不同激素濃度對羅漢果愈傷組織誘導的影響

伍琴文等

摘 要：以羅漢果（Siraitia grosvenorii）優良株系的幼嫩莖段作為試驗材料，經過消毒處理后，剪成帶腋芽小段，探討植物激素細胞分裂素6-BA（6-芐基嘌呤）與生長激素IAA（吲哚乙酸）不同濃度配比和細胞分裂素6-BA與生長激素NAA（萘乙酸）不同濃度配比對其愈傷組織誘導的影響，以建立羅漢果高效再生系統。結果表明：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L+3%蔗糖+3.5g/L瓊脂為羅漢果愈傷組織最適宜的誘導培養基，誘導率達83.33%。

關鍵詞：羅漢果；植物激素；愈傷組織；誘導率

中圖分類號 S687.3 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）07-29-03

羅漢果（Siraitia grosvenorii）為多年生草質藤本宿莖植物，屬葫蘆科，其成熟果實具有清熱、潤肺止咳等功效，是我國特產的傳統中藥和廣西特有的藥用植物，原產于廣西北部地區。羅漢果種苗主要采用塊莖和壓蔓進行無性繁殖，繁殖系數低。為了擴大羅漢果的繁殖，國內多家科研院所都在重點研究利用組培快繁方法作為羅漢果種苗繁育的主要手段[1-3]。

目前羅漢果莖段愈傷組織誘導所使用的激素主要有6-BA、IAA、NAA、IBA等。而大部分學者主要采用的是6-BA和IBA 2種激素組合來探究對羅漢果愈傷組織誘導與生長的影響，效果一般。使用6-BA和IBA 2種植物激素所誘導的愈傷組織很少，分化程度也比較低，從而影響了其成活率[4]。同樣與IBA作為生長激素的IAA和NAA，在愈傷組織誘導中從6-BA和IAA 2種激素組合與6-BA和NAA 2種激素組合方面探究的比較少[5]。本試驗通過研究植物激素對羅漢果莖段愈傷組織誘導和生長的影響，以探究出更好、更經濟的羅漢果愈傷組織誘導的生長激素濃度配比，可以為進一步完善羅漢果的快繁體系提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料 試驗所采集的羅漢果外植體來自衡陽市興民農業有限公司羅漢果生產基地。

1.2 培養基 以MS為基礎培養基，蔗糖3.0%、瓊脂3.5g/L，pH5.8～6.0。

第一組：在MS基本培養基的基礎上，添加不同濃度的植物激素6-BA（0.5、1.0、1.5mg/L）+IAA（0.01、0.05、0.1mg/L）。

第二組：在MS基本培養基的基礎上，添加不同濃度的植物激素6-BA（0.5、1.0、1.5mg/L）+NAA（0.01、0.05、0.1mg/L）。培養基配制后都經121℃高壓滅菌30min后待用。

1.3 培養條件 接種好的培養瓶放在恒溫培養箱中進行培養，培養的溫度為（25±1）℃，暗培養一星期后，光培養每天光照12h/d，光照強度2 000lx[6]。

1.4 方法 取健壯且無病蟲害嫩梢，直接拿回實驗室，用自來水沖洗干凈后，再沖洗60min。再用75%的酒精進行消毒30s，用無菌水沖洗3～4次，再加入0.1%升汞溶液放在振蕩器上進行振蕩消毒6～8min，然后用無菌水沖洗4次以上，瀝干水分。將滅菌好的莖段切成1cm左右帶腋芽的小段，形態學上端朝上，形態學下端朝下，頂部盡量剛好與培養基表面接觸，蓋好瓶蓋。及時放入光照培養箱中進行培養。

2 結果

2.1 6-BA和IAA不同濃度配比對羅漢果愈傷組織誘導和生長的影響 將處理好的羅漢果莖段接入第一組1～9號不同濃度培養基的處理中，4周左右后形成黃白色愈傷組織，且長勢良好，并記錄數據。

