生梔子與炒梔子中梔子苷含量比較

邵考珍，譚梅英，詹利之

(1.佛山市南海區(qū)第七人民醫(yī)院，廣東 佛山 528248；2.廣東省第二中醫(yī)院，廣東 廣州 510095；3.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 青蒿研究中心，廣東 廣州 510405)

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生梔子與炒梔子中梔子苷含量比較

邵考珍1，譚梅英2，詹利之3

(1.佛山市南海區(qū)第七人民醫(yī)院，廣東 佛山 528248；2.廣東省第二中醫(yī)院，廣東 廣州 510095；3.廣州中醫(yī)藥大學(xué) 青蒿研究中心，廣東 廣州 510405)

目的：研究炒制對(duì)梔子中梔子苷含量的影響。方法：采用高效液相色譜法對(duì)生梔子與炒梔子中梔子苷含量進(jìn)行測(cè)定，以Agilent Zobax Eclipse XDB C18(4.6mm×250mm，5μm)為色譜柱，以乙腈-水(15∶85)為流動(dòng)相，檢測(cè)波長238nm，流速為1.0mL/min，柱溫25℃。結(jié)果：炒梔子中梔子苷的含量較生梔子降低。結(jié)論：梔子的炒制符合中醫(yī)臨床用藥標(biāo)準(zhǔn)。

生梔子；炒梔子；梔子苷

梔子[1]為茜草科植物梔子GardeniajasminoidesEllis的成熟果實(shí)，為臨床常用中藥。9-11月果實(shí)成熟呈紅黃色，除去果梗和雜質(zhì)，蒸至上氣或置沸水中略燙，取出，干燥。其性苦，寒，歸心、肺、三焦經(jīng),具有瀉火除煩、清熱利濕、涼血解毒等作用。用于熱病心煩、血熱吐衄、目赤腫痛、淋證澀痛、濕熱黃疸、火毒瘡瘍及扭挫傷痛。梔子主要藥材成分為環(huán)烯醚萜苷類、黃酮類、二萜色素類、有機(jī)酸及其酯類等[2]。現(xiàn)代藥理研究表明，梔子苷[3-7]具有保肝利膽、抗腫瘤、降血糖、保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞等作用。本實(shí)驗(yàn)采用高效液相色譜法對(duì)梔子炮制前后梔子苷的含量進(jìn)行了比較，研究炒制對(duì)梔子苷含量的影響，為臨床合理用藥提供實(shí)驗(yàn)參考。

1 儀器與試藥

Agilent 1100高效液相色譜儀，DAD檢測(cè)器；YF-113系列高速中藥粉碎機(jī)(浙江瑞安市環(huán)球藥械廠)，Raytek Raynger ST-20型紅外測(cè)溫槍(美國雷泰公司)，CCFG-160型電炒鍋(廣東湛江家用電器工業(yè)公司)。

梔子藥材購于福建省藥材公司(批號(hào)：20131204)，經(jīng)鑒定為茜草科植物梔子GardeniajasminoidesEllis的干燥成熟果實(shí)，為正品；梔子苷對(duì)照品(110749-200613，中國食品藥品檢定研究所)；乙腈為色譜純，水為高純水。

2 梔子炒制

取梔子藥材，在50℃烘箱中烘干。分別稱取樣品5份，每份50g，置炒鍋中，調(diào)整火力并控制炒制時(shí)間，照清炒法(附錄ⅡD)炒至黃褐色。

3 梔子苷含量測(cè)定

3.1 色譜條件

色譜柱：Agilent Zobax Eclipse XDB C18(4.6mm×250mm，5μm)，流動(dòng)相∶乙腈-水(15∶85)；流速：1.0mL/min；柱溫：25℃；檢測(cè)波長：238nm。

3.2 對(duì)照品溶液制備

精密稱取干燥恒重的梔子苷對(duì)照品適量，置于容量瓶中，加乙腈水溶液稀釋，搖勻，即制成103.7μg/ mL的梔子苷對(duì)照品溶液。

3.3 供試品溶液制備

取梔子粉末(過四號(hào)篩)約0.1g，精密稱定，置于具塞錐形瓶中，加入甲醇25mL，稱定重量，超聲處理20min，放冷，再稱定其重量，并用甲醇補(bǔ)足減失的重量，搖勻?yàn)V過。精密量取續(xù)濾液10mL，置于25mL量瓶中，加甲醇至刻度，搖勻，即得。

3.4 標(biāo)準(zhǔn)曲線制備

精密吸取“3.2”項(xiàng)下梔子苷對(duì)照品溶液(103.7μg/mL) 1.0、2.0、3.0、4.0、5.0、6.0mL，分別置于10mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，分別精密吸取梔子苷對(duì)照品溶液各10μL，注入液相色譜儀中，按照“3.1”項(xiàng)下的色譜條件進(jìn)行測(cè)定。以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，進(jìn)行線性回歸，得回歸方程Y=11.853X+9.7412(r=0.999 91)。結(jié)果表明，梔子苷進(jìn)樣量在10.37～62.22ng范圍內(nèi)與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

3.5 精密度試驗(yàn)

精密吸取同一對(duì)照品溶液10μL，連續(xù)進(jìn)樣6次，按照“3.1”項(xiàng)下的測(cè)定條件進(jìn)行測(cè)定，結(jié)果RSD=0.32%。

