LC-MS/MS法檢測(cè)降壓類中成藥及保健品中非法添加的7種化學(xué)藥物

魏志雄，劉丹丹

(東莞市食品藥品檢驗(yàn)所，廣東 東莞 523109)

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LC-MS/MS法檢測(cè)降壓類中成藥及保健品中非法添加的7種化學(xué)藥物

魏志雄*，劉丹丹

(東莞市食品藥品檢驗(yàn)所，廣東 東莞 523109)

目的：建立快速、靈敏、準(zhǔn)確的檢測(cè)降壓類中成藥及保健品中非法添加阿替洛爾、鹽酸可樂定、氫氯噻嗪、卡托普利、鹽酸哌唑嗪、利血平及硝苯地平等7種化學(xué)藥物的LC-MS/MS方法。方法：采用 Phenomenex Luna C18(2.0mm×100mm，3μm)色譜柱進(jìn)行分離，以0.5%甲酸水-乙腈為流動(dòng)相梯度洗脫，流速為0.2 mL·min-1，離子源為ESI源，正負(fù)離子檢測(cè)模式，對(duì)降壓類中成藥及保健品中非法添加的該7種化學(xué)藥物進(jìn)行定性檢測(cè)。結(jié)果：7種化學(xué)藥物的檢出限分別為0.01～0.02ng，6批供試品有1批檢測(cè)到非法添加氫氯噻嗪。結(jié)論：該方法專屬性強(qiáng)、靈敏度高，適用于降壓類中成藥及保健品中非法添加該7種化學(xué)藥物的定性分析。

中成藥及保健品；化學(xué)藥物；液相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用法

高血壓是常見病、多發(fā)病，其發(fā)病率隨著人民生活水平的提高、生活方式的改變及年齡結(jié)構(gòu)的老齡化而迅速增加，已經(jīng)嚴(yán)重威脅到人類健康。降壓類西藥起效迅速，療效確切，市場(chǎng)應(yīng)用廣泛，但其具有依賴性嚴(yán)重、停藥反彈及長(zhǎng)期應(yīng)用會(huì)不同程度損害肝腎等副作用[1-2]。因受利益驅(qū)使，不法分子往中成藥及保健品中非法添加降壓類西藥[3]，致使患者在不知情的情況下，未按照正確用法、用量使用藥物，造成巨大的健康隱患和帶來嚴(yán)重的不良反應(yīng)。本實(shí)驗(yàn)在參考相關(guān)文獻(xiàn)研究[4-7]的基礎(chǔ)上，運(yùn)用液質(zhì)聯(lián)用技術(shù)，采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)掃描方式，首次建立了同時(shí)監(jiān)測(cè)非法添加的7種降壓化學(xué)藥物的定性檢測(cè)方法，為更好地打擊不法行為提供可靠的技術(shù)保障。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

AB 3200 QTRAP 液質(zhì)聯(lián)用儀(美國(guó)應(yīng)用生物系統(tǒng)公司)，配有電噴霧離子化源、三重四級(jí)桿質(zhì)量分析器及Analyst 1.5.1工作站；Sartorius BP211D。

1.2 試藥

對(duì)照品均由中國(guó)食品藥品檢定研究院提供。阿替洛爾(批號(hào)：100117-199903)、鹽酸可樂定(批號(hào)：0071-9504)、氫氯噻嗪(批號(hào)：100309-200702)、卡托普利(批號(hào)：100318-200602)、鹽酸哌唑嗪(批號(hào)：100164-200402)、利血平(批號(hào)：041-9409)及硝苯地平(批號(hào)：100338-0001)。樣品：6個(gè)樣品由本所在市場(chǎng)購(gòu)得。乙腈、甲酸均為色譜純，水為超純水。

2 實(shí)驗(yàn)方法

2.1 色譜條件

色譜柱：Phenomenex Luna C18(2.0mm×100mm，3μm)；流動(dòng)相：以0.5%甲酸水溶液為流動(dòng)相A，乙腈為流動(dòng)相B，梯度洗脫，見表1。流速：0.2mL/min；進(jìn)樣量：5μL；柱溫：35℃。

表1 液相色譜梯度洗脫

2.2 質(zhì)譜條件

ESI電離源；正負(fù)離子掃描模式，區(qū)間掃描模式見表2；多反應(yīng)監(jiān)測(cè)(MRM)掃描方式；噴霧電壓：5500V；氣簾氣壓力：25psi；霧化氣壓力：40psi；輔助加熱器溫度：400℃；輔助氣壓力：40psi；碰撞氣壓力：Medium；碰撞室出口電壓：3 V，解簇電壓(DP)及碰撞能量(CE)。見表3。

表2 區(qū)間質(zhì)譜掃描模式

2.3 對(duì)照品溶液的制備

對(duì)照品儲(chǔ)備溶液：取上述7種對(duì)照品約10mg，精密稱定，分別置于100mL量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻。

混合對(duì)照品溶液：分別精密吸取上述對(duì)照品儲(chǔ)備液1mL，置同一100mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續(xù)濾液，即得。

2.4 供試品溶液的制備

取一次服用量的供試品，研細(xì)，精密稱取0.5g置于50mL量瓶中，加入甲醇40mL，超聲處理15min，放冷至室溫，加入甲醇至刻度，混勻，濾過，精密吸取續(xù)濾液1mL，置100mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，過0.2μm濾膜，取續(xù)濾液，即得。

