HPLC法測定菊花中木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷含量

李 琛

(武漢市中醫醫院，湖北 武漢 430014)

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HPLC法測定菊花中木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷含量

李 琛

(武漢市中醫醫院，湖北 武漢 430014)

目的：建立高效液相色譜測定菊花中木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷含量的方法。方法：色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18，流動相為0.4%醋酸溶液-乙腈，梯度洗脫，流速為1.0mL/min，檢測波長為269nm，柱溫為30℃。結果：實驗結果表明，木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷分別在0.055 1～0.350 2g/L和0.064 2～0.125 1g/L濃度范圍內與其峰面積積分呈良好的線性關系，r分別為0.999 3和0.999 5，加樣回收率分別為98.45%和99.68%。結論：采取高效液相色譜法測定菊花中木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷含量簡便可行，專屬性較強，結果準確可靠，可作為菊花中有效成分的含量測定方法，用于其質量控制。

菊花；木犀草素；木犀草素-7-O-葡萄糖苷；高效液相色譜法；含量測定

菊花為菊科植物菊花的干燥頭狀花序，其主要功效為疏風、清熱、明目、解毒等，可用于治療頭痛、目赤、眩暈、疔瘡、心胸煩熱以及腫毒等癥[2]。現代藥理學研究表明，菊花可治療冠心病、降血壓、預防高血脂等，并具有抗病毒、抗菌、抗衰老等諸多藥理活性。中藥材有效成分相對復雜，近年研究顯示，菊花含有的木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷具有顯著的降血脂、降血壓以及雙向免疫調節作用[2]。因此本研究建立了高效液相色譜測定菊花中木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷含量的方法，以控制菊花藥材的質量，現報道如下。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

Agilent 1100 系列高效液相色譜儀，包括配套的UV 檢測器，四元泵，自動進樣器以及柱溫箱；電子天平。

1.2 試劑與藥材

木犀草素對照品，木犀草素-7-O-葡萄糖苷對照品，純度均>98.5%；菊花藥材，購自5個不同產地，通過鑒定證實為菊科菊屬植物菊的干燥頭狀花序。乙腈為色譜純，醋酸為分析純，實驗用水為樂百氏純凈水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

色譜柱為Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱，流動相為0.4%醋酸溶液-乙腈，梯度洗脫，A相為0.4%醋酸水溶液，B相為乙腈，0～5min時B相濃度為5%～15%，5～10min時為15%～25%，10～25min時為25%～55%。流速為1.0mL/min，檢測波長為269nm，柱溫為30℃，進樣量為20μL[3]。

2.2 溶液制備

2.2.1 對照品溶液制備 精密稱取木犀草素1.02mg和木犀草素-7-O-葡萄糖苷1.04mg，經甲醇溶解后定容至1mL容量瓶中，搖勻，經0.45μm微孔濾膜濾過后得到混合對照品溶液，于4℃下保存備用。

2.2.2 供試品溶液制備 菊花藥材經充分粉碎后過60目篩，精密稱取1g菊花粉末，用20mL甲醇溶解，超聲提取1.5h，所得提取液經石油醚萃取，萃取液經0.45μm微孔濾膜過濾，得供試品溶液，于4℃下保存備用。

2.3 線性關系考察

將對照品溶液配制成一系列濃度的溶液，在上述色譜條件下進樣檢測，以色譜峰面積作為縱坐標，對照品質量濃度作為橫坐標進行線性回歸，得回歸方程為：Y(木犀草素)=56 923X-1.613，r=0.999 3，木犀草素在0.055 1～0.350 2g/L濃度范圍內與其峰面積呈良好的線性關系；Y(木犀草素-7-O-葡萄糖苷)=57 144X-1.703，r=0.999 5，木犀草素-7-O-葡萄糖苷在0.064 2～0.125 1g/L濃度范圍內與其峰面積呈良好的線性關系。

2.4 精密度考察

取同一濃度供試品溶液在上述色譜條件下進樣檢測，連續操作6次，計算木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷峰面積的RSD值，結果表明木犀草素峰面積RSD值為0.98%，木犀草素-7-O-葡萄糖苷峰面積RSD值為0.77%，均在允許范圍內，表明該方法精密度良好。

2.5 重復性考察

取同一批次的菊花藥材，制成供試品溶液，在上述色譜條件下進樣檢測，計算木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷的峰面積RSD值，結果表明木犀草素峰面積RSD值為1.01%，木犀草素-7-O-葡萄糖苷峰面積RSD值為1.12%，均在允許范圍內，表明該方法重復性良好。

