褐黃水灰蘚2種提取液抑菌作用比較研究

馬海玲　劉俊華

摘 要：測定褐黃水灰蘚配子體提取液對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑菌活性，比較分析了2種提取液對受試菌的最小抑菌濃度。結果表明：褐黃水灰蘚無菌水、80%乙醇2種溶劑提取液對受試菌均有一定的抑制效果，且其醇提液抑菌活性更強。質量濃度為100g/L的乙醇提取液，對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑制率分別達69.98%、71.04%，乙醇提取液對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的MIC分別為12.5g/L、25g/L。

關鍵詞：褐黃水灰蘚提取液；抑菌作用；最小抑菌濃度；分光光度法

中圖分類號 S482.7 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）07-31-02

褐黃水灰蘚（Hygrohypnum ochraceum），又稱黃色水灰蘚，系柳葉蘚科（Amblystegiaceae）水灰蘚屬（Hygroypnum Lindb.）植物，廣泛分布于我國各省區[1]。已有研究表明，苔蘚植物能夠產生如萜類、黃酮類、脂肪酸等次生代謝產物及一些生物活性物質[2-3]，且多種苔蘚植物亦被證明有抑制微生物活性的作用[3-5]。本文以褐黃水灰蘚配子體為試材，以大腸桿菌、金黃色葡萄球菌為受試菌株，測定其抑菌活性，并比較不同溶劑提取液的抑菌效應與最低抑菌濃度。

1 材料與方法

1.1 材料 苔蘚樣品為褐黃水灰蘚，采自山東省境內鶴伴山區。供試菌株為大腸桿菌（Escherichia coli）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），均由濱州學院生物學實驗教學中心提供。

1.2 儀器 立式蒸汽滅菌器、LH系列層流潔凈工作臺、生化培養箱、FA1004N型電子天平、雙列六孔電熱恒溫水浴鍋、紫外-可見光分光光度計、可調萬用電熱爐、電冰箱、氣浴恒溫振蕩器等。

1.3 方法

1.3.1 母液的制備 用電子天平準確稱取2份褐黃水灰蘚配子體干粉（各10g），分別用無菌水、80%乙醇置于50℃恒溫水浴鍋內浸提24h后，過濾，重復提取1次，將2次浸提所得濾液合并，分別加入相應提取溶劑定容至100mL，得濃度為100g/L的提取母液。

1.3.2 最小抑菌濃度（MIC）的測定 以上述所得提取液母液，依次2倍稀釋得到質量濃度為50g/L、25g/L、12.5g/L、6.25g/L、3.125g/L的褐黃水灰蘚水提液和醇提液，分別加入0.1mL菌懸液，同時設生長對照（菌懸液+培養基），培養12h后觀察，無菌生長的最小處理濃度即為MIC。

1.3.3 提取液抑菌作用測定 采用分光光度計法[6]測定褐黃水灰蘚水浸提液對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的抑制作用。取裝有5mL已滅菌LB液體培養基試管，放入超凈工作臺中，紫外滅菌30min。在無菌室內，準確量取3mL褐黃水灰蘚水浸提液加入上述試管中，再用移液槍準確量取200μL菌懸液，另取1支裝有5mL已滅菌LB液體培養基試管，加入3mL褐黃水灰蘚提取液、200μL LB液體培養基，不接任何菌作為空白對照，置于37℃恒溫培養箱中搖床培養24h。然后分光光度計600nm下比色測定。每一個的梯度做3次重復。另取1支裝有5mL已滅菌LB液體培養基試管，加入200μL金黃色葡萄球菌菌懸液，3mL已滅菌LB液體培養基，作為含菌對照，同樣條件下培養24h后，分光光度計600nm下比色測定。

提取液抑菌率：抑菌率（%）=（1-處理組吸光值/對照組吸光值）×100。

2 結果與分析

2.1 最小抑菌濃度的測定 由表1、表2可知，不同提取液對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度不同：水提液對大腸桿菌的MIC為50g/L，而對金黃色葡萄球菌的MIC為25g/L；醇提液對2種受試菌的MIC分別為12.5g/L、25g/L。總體來看，本試驗中褐黃水灰蘚醇提液的抑菌效果較優。