如表1所示，9種培養基均能誘導出不定芽，但不同濃度植物激素組合對其誘導率有很大影響，由于植物激素生理作用的雙重性，當IAA一定時，隨著6-BA的濃度增大，誘導率首先逐漸上升，在濃度為1.0mg/L時達到最大，隨后又逐漸下降，且變化趨勢較大。而當6-BA濃度一定時，隨著IAA濃度的增大，誘導率首先逐漸上升，在濃度為0.05mg/L時達到最大，隨后又逐漸下降，且變化趨勢不大。這也驗證了分裂素比生長激素對羅漢果愈傷組織誘導的影響大。通過圖1可知：以5號處理即6-BA 1.0mg/L+IAA 0.05mg/L的組合誘導率最高，達66.67%。

3 討論

羅漢果外植體愈傷組織誘導成功與否，除了要選擇正確的基本培養基和適合于組培苗生長的光照時間和光照強度、培養溫度及濕度以外，最主要的影響因素還在于選用適宜的激素種類和濃度配比。外植體的脫分化、再分化過程，試管苗根、莖、葉等器官的發生，往往都需要向培養基中添加植物激素或生長調節劑。對激素種類和濃度的篩選始終是組培工作的重點和難點。

植物生長激素在離體組織愈傷組織誘導方法中對植物的生長發育表現出雙重作用：一般生長素在低濃度時可以促進生長，濃度較高則會抑制生長，如果濃度更高則會使植物受傷，其發揮的生理作用會因濃度、植物的種類、器官、細胞的年齡不同而有差異。而細胞分裂素如6-BA等，主要生理功能就是促進細胞的分裂，而又主要是對細胞質的分裂起作用，所以，細胞分裂素促進細胞分裂的效應只有在生長素存在的前提下才能表現出來。

對于不同激素在羅漢果離體組織誘導的影響有很多的研究，例如：宋鵬飛、唐國興等利用羅漢果離體葉片在MS+6-BA 1.0mg/L+IBA 0.5mg/L培養基中誘導愈傷組織[7]；林榮、王秀琴等采用羅漢果離體莖段在MS+6-

BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L培養基中誘導愈傷組織[8]；黃春梅、曾黎輝等采用羅漢果葉片在6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L+

2，4-D 0.5mg/L培養基中誘導愈傷組織，但誘導率都比較低且誘導時間較長[9]；付長亮、馬小軍等采用羅漢果離體莖段在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L培養基中誘導愈傷組織，并發現對羅漢果莖段增值系數影響最大的是6-BA，其次是NAA，最小的是IBA[10]。本試驗也驗證了這一規律：6-BA對羅漢果愈傷組織誘導的影響比IAA或NAA要大。

參考文獻

[1]付長亮，馬小軍，白隆華，等.羅漢果組織培養研究進展[J].中國中藥雜志，2005，30（5）： 325-328.

[2]吳金壽，劉月學，賴鐘雄，等.應用生物技術發展羅漢果產業化的探討[J].廈門大學學報（自然科學版），2001，40 （增刊2）： 220-224.

[3]李典鵬，張厚瑞.廣西特產植物羅漢果的研究與應用[J].廣西植物，2000，20（3）： 270-276.

[4]李代麗，康向陽.植物愈傷組織培養中內外源激素效應的研究現狀與展望[J].生物技術通訊，2007，18（3）： 546-548.

[5]郎多勇，張新惠，孫志國.外援激素配比對藥用植物鎖陽愈傷組織誘導的影響[J].時珍國醫國藥，2012，23（10）： 2 463-2 465.

[6]顏呂敬.植物組織培養手冊[M].上海： 上海科學技術出版社，1990.

[7]宋鵬飛，唐興國，周全，等.羅漢果葉片離體再生快繁技術[J].武漢生物工程學院學報，2010，6（1）： 16-19.

[8]林榮，王秀琴，王潤珍，等.羅漢果莖段離體培養研究[J].廣西植物，1985，5（3）： 273-277.

[9]黃春梅，曾黎輝，吳金壽，等.羅漢果葉片培養及其不定芽形成的細胞學觀察[J].吉林農業大學學報，2005，27（6）： 639-642.