3.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

精密吸取同一供試品溶液10μL，于0、2、4、8、12、24h時(shí)間間隔進(jìn)樣分析，測(cè)定其色譜峰面積，結(jié)果RSD=1.08%。

3.7 重復(fù)性試驗(yàn)

精密稱取同一樣品粉末6份，每份0.1g，精密稱定，按照供試品溶液的制備方法制備，進(jìn)樣分析，結(jié)果RSD=1.87%。

3.8 加樣回收率試驗(yàn)

取已知含量的生梔子粉末6份，每份約0.05g，精密稱定，精密加入梔子苷對(duì)照品溶液適量，按照供試品溶液的制備方法處理，測(cè)定其含量，計(jì)算梔子苷的平均回收率=98.1%，RSD=1.9%，結(jié)果見表1。

表1 梔子苷加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果

3.9 樣品含量測(cè)定

取不同炮制品粉末0.1g，精密稱定，按照“3.3”項(xiàng)下制備供試品溶液，分別精密吸取10μL進(jìn)樣，測(cè)定結(jié)果計(jì)算平均值。結(jié)果生梔子中梔子苷平均含量為3.3%，炒梔子中梔子苷平均含量為2.3%。見圖1。

圖1 梔子含量測(cè)定HPLC色譜

4 結(jié)論

梔子中梔子苷的提取方法包括了回流提取法、超聲提取法和索氏提取法等，其中以甲醇為溶劑超聲處理提取樣品的方法較好。提取時(shí)間達(dá)20min時(shí)，梔子苷基本能夠提取完全。流動(dòng)相系統(tǒng)選擇比較了甲醇-水、乙腈-水等，其中以乙腈-水(15∶85)分離效果較好，梔子苷能夠在較短的時(shí)間內(nèi)出峰，而且色譜峰的分離度較好。

本文采用高效液相色譜法測(cè)定了生梔子和炒梔子中梔子苷的含量，方法簡(jiǎn)便準(zhǔn)確，重復(fù)性好，作為梔子中梔子苷含量測(cè)定的方法穩(wěn)定可控。

從含量測(cè)定結(jié)果可以看出，梔子炒制后梔子苷的含量降低，生梔子(3.3%)大于炒梔子(2.3%)，說明梔子苷受熱不穩(wěn)定。傳統(tǒng)認(rèn)為梔子炒制后可以緩和寒性，以免苦寒傷胃，與實(shí)驗(yàn)結(jié)果相一致。

[1] 國家藥典委員會(huì)．中華人民共和國藥典[S]．一部．北京：中國醫(yī)藥科技出版社，2010：231-232．

[2] 孟祥東，李紅偉，李顏，等．梔子化學(xué)成分及其藥理作用研究進(jìn)展[J]．中國新藥雜志，2011，20(11)：959．

[3] 孫旭群，趙新民，楊旭．梔子苷利膽作用實(shí)驗(yàn)研究[J]．安徽中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2004，24(5)：33．

[4] 張立明，何開澤，任治軍，等．梔子中京尼平苷對(duì)CCl4急性小鼠肝損傷保護(hù)作用的生化機(jī)理研究[J]．應(yīng)用與環(huán)境微生物學(xué)報(bào)，2005，11(6)：669．

[5] WANG G F，WU S Y，XU W．Geniposide inhibits high glucose-induced cell adhesion through the NF-kB signaling pathway in human umbilical vein endothelial cells[J]．Acta Pharmacol Sin，2010，31(8)：953．

[6] 李偉華，朱陵群，王碩仁，等．黃芩苷梔子苷對(duì)神經(jīng)細(xì)胞缺氧缺糖．再灌注損傷的保護(hù)作用[J]．中國藥學(xué)雜志，2004，39(5)：31．

[7] CAO H L，F(xiàn)ENG Q，XU W，et a1．Genipin induced apoptosis associated with activation of the c-Jun NH2-terminal kinase and p53 protein in HeLa cells[J]．Biol Pham Bull，2010，33(8)：1343．

(責(zé)任編輯：李嵐春)

Comparison of Geniposide in Gardeniae Fructus Processing

Shao Kaozhen1，Tan Meiying2，Zhan Lizhi3

(1.Nanhai District of Foshan City Seventh People's Hospital，Guangdong Foshan 528248；2.Guangdong Second Traditional Chinese Medicine Hospital,Guangdong Guangzhou 510095；3.Research Center of Guangzhou University of Chinese Medicine of Artemisia Annua，Guangdong Guangzhou 510405)

Objective:To analysis the content change of geniposide in Gardeniae Fructus processed.Methods:A HPLC method was developed. The chromatographic conditions are as follow: Agilent Zobax Eclipse XDB C18 (4.6 mm×250 mm, 5μm), acetonitrile-water (15:85) as mobile phase, detection wavelength at 238nm, the flow was 1.0ml/min, column temperature was 25℃.Results:The content of geniposide was lower after processing.Conclusion:Processing of gardeniae fructus conforms to Chinese Clinical Medicine.

Crude Gardeniae Fructus; Stir-baked Gardeniae Fructus;Geniposide

2014-03-24

邵考珍(1975-)，女 ，廣東省佛山市南海區(qū)第七人民醫(yī)院主管中藥師， 研究方向?yàn)橹兴幉牡腍PLC指紋圖譜。

R284.1

A

1673-2197(2014)12-0015-02