3 結論

本研究結果初步表明，作為尚無藥用記載的褐黃水灰蘚，其水提液、醇提液均對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌生長具有一定的抑制作用，且抑菌活性與提取液質量濃度間呈正相關關系；與水提液相比，其配子體乙醇提取液具有更強的抑菌能力。該蘚分布廣且生物量大，但若作為抑菌植物資源加以開發利用，仍需圍繞其抑菌機理及主要抑菌活性成分開展進一步研究。

參考文獻

[1]趙遵田，曹同.山東苔蘚植物志[M].濟南：山東科學技術出版社，1998.

[2]吳鵬程.苔蘚植物生物學[M].北京：科學出版社，1998.

[3]周江煜.苔蘚植物的化學活性成分研究概況[J].廣西中醫學院學報，2002，5（4）：84-87.

[4]婁紅祥.苔蘚植物化學與生物學[M].北京：北京科學技術出版社，2006.

[5]Asakawa Y.Biologically active compounds from bryophytes[J].Pure and Applied Chemistry，2007，79（4）：557-580.

[6]劉洪霞，韓址楠，姜詠棟，等. 蒼耳葉提取物與生物抑菌劑對幾種常見食品污染菌的體外協同抑菌作用及其作用機理[J].食品與發酵工業，2013，39（4）：17-21.

（責編：施婷婷）

摘 要：測定褐黃水灰蘚配子體提取液對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑菌活性，比較分析了2種提取液對受試菌的最小抑菌濃度。結果表明：褐黃水灰蘚無菌水、80%乙醇2種溶劑提取液對受試菌均有一定的抑制效果，且其醇提液抑菌活性更強。質量濃度為100g/L的乙醇提取液，對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑制率分別達69.98%、71.04%，乙醇提取液對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的MIC分別為12.5g/L、25g/L。

關鍵詞：褐黃水灰蘚提取液；抑菌作用；最小抑菌濃度；分光光度法

中圖分類號 S482.7 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）07-31-02

褐黃水灰蘚（Hygrohypnum ochraceum），又稱黃色水灰蘚，系柳葉蘚科（Amblystegiaceae）水灰蘚屬（Hygroypnum Lindb.）植物，廣泛分布于我國各省區[1]。已有研究表明，苔蘚植物能夠產生如萜類、黃酮類、脂肪酸等次生代謝產物及一些生物活性物質[2-3]，且多種苔蘚植物亦被證明有抑制微生物活性的作用[3-5]。本文以褐黃水灰蘚配子體為試材，以大腸桿菌、金黃色葡萄球菌為受試菌株，測定其抑菌活性，并比較不同溶劑提取液的抑菌效應與最低抑菌濃度。

1 材料與方法

1.1 材料 苔蘚樣品為褐黃水灰蘚，采自山東省境內鶴伴山區。供試菌株為大腸桿菌（Escherichia coli）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），均由濱州學院生物學實驗教學中心提供。

1.2 儀器 立式蒸汽滅菌器、LH系列層流潔凈工作臺、生化培養箱、FA1004N型電子天平、雙列六孔電熱恒溫水浴鍋、紫外-可見光分光光度計、可調萬用電熱爐、電冰箱、氣浴恒溫振蕩器等。

1.3 方法

1.3.1 母液的制備 用電子天平準確稱取2份褐黃水灰蘚配子體干粉（各10g），分別用無菌水、80%乙醇置于50℃恒溫水浴鍋內浸提24h后，過濾，重復提取1次，將2次浸提所得濾液合并，分別加入相應提取溶劑定容至100mL，得濃度為100g/L的提取母液。

1.3.2 最小抑菌濃度（MIC）的測定 以上述所得提取液母液，依次2倍稀釋得到質量濃度為50g/L、25g/L、12.5g/L、6.25g/L、3.125g/L的褐黃水灰蘚水提液和醇提液，分別加入0.1mL菌懸液，同時設生長對照（菌懸液+培養基），培養12h后觀察，無菌生長的最小處理濃度即為MIC。