[10]付長亮，馬小軍，白隆華，等.羅漢果脫毒苗的快速繁殖研究[J].中草藥，2005，36（8）： 1 225-1 229. （責編：施婷婷）

摘 要：以羅漢果（Siraitia grosvenorii）優良株系的幼嫩莖段作為試驗材料，經過消毒處理后，剪成帶腋芽小段，探討植物激素細胞分裂素6-BA（6-芐基嘌呤）與生長激素IAA（吲哚乙酸）不同濃度配比和細胞分裂素6-BA與生長激素NAA（萘乙酸）不同濃度配比對其愈傷組織誘導的影響，以建立羅漢果高效再生系統。結果表明：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L+3%蔗糖+3.5g/L瓊脂為羅漢果愈傷組織最適宜的誘導培養基，誘導率達83.33%。

關鍵詞：羅漢果；植物激素；愈傷組織；誘導率

中圖分類號 S687.3 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）07-29-03

羅漢果（Siraitia grosvenorii）為多年生草質藤本宿莖植物，屬葫蘆科，其成熟果實具有清熱、潤肺止咳等功效，是我國特產的傳統中藥和廣西特有的藥用植物，原產于廣西北部地區。羅漢果種苗主要采用塊莖和壓蔓進行無性繁殖，繁殖系數低。為了擴大羅漢果的繁殖，國內多家科研院所都在重點研究利用組培快繁方法作為羅漢果種苗繁育的主要手段[1-3]。

目前羅漢果莖段愈傷組織誘導所使用的激素主要有6-BA、IAA、NAA、IBA等。而大部分學者主要采用的是6-BA和IBA 2種激素組合來探究對羅漢果愈傷組織誘導與生長的影響，效果一般。使用6-BA和IBA 2種植物激素所誘導的愈傷組織很少，分化程度也比較低，從而影響了其成活率[4]。同樣與IBA作為生長激素的IAA和NAA，在愈傷組織誘導中從6-BA和IAA 2種激素組合與6-BA和NAA 2種激素組合方面探究的比較少[5]。本試驗通過研究植物激素對羅漢果莖段愈傷組織誘導和生長的影響，以探究出更好、更經濟的羅漢果愈傷組織誘導的生長激素濃度配比，可以為進一步完善羅漢果的快繁體系提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料 試驗所采集的羅漢果外植體來自衡陽市興民農業有限公司羅漢果生產基地。

1.2 培養基 以MS為基礎培養基，蔗糖3.0%、瓊脂3.5g/L，pH5.8～6.0。

第一組：在MS基本培養基的基礎上，添加不同濃度的植物激素6-BA（0.5、1.0、1.5mg/L）+IAA（0.01、0.05、0.1mg/L）。

第二組：在MS基本培養基的基礎上，添加不同濃度的植物激素6-BA（0.5、1.0、1.5mg/L）+NAA（0.01、0.05、0.1mg/L）。培養基配制后都經121℃高壓滅菌30min后待用。

1.3 培養條件 接種好的培養瓶放在恒溫培養箱中進行培養，培養的溫度為（25±1）℃，暗培養一星期后，光培養每天光照12h/d，光照強度2 000lx[6]。

1.4 方法 取健壯且無病蟲害嫩梢，直接拿回實驗室，用自來水沖洗干凈后，再沖洗60min。再用75%的酒精進行消毒30s，用無菌水沖洗3～4次，再加入0.1%升汞溶液放在振蕩器上進行振蕩消毒6～8min，然后用無菌水沖洗4次以上，瀝干水分。將滅菌好的莖段切成1cm左右帶腋芽的小段，形態學上端朝上，形態學下端朝下，頂部盡量剛好與培養基表面接觸，蓋好瓶蓋。及時放入光照培養箱中進行培養。

2 結果

2.1 6-BA和IAA不同濃度配比對羅漢果愈傷組織誘導和生長的影響 將處理好的羅漢果莖段接入第一組1～9號不同濃度培養基的處理中，4周左右后形成黃白色愈傷組織，且長勢良好，并記錄數據。

