高效毛細(xì)管電泳在西北中藏藥黃酮類化合物中的應(yīng)用研究

高瑞斌，楊 艷，董樹清，倪京滿，郭 玫*，趙 亮

(1.甘肅中醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)系 中(藏)藥化學(xué)與質(zhì)量研究省級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅 蘭州 730000；2.中國(guó)科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究所 西北特色植物資源化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅 蘭州 730000；3.蘭州大學(xué) 藥學(xué)院，甘肅 蘭州 730000)

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高效毛細(xì)管電泳在西北中藏藥黃酮類化合物中的應(yīng)用研究

高瑞斌1，楊 艷3，董樹清2，倪京滿3，郭 玫1*，趙 亮2

(1.甘肅中醫(yī)學(xué)院 藥學(xué)系 中(藏)藥化學(xué)與質(zhì)量研究省級(jí)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅 蘭州 730000；2.中國(guó)科學(xué)院蘭州化學(xué)物理研究所 西北特色植物資源化學(xué)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，甘肅 蘭州 730000；3.蘭州大學(xué) 藥學(xué)院，甘肅 蘭州 730000)

西北中藏藥作為中國(guó)特有的高原植物，長(zhǎng)期生長(zhǎng)于強(qiáng)輻射、日照時(shí)間長(zhǎng)的環(huán)境下，具有有效成分含量高、生物活性強(qiáng)等優(yōu)勢(shì)。然而，目前對(duì)于該類藥物的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究還十分有限，常用技術(shù)不能滿足其質(zhì)量和開發(fā)研究。因此采用新型分離分析技術(shù)，即高效毛細(xì)管電泳技術(shù)(HPCE)，利用其高效、快速、進(jìn)樣體積小、多模式等特點(diǎn)，對(duì)西北中藏藥中黃酮類化合物展開分析研究。綜述不同分離模式下利用電泳技術(shù)對(duì)西北中藏藥中黃酮類化合物及其它活性成分進(jìn)行研究的文獻(xiàn)報(bào)道，以期為其開發(fā)利用提供科學(xué)依據(jù)。

高效毛細(xì)管電泳；黃酮類化合物；西北中藏藥

高效毛細(xì)管電泳(High Performance Capillary Electrophoresis, HPCE)也稱為毛細(xì)管電分離法(CESM)，是離子或荷電粒子以電場(chǎng)為驅(qū)動(dòng)力，在毛細(xì)管中根據(jù)其淌度或/和分配系數(shù)的不同進(jìn)行高效、快速分離的一種新型技術(shù)。近幾年許多學(xué)者利用毛細(xì)管電泳獨(dú)特的分離優(yōu)勢(shì)，選取富含黃酮類成分的西部特色中藏藥為研究對(duì)象，利用CE技術(shù)對(duì)該類成分進(jìn)行了分離及含量測(cè)定，為進(jìn)一步研究西北中藏藥的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)奠定了理論基礎(chǔ)。

1 不同CE模式研究中藏藥黃酮類成分

毛細(xì)管電泳有多種模式，為樣品的分離提供了諸多選擇，尤其對(duì)復(fù)雜樣品的分離分析有重要意義。根據(jù)不同的分離原理，多種類型的毛細(xì)管電泳被開發(fā)出來(lái)，為中藏藥黃酮類成分的研究拓寬了道路。

1.1 毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)應(yīng)用研究

毛細(xì)管區(qū)帶電泳(CZE)也稱為自由溶液毛細(xì)管電泳，是毛細(xì)管電泳中最簡(jiǎn)單的一種分離形式，其介質(zhì)為一種具有pH緩沖能力的均勻自由溶液，通常稱為電泳緩沖液[1]。在采用CZE法分離中藏藥中黃酮類物質(zhì)時(shí)，黃酮上帶有的鄰羥基基團(tuán)能與硼酸根形成配位鍵，使其帶上負(fù)電荷，從而達(dá)到分離的目的。因此，CZE法被廣泛用于黃酮類化合物的檢測(cè)。運(yùn)用CZE技術(shù)分析中藏藥黃酮類化合物的報(bào)道見表1。

表1 CZE在中藏藥中黃酮類成分分析中的應(yīng)用

1.2 膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜(MECC)應(yīng)用研究

膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜是將離子型表面活性劑(如十二烷基硫酸鈉，SDS)加入緩沖溶液中，當(dāng)其濃度足夠大時(shí)即形成內(nèi)核疏水、外部帶電的動(dòng)態(tài)膠束，可根據(jù)樣品組分在水相和膠束相間分配行為的差異進(jìn)行分離。MECC技術(shù)的突出優(yōu)勢(shì)在于使CE的應(yīng)用范圍拓展到中性物質(zhì)的分離中，通常被認(rèn)為是分離效果最好的色譜技術(shù)。表2即歸納了近年來(lái)運(yùn)用MECC技術(shù)測(cè)定中藥中黃酮類成分的相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。