1.3.3 提取液抑菌作用測定 采用分光光度計法[6]測定褐黃水灰蘚水浸提液對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的抑制作用。取裝有5mL已滅菌LB液體培養基試管，放入超凈工作臺中，紫外滅菌30min。在無菌室內，準確量取3mL褐黃水灰蘚水浸提液加入上述試管中，再用移液槍準確量取200μL菌懸液，另取1支裝有5mL已滅菌LB液體培養基試管，加入3mL褐黃水灰蘚提取液、200μL LB液體培養基，不接任何菌作為空白對照，置于37℃恒溫培養箱中搖床培養24h。然后分光光度計600nm下比色測定。每一個的梯度做3次重復。另取1支裝有5mL已滅菌LB液體培養基試管，加入200μL金黃色葡萄球菌菌懸液，3mL已滅菌LB液體培養基，作為含菌對照，同樣條件下培養24h后，分光光度計600nm下比色測定。

提取液抑菌率：抑菌率（%）=（1-處理組吸光值/對照組吸光值）×100。

2 結果與分析

2.1 最小抑菌濃度的測定 由表1、表2可知，不同提取液對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度不同：水提液對大腸桿菌的MIC為50g/L，而對金黃色葡萄球菌的MIC為25g/L；醇提液對2種受試菌的MIC分別為12.5g/L、25g/L。總體來看，本試驗中褐黃水灰蘚醇提液的抑菌效果較優。

3 結論

本研究結果初步表明，作為尚無藥用記載的褐黃水灰蘚，其水提液、醇提液均對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌生長具有一定的抑制作用，且抑菌活性與提取液質量濃度間呈正相關關系；與水提液相比，其配子體乙醇提取液具有更強的抑菌能力。該蘚分布廣且生物量大，但若作為抑菌植物資源加以開發利用，仍需圍繞其抑菌機理及主要抑菌活性成分開展進一步研究。

參考文獻

[1]趙遵田，曹同.山東苔蘚植物志[M].濟南：山東科學技術出版社，1998.

[2]吳鵬程.苔蘚植物生物學[M].北京：科學出版社，1998.

[3]周江煜.苔蘚植物的化學活性成分研究概況[J].廣西中醫學院學報，2002，5（4）：84-87.

[4]婁紅祥.苔蘚植物化學與生物學[M].北京：北京科學技術出版社，2006.

[5]Asakawa Y.Biologically active compounds from bryophytes[J].Pure and Applied Chemistry，2007，79（4）：557-580.

[6]劉洪霞，韓址楠，姜詠棟，等. 蒼耳葉提取物與生物抑菌劑對幾種常見食品污染菌的體外協同抑菌作用及其作用機理[J].食品與發酵工業，2013，39（4）：17-21.

（責編：施婷婷）

摘 要：測定褐黃水灰蘚配子體提取液對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑菌活性，比較分析了2種提取液對受試菌的最小抑菌濃度。結果表明：褐黃水灰蘚無菌水、80%乙醇2種溶劑提取液對受試菌均有一定的抑制效果，且其醇提液抑菌活性更強。質量濃度為100g/L的乙醇提取液，對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的抑制率分別達69.98%、71.04%，乙醇提取液對大腸桿菌和金黃色葡萄球菌的MIC分別為12.5g/L、25g/L。

關鍵詞：褐黃水灰蘚提取液；抑菌作用；最小抑菌濃度；分光光度法

中圖分類號 S482.7 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）07-31-02

褐黃水灰蘚（Hygrohypnum ochraceum），又稱黃色水灰蘚，系柳葉蘚科（Amblystegiaceae）水灰蘚屬（Hygroypnum Lindb.）植物，廣泛分布于我國各省區[1]。已有研究表明，苔蘚植物能夠產生如萜類、黃酮類、脂肪酸等次生代謝產物及一些生物活性物質[2-3]，且多種苔蘚植物亦被證明有抑制微生物活性的作用[3-5]。本文以褐黃水灰蘚配子體為試材，以大腸桿菌、金黃色葡萄球菌為受試菌株，測定其抑菌活性，并比較不同溶劑提取液的抑菌效應與最低抑菌濃度。