如表1所示，9種培養基均能誘導出不定芽，但不同濃度植物激素組合對其誘導率有很大影響，由于植物激素生理作用的雙重性，當IAA一定時，隨著6-BA的濃度增大，誘導率首先逐漸上升，在濃度為1.0mg/L時達到最大，隨后又逐漸下降，且變化趨勢較大。而當6-BA濃度一定時，隨著IAA濃度的增大，誘導率首先逐漸上升，在濃度為0.05mg/L時達到最大，隨后又逐漸下降，且變化趨勢不大。這也驗證了分裂素比生長激素對羅漢果愈傷組織誘導的影響大。通過圖1可知：以5號處理即6-BA 1.0mg/L+IAA 0.05mg/L的組合誘導率最高，達66.67%。

3 討論

羅漢果外植體愈傷組織誘導成功與否，除了要選擇正確的基本培養基和適合于組培苗生長的光照時間和光照強度、培養溫度及濕度以外，最主要的影響因素還在于選用適宜的激素種類和濃度配比。外植體的脫分化、再分化過程，試管苗根、莖、葉等器官的發生，往往都需要向培養基中添加植物激素或生長調節劑。對激素種類和濃度的篩選始終是組培工作的重點和難點。

植物生長激素在離體組織愈傷組織誘導方法中對植物的生長發育表現出雙重作用：一般生長素在低濃度時可以促進生長，濃度較高則會抑制生長，如果濃度更高則會使植物受傷，其發揮的生理作用會因濃度、植物的種類、器官、細胞的年齡不同而有差異。而細胞分裂素如6-BA等，主要生理功能就是促進細胞的分裂，而又主要是對細胞質的分裂起作用，所以，細胞分裂素促進細胞分裂的效應只有在生長素存在的前提下才能表現出來。

對于不同激素在羅漢果離體組織誘導的影響有很多的研究，例如：宋鵬飛、唐國興等利用羅漢果離體葉片在MS+6-BA 1.0mg/L+IBA 0.5mg/L培養基中誘導愈傷組織[7]；林榮、王秀琴等采用羅漢果離體莖段在MS+6-

BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L培養基中誘導愈傷組織[8]；黃春梅、曾黎輝等采用羅漢果葉片在6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L+

2，4-D 0.5mg/L培養基中誘導愈傷組織，但誘導率都比較低且誘導時間較長[9]；付長亮、馬小軍等采用羅漢果離體莖段在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L培養基中誘導愈傷組織，并發現對羅漢果莖段增值系數影響最大的是6-BA，其次是NAA，最小的是IBA[10]。本試驗也驗證了這一規律：6-BA對羅漢果愈傷組織誘導的影響比IAA或NAA要大。

參考文獻

[1]付長亮，馬小軍，白隆華，等.羅漢果組織培養研究進展[J].中國中藥雜志，2005，30（5）： 325-328.

[2]吳金壽，劉月學，賴鐘雄，等.應用生物技術發展羅漢果產業化的探討[J].廈門大學學報（自然科學版），2001，40 （增刊2）： 220-224.

[3]李典鵬，張厚瑞.廣西特產植物羅漢果的研究與應用[J].廣西植物，2000，20（3）： 270-276.

[4]李代麗，康向陽.植物愈傷組織培養中內外源激素效應的研究現狀與展望[J].生物技術通訊，2007，18（3）： 546-548.

[5]郎多勇，張新惠，孫志國.外援激素配比對藥用植物鎖陽愈傷組織誘導的影響[J].時珍國醫國藥，2012，23（10）： 2 463-2 465.

[6]顏呂敬.植物組織培養手冊[M].上海： 上海科學技術出版社，1990.

[7]宋鵬飛，唐興國，周全，等.羅漢果葉片離體再生快繁技術[J].武漢生物工程學院學報，2010，6（1）： 16-19.

[8]林榮，王秀琴，王潤珍，等.羅漢果莖段離體培養研究[J].廣西植物，1985，5（3）： 273-277.

[9]黃春梅，曾黎輝，吳金壽，等.羅漢果葉片培養及其不定芽形成的細胞學觀察[J].吉林農業大學學報，2005，27（6）： 639-642.