表2 MECC在中藥黃酮類成分分析中的應(yīng)用

1.3 毛細(xì)管電色譜(CEC)應(yīng)用研究

CEC是在毛細(xì)管中填充液相色譜固定相微粒，以電泳中的電滲流作為驅(qū)動(dòng)力，根據(jù)樣品和固定相之間的相互作用實(shí)現(xiàn)樣品分離的技術(shù)，尤其適用于小分子物質(zhì)的分離研究。劉海興等[20-21]采用毛細(xì)管電色譜法對(duì)旱蓮中的總黃酮含量進(jìn)行了測(cè)定，所確定的電泳條件為：8mmol/L磷酸二氫鈉-8mmol/L磷酸氫二鈉緩沖溶液(pH=8.02)，運(yùn)行電壓為12kV，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，實(shí)驗(yàn)結(jié)果證實(shí)了黃酮類成分是旱蓮的主要活性成分，直接影響著其功效，也為旱蓮的質(zhì)量控制提供了新的方法。

此外，其它模式的電泳技術(shù)對(duì)藥物成分研究也有一定的作用，如毛細(xì)管凝膠電泳(Capillary Gel Electrophoresis，CGE)、毛細(xì)管等電聚焦(Capillary Isoelectric Focusing，CIEF)、毛細(xì)管等速電泳(Capillary Isoelectric-phoresis,CITP)等。

2 HPCE在西北中藏藥特有活性成分研究中的應(yīng)用

很多學(xué)者在對(duì)中藏藥中黃酮類成分進(jìn)行研究的同時(shí)也對(duì)其它活性組分做了一定研究。表3收載了近年來(lái)運(yùn)用HPCE技術(shù)對(duì)藏藥中特有活性成分的研究報(bào)道。

3 結(jié)語(yǔ)

近年來(lái)，有關(guān)毛細(xì)管電泳的研究日益深入，其在分析、分離等方面的應(yīng)用相比其他色譜方法更有優(yōu)勢(shì)，如高靈敏度、高速、樣品耗用量少、重現(xiàn)性好、自動(dòng)化等，這對(duì)于西北中藏藥中黃酮類化合物的分離分析具有重要意義。隨著商品化儀器的不斷改進(jìn)，毛細(xì)管電泳及其聯(lián)用技術(shù)將會(huì)在生藥資源豐富的西北地區(qū)發(fā)揮更大作用，為中藏藥活性成分的研究提供更為廣闊的應(yīng)用空間。

表3 CE技術(shù)在藏藥特有活性成分分析測(cè)定中的應(yīng)用

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(責(zé)任編輯：尹晨茹)

High Performance Capillary Electrophoresis in the Northwest Tibetan Medicine Flavonoids in the Applied Research

Ruibin Gao1, Yan Yang3,Shuqing Dong2, Jingman Ni3, Mei Guo1*, Liang Zhao2*

(1.Key Laboratory of Chemistry and Quality of Traditional Chinese Medicines,Department of Pharmacy, Gansu College of Traditional Chinese Medicine, Lanzhou 730000, China;2.Key laboratory of Chemistry of Northwestern Plant Resources ,Lanzhou Institute of Chemical Physics of Chinese Academy of Sciences, Lanzhou 730000, China;3. Lanzhou University, Lanzhou 730000, China)

As a native plateau plant to China, Chinese-Tibetan medicine in Northwest has the characteristics of strong radiation, long sunshine, higher accumulation of effective ingredients and higher bioactivity. However, at present, the studies on the quality standard of such medicine are limited. Common techniques are no guarantee of the quality and research of Chinese-Tibetan medicine in Northwest. Therefore, we need to adopt a new-type technique for sample analysis and separation, i.e. high performance capillary electrophoresis (HPCE), expanding analysis research for flavonoids of Chinese-Tibetan Medicine in Northwest with the help of the characteristics of high efficiency、high speed、sampling with small size and multimode. This paper reviews the reports in literatures about the research of the electrophoresis technique (HPCE)for flavonoids and other active ingredients of Chinese-Tibetan medicine in Northwest in different separation modes.

High Performance Capillary Electrophoresis; Flavonoids; Chinese Tibetan Medicine

2014-01-08

中科院科技支新項(xiàng)目(2011-2013)；蘭州市科技專項(xiàng)計(jì)劃(2011-1-156)

高瑞斌(1986-)，男，甘肅中醫(yī)學(xué)院碩士研究生，研究方向?yàn)橹兴幱行С煞峙c質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

郭玫(1963-)，女，甘肅中醫(yī)學(xué)院教授，碩士生導(dǎo)師，研究方向?yàn)橹兴幱行С煞旨百|(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。

R285

A

1673-2197(2014)12-0005-04