1 材料與方法

1.1 材料 苔蘚樣品為褐黃水灰蘚，采自山東省境內鶴伴山區。供試菌株為大腸桿菌（Escherichia coli）、金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus），均由濱州學院生物學實驗教學中心提供。

1.2 儀器 立式蒸汽滅菌器、LH系列層流潔凈工作臺、生化培養箱、FA1004N型電子天平、雙列六孔電熱恒溫水浴鍋、紫外-可見光分光光度計、可調萬用電熱爐、電冰箱、氣浴恒溫振蕩器等。

1.3 方法

1.3.1 母液的制備 用電子天平準確稱取2份褐黃水灰蘚配子體干粉（各10g），分別用無菌水、80%乙醇置于50℃恒溫水浴鍋內浸提24h后，過濾，重復提取1次，將2次浸提所得濾液合并，分別加入相應提取溶劑定容至100mL，得濃度為100g/L的提取母液。

1.3.2 最小抑菌濃度（MIC）的測定 以上述所得提取液母液，依次2倍稀釋得到質量濃度為50g/L、25g/L、12.5g/L、6.25g/L、3.125g/L的褐黃水灰蘚水提液和醇提液，分別加入0.1mL菌懸液，同時設生長對照（菌懸液+培養基），培養12h后觀察，無菌生長的最小處理濃度即為MIC。

1.3.3 提取液抑菌作用測定 采用分光光度計法[6]測定褐黃水灰蘚水浸提液對金黃色葡萄球菌、大腸桿菌的抑制作用。取裝有5mL已滅菌LB液體培養基試管，放入超凈工作臺中，紫外滅菌30min。在無菌室內，準確量取3mL褐黃水灰蘚水浸提液加入上述試管中，再用移液槍準確量取200μL菌懸液，另取1支裝有5mL已滅菌LB液體培養基試管，加入3mL褐黃水灰蘚提取液、200μL LB液體培養基，不接任何菌作為空白對照，置于37℃恒溫培養箱中搖床培養24h。然后分光光度計600nm下比色測定。每一個的梯度做3次重復。另取1支裝有5mL已滅菌LB液體培養基試管，加入200μL金黃色葡萄球菌菌懸液，3mL已滅菌LB液體培養基，作為含菌對照，同樣條件下培養24h后，分光光度計600nm下比色測定。

提取液抑菌率：抑菌率（%）=（1-處理組吸光值/對照組吸光值）×100。

2 結果與分析

2.1 最小抑菌濃度的測定 由表1、表2可知，不同提取液對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌的最小抑菌濃度不同：水提液對大腸桿菌的MIC為50g/L，而對金黃色葡萄球菌的MIC為25g/L；醇提液對2種受試菌的MIC分別為12.5g/L、25g/L。總體來看，本試驗中褐黃水灰蘚醇提液的抑菌效果較優。

3 結論

本研究結果初步表明，作為尚無藥用記載的褐黃水灰蘚，其水提液、醇提液均對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌生長具有一定的抑制作用，且抑菌活性與提取液質量濃度間呈正相關關系；與水提液相比，其配子體乙醇提取液具有更強的抑菌能力。該蘚分布廣且生物量大，但若作為抑菌植物資源加以開發利用，仍需圍繞其抑菌機理及主要抑菌活性成分開展進一步研究。

參考文獻

[1]趙遵田，曹同.山東苔蘚植物志[M].濟南：山東科學技術出版社，1998.

[2]吳鵬程.苔蘚植物生物學[M].北京：科學出版社，1998.

[3]周江煜.苔蘚植物的化學活性成分研究概況[J].廣西中醫學院學報，2002，5（4）：84-87.

[4]婁紅祥.苔蘚植物化學與生物學[M].北京：北京科學技術出版社，2006.

[5]Asakawa Y.Biologically active compounds from bryophytes[J].Pure and Applied Chemistry，2007，79（4）：557-580.

[6]劉洪霞，韓址楠，姜詠棟，等. 蒼耳葉提取物與生物抑菌劑對幾種常見食品污染菌的體外協同抑菌作用及其作用機理[J].食品與發酵工業，2013，39（4）：17-21.

（責編：施婷婷）