[10]付長亮，馬小軍，白隆華，等.羅漢果脫毒苗的快速繁殖研究[J].中草藥，2005，36（8）： 1 225-1 229. （責編：施婷婷）

摘 要：以羅漢果（Siraitia grosvenorii）優良株系的幼嫩莖段作為試驗材料，經過消毒處理后，剪成帶腋芽小段，探討植物激素細胞分裂素6-BA（6-芐基嘌呤）與生長激素IAA（吲哚乙酸）不同濃度配比和細胞分裂素6-BA與生長激素NAA（萘乙酸）不同濃度配比對其愈傷組織誘導的影響，以建立羅漢果高效再生系統。結果表明：MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.05mg/L+3%蔗糖+3.5g/L瓊脂為羅漢果愈傷組織最適宜的誘導培養基，誘導率達83.33%。

關鍵詞：羅漢果；植物激素；愈傷組織；誘導率

中圖分類號 S687.3 文獻標識碼 A 文章編號 1007-7731（2014）07-29-03

羅漢果（Siraitia grosvenorii）為多年生草質藤本宿莖植物，屬葫蘆科，其成熟果實具有清熱、潤肺止咳等功效，是我國特產的傳統中藥和廣西特有的藥用植物，原產于廣西北部地區。羅漢果種苗主要采用塊莖和壓蔓進行無性繁殖，繁殖系數低。為了擴大羅漢果的繁殖，國內多家科研院所都在重點研究利用組培快繁方法作為羅漢果種苗繁育的主要手段[1-3]。

目前羅漢果莖段愈傷組織誘導所使用的激素主要有6-BA、IAA、NAA、IBA等。而大部分學者主要采用的是6-BA和IBA 2種激素組合來探究對羅漢果愈傷組織誘導與生長的影響，效果一般。使用6-BA和IBA 2種植物激素所誘導的愈傷組織很少，分化程度也比較低，從而影響了其成活率[4]。同樣與IBA作為生長激素的IAA和NAA，在愈傷組織誘導中從6-BA和IAA 2種激素組合與6-BA和NAA 2種激素組合方面探究的比較少[5]。本試驗通過研究植物激素對羅漢果莖段愈傷組織誘導和生長的影響，以探究出更好、更經濟的羅漢果愈傷組織誘導的生長激素濃度配比，可以為進一步完善羅漢果的快繁體系提供依據。

1 材料與方法

1.1 材料 試驗所采集的羅漢果外植體來自衡陽市興民農業有限公司羅漢果生產基地。

1.2 培養基 以MS為基礎培養基，蔗糖3.0%、瓊脂3.5g/L，pH5.8～6.0。

第一組：在MS基本培養基的基礎上，添加不同濃度的植物激素6-BA（0.5、1.0、1.5mg/L）+IAA（0.01、0.05、0.1mg/L）。

第二組：在MS基本培養基的基礎上，添加不同濃度的植物激素6-BA（0.5、1.0、1.5mg/L）+NAA（0.01、0.05、0.1mg/L）。培養基配制后都經121℃高壓滅菌30min后待用。

1.3 培養條件 接種好的培養瓶放在恒溫培養箱中進行培養，培養的溫度為（25±1）℃，暗培養一星期后，光培養每天光照12h/d，光照強度2 000lx[6]。

1.4 方法 取健壯且無病蟲害嫩梢，直接拿回實驗室，用自來水沖洗干凈后，再沖洗60min。再用75%的酒精進行消毒30s，用無菌水沖洗3～4次，再加入0.1%升汞溶液放在振蕩器上進行振蕩消毒6～8min，然后用無菌水沖洗4次以上，瀝干水分。將滅菌好的莖段切成1cm左右帶腋芽的小段，形態學上端朝上，形態學下端朝下，頂部盡量剛好與培養基表面接觸，蓋好瓶蓋。及時放入光照培養箱中進行培養。

2 結果

2.1 6-BA和IAA不同濃度配比對羅漢果愈傷組織誘導和生長的影響 將處理好的羅漢果莖段接入第一組1～9號不同濃度培養基的處理中，4周左右后形成黃白色愈傷組織，且長勢良好，并記錄數據。