2.6 穩定性考察

取同一供試品溶液，分別在配制后0、2、4、6、8、12、16h時在上述色譜條件下進樣檢測，計算木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷的峰面積RSD值，結果表明木犀草素峰面積RSD值為1.22%，木犀草素-7-O-葡萄糖苷峰面積RSD值為1.28%，表明供試品溶液在16h內具有良好的穩定性，測定結果可靠。

2.7 加樣回收實驗

稱取5份已知有效成分含量的菊花樣品，每份1g，分別精密加入一定量的木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷對照品溶液，制成供試品溶液，在上述色譜條件下進樣檢測，計算木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷的回收率，結果見表1。

表1 加樣回收率實驗結果

2.8 樣品測定

將5個不同產地的菊花藥材充分粉碎后過60目篩，制成供試品溶液，在上述色譜條件下進樣測定，測得木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷的含量詳見表2。

表2 不同產地菊花中木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷含量測定結果 (mg/g)

3 討論

菊花屬于藥食同源植物，目前關于菊花的分類、鑒定、化學成分、臨床以及藥理研究均較多，其有效成分復雜，其中木犀草素與木犀草素-7-O-葡萄糖苷為兩種重要成分[4]。為了對菊花進行充分開發利用，本研究擬建立高效液相色譜測定菊花中木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷含量的方法。本研究對超聲提取法的提取時間、提取溶劑以及提取次數等均進行了考察，結果發現，無水甲醇一次性超聲提取1h的色譜峰響應值最高，且含量也未發生明顯改變，穩定性良好。其后對流動相比例也進行了考察，最后確定流動相為乙腈-0.4%醋酸水溶液梯度洗脫[5]。

通過線性關系、精密度、重現性考察證實，木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷分別在0.055 1～0.350 2g/L和0.064 2～0.125 1g/L范圍內與其峰面積呈良好的線性關系，r分別為0.999 3和0.999 5，加樣回收率分別為98.45%和99.68%。該法精密度與重現性良好，加樣回收實驗表明木犀草素與木犀草素-7-O-葡萄糖苷的回收率分別為97.6%和99.8%；穩定性實驗表明菊花供試品溶液在16h內具有良好的穩定性；最后對5個不同產地菊花藥材中木犀草素和木犀草素-7-O-葡萄糖苷的含量進行了測定，結果表明，不同產地菊花的有效成分含量存在一定差異，說明菊花的有效成分含量會受產地的影響，值得關注[6-7]。

綜上所述，本研究建立的檢測方法具有較高的可行性和專屬性，精密度與重現性良好，檢測結果準確，可作為菊花藥材質量控制的有效手段，為市場藥材流通以及臨床用藥提供了可靠依據，值得關注并推廣。

[1] 朱曉麗,宋亞芳,李學林,等.高效液相色譜法測定野菊花中綠原酸的含量[J].中國實驗方劑學雜志,2010,11(2):334-335.

[2] 李志浩,李鵬,朱雪松,等.反相高效液相色譜法同時測定神農香菊中綠原酸木犀草素和蒙花苷的含量[J].醫藥導報,2010,14(4):921-923.

[3] 侯坤,許浚,張鐵軍.HPLC同時測定小薊中蒙花苷和綠原酸的含量[J].中國實驗方劑學雜志,2010,23(13):783-784.

[4] 朱麗,盧化.HPLC法測定藥用菊花中木犀草素的含量[J].湖北中醫雜志,2010,14(2):1098-1099.

[5] 楊柳,李俐,雷基祥,等.不同品種菊花和貴州產野菊花中木犀草素的含量比較[J].中國野生植物資源,2009,23(1):452-454.

[6] 王柯,王艷艷,趙東保,等.HPLC法測定金銀花不同部位中木犀草素及其苷的含量[J].河南大學學報:自然科學版,2011,22(1):1121-1122.

[7] 陳月圓,李典鵬,盧鳳來,等.HPLC-ELSD法測定細風輪菜中醉魚草苷Ⅳ的含量[J].農業研究與應用,2011,16(3):1145-1146.

(責任編輯：尹晨茹)

2014-01-06

李琛(1973-)，女，湖北省武漢市中醫醫院主管中藥師，研究方向為中藥制劑。

R284.1

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1673-2197(2014)08-0019-02