2.5 樣品測(cè)定

取混合對(duì)照品溶液及供試品溶液各10μL注入液質(zhì)聯(lián)用儀，按照LC-MS/MS測(cè)定條件分別進(jìn)行分析。

3 結(jié)果

3.1 質(zhì)譜條件的優(yōu)化

分別將7種對(duì)照品儲(chǔ)備液用甲醇稀釋至1μg·mL-1的對(duì)照溶液，采用ESI離子化方式，通過直接進(jìn)樣，進(jìn)行質(zhì)譜條件優(yōu)化。首先，采用母離子掃描(Q1)方式得到準(zhǔn)分子離子峰，在確定準(zhǔn)分子離子峰的基礎(chǔ)上，進(jìn)行DP值的優(yōu)化，得到各成分的最佳DP值，再采用子離子掃描(MS2)方式確定其子離子及最佳CE值，最后選擇母離子及豐度較大的子離子組成檢測(cè)離子對(duì)，使MRM具較高的靈敏度。此外，在樣品測(cè)定中可適當(dāng)增加離子對(duì)數(shù)量，使MRM具有更強(qiáng)專屬性。結(jié)果見表3。

表3 7種降壓化學(xué)藥物的質(zhì)譜條件優(yōu)化結(jié)果

3.2 檢測(cè)限

取對(duì)照品溶液適量，加甲醇逐步稀釋，按上述液質(zhì)聯(lián)用條件進(jìn)行測(cè)定，以S/N=3，計(jì)算各成分的最低檢測(cè)限(LOD)。結(jié)果見表4。

表4 7種降壓化學(xué)藥物的最低檢測(cè)限

3.3 樣品測(cè)定結(jié)果

在質(zhì)量色譜圖中，如供試品出現(xiàn)與混合對(duì)照品保留時(shí)間一致的質(zhì)量色譜峰，則需比較其與相應(yīng)的對(duì)照品MS/MS圖，若其離子對(duì)相同，且其相對(duì)豐度一致，見表5，則判斷該樣品中含有該化學(xué)成分。在抽取檢驗(yàn)的6批次供試品中，檢出1批樣品添加了氫氯噻嗪，相應(yīng)圖譜見圖1、圖2。

表5 定性確證時(shí)相對(duì)離子豐度的最大允許相對(duì)偏差

4 討論

硝苯地平光穩(wěn)定性較差，操作中應(yīng)盡量避光，配置過程須采用棕色容量瓶。阿替洛爾因結(jié)構(gòu)中含有一個(gè)手性碳原子，存在著對(duì)映異構(gòu)現(xiàn)象，為外消旋體[8]，故在質(zhì)量色譜中出現(xiàn)兩個(gè)不同保留時(shí)間的吸收峰。

為使7種化學(xué)成分達(dá)到滿意的分離度，分別對(duì)0.5%甲酸-乙腈、0.5%乙酸-乙腈、0.5%甲酸-甲醇、0.5%乙酸-甲醇及20mmol/L乙酸銨-乙腈等洗脫條件進(jìn)行了考察，結(jié)果表明在0.5%甲酸-乙腈梯度洗脫時(shí)，7種化合成分的離子化效率高，并均能得到較好的分離。

本實(shí)驗(yàn)共建立了7種降壓類保健品中非法添加成分的定性檢測(cè)方法，該方法采用多反應(yīng)監(jiān)測(cè)的方式檢測(cè)，專屬性強(qiáng)，靈敏度高，檢測(cè)結(jié)果更準(zhǔn)確。

圖1 混合對(duì)照品中氫氯噻嗪的質(zhì)量色譜及MS/MS

圖2 樣品中氫氯噻嗪的質(zhì)量色譜及MS/MS

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(責(zé)任編輯：宋勇剛)

Detection of Seven Chemical Medicines in Antihypertensive Traditional Chinese Medicine and Health Foods by LC-MS/MS

Wei Zhixiong，Liu Dandan

(Dongguan Institute for Food and Drug Control，Guang Dong 523109,China)

Objective:To establish a rapid, sensitive and accurate LC-MS/MS method for the detection of atenolol, clonidine hydrochloride, hydrochlorothizide, caotopril, prazosin hydrochloride, reserpine and nifedipine, which were illegally added into antihytensive Traditional Chinese Medicine and Health Foods.Methods:Phenomenex Luna C18(2.0mm×100mm,3μm) was adopted with the mobile phase of 0.5% formic acid and acetonitrile by gradient elution. The flow rate was 0.2mL·min-1. The electrospray ionization source was applied and operated in positive and negative ion mode.Results:The limit detection of seven antihytensive medicines were in the range of 0.01～0.02 ng. Hydrochlorothizide was found in one formulation of six.Conclusion:The method is selective and sensitive and can be employed in the detection of seven chemical medicines in antihytensive Traditional Chinese Medicine and Health Foods.

Traditional Chinese Medicine and Health Foods; Chemical Medicines; LC-MS/MS

2014-01-16

魏志雄(1983-)，男，博士，廣東省東莞市食品藥品檢驗(yàn)所主管中藥師，研究方向?yàn)楸＝∈称放c藥品檢驗(yàn)。

R284.1

A

1673-2197(2014)11-0012-03