如表1所示，9種培養基均能誘導出不定芽，但不同濃度植物激素組合對其誘導率有很大影響，由于植物激素生理作用的雙重性，當IAA一定時，隨著6-BA的濃度增大，誘導率首先逐漸上升，在濃度為1.0mg/L時達到最大，隨后又逐漸下降，且變化趨勢較大。而當6-BA濃度一定時，隨著IAA濃度的增大，誘導率首先逐漸上升，在濃度為0.05mg/L時達到最大，隨后又逐漸下降，且變化趨勢不大。這也驗證了分裂素比生長激素對羅漢果愈傷組織誘導的影響大。通過圖1可知：以5號處理即6-BA 1.0mg/L+IAA 0.05mg/L的組合誘導率最高，達66.67%。

3 討論

羅漢果外植體愈傷組織誘導成功與否，除了要選擇正確的基本培養基和適合于組培苗生長的光照時間和光照強度、培養溫度及濕度以外，最主要的影響因素還在于選用適宜的激素種類和濃度配比。外植體的脫分化、再分化過程，試管苗根、莖、葉等器官的發生，往往都需要向培養基中添加植物激素或生長調節劑。對激素種類和濃度的篩選始終是組培工作的重點和難點。

植物生長激素在離體組織愈傷組織誘導方法中對植物的生長發育表現出雙重作用：一般生長素在低濃度時可以促進生長，濃度較高則會抑制生長，如果濃度更高則會使植物受傷，其發揮的生理作用會因濃度、植物的種類、器官、細胞的年齡不同而有差異。而細胞分裂素如6-BA等，主要生理功能就是促進細胞的分裂，而又主要是對細胞質的分裂起作用，所以，細胞分裂素促進細胞分裂的效應只有在生長素存在的前提下才能表現出來。

對于不同激素在羅漢果離體組織誘導的影響有很多的研究，例如：宋鵬飛、唐國興等利用羅漢果離體葉片在MS+6-BA 1.0mg/L+IBA 0.5mg/L培養基中誘導愈傷組織[7]；林榮、王秀琴等采用羅漢果離體莖段在MS+6-

BA 1.0mg/L+NAA 0.2mg/L培養基中誘導愈傷組織[8]；黃春梅、曾黎輝等采用羅漢果葉片在6-BA 1.0mg/L+NAA 0.5mg/L+

2，4-D 0.5mg/L培養基中誘導愈傷組織，但誘導率都比較低且誘導時間較長[9]；付長亮、馬小軍等采用羅漢果離體莖段在MS+6-BA 1.0mg/L+NAA 0.1mg/L培養基中誘導愈傷組織，并發現對羅漢果莖段增值系數影響最大的是6-BA，其次是NAA，最小的是IBA[10]。本試驗也驗證了這一規律：6-BA對羅漢果愈傷組織誘導的影響比IAA或NAA要大。

參考文獻

[1]付長亮，馬小軍，白隆華，等.羅漢果組織培養研究進展[J].中國中藥雜志，2005，30（5）： 325-328.

[2]吳金壽，劉月學，賴鐘雄，等.應用生物技術發展羅漢果產業化的探討[J].廈門大學學報（自然科學版），2001，40 （增刊2）： 220-224.

[3]李典鵬，張厚瑞.廣西特產植物羅漢果的研究與應用[J].廣西植物，2000，20（3）： 270-276.

[4]李代麗，康向陽.植物愈傷組織培養中內外源激素效應的研究現狀與展望[J].生物技術通訊，2007，18（3）： 546-548.

[5]郎多勇，張新惠，孫志國.外援激素配比對藥用植物鎖陽愈傷組織誘導的影響[J].時珍國醫國藥，2012，23（10）： 2 463-2 465.

[6]顏呂敬.植物組織培養手冊[M].上海： 上海科學技術出版社，1990.

[7]宋鵬飛，唐興國，周全，等.羅漢果葉片離體再生快繁技術[J].武漢生物工程學院學報，2010，6（1）： 16-19.

[8]林榮，王秀琴，王潤珍，等.羅漢果莖段離體培養研究[J].廣西植物，1985，5（3）： 273-277.

[9]黃春梅，曾黎輝，吳金壽，等.羅漢果葉片培養及其不定芽形成的細胞學觀察[J].吉林農業大學學報，2005，27（6）： 639-642.

[10]付長亮，馬小軍，白隆華，等.羅漢果脫毒苗的快速繁殖研究[J].中草藥，2005，36（8）： 1 225-1 229. （責編：施婷婷）