社，1995：257.

[10]徐燕，陳越英，吳曉松.環氧乙烷滅菌生物指示物抗力實驗研究[J].中國消毒學雜志，2013，30（3）：208.

[11]Sella，B.R，Guizelini，B.P，Gouvea，P.M，et al.Relations between phenotypic changes of spores and biofilm production by Bacillus atrophaeus ATCC 9372 growing in solid-state fermentation[J].Arch Microbiol，2012，194：815–825.

[12]Nicholson，W.L.，N.Munakata，et al.Resistance of Bacillus endospores to extreme terrestrial and extraterrestrial environments[J].Microbiol.Mol.Biol. Rev，2000，64：548-572.

[13]朱琳，商倩倩，游偲.一株產黑色素海洋細菌的篩選、鑒定及發酵條件優化[J].海洋環境科學，2011，30（5）：686.

（責編：施婷婷）