紫茜抗癌膠囊對大鼠的長期毒性研究

安美順，王增濤，金光洙*

(1.延吉市傳統醫院，吉林 延吉 133000；2.延邊大學 藥學院 藥物化學教研部，吉林 延吉 133002)

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紫茜抗癌膠囊對大鼠的長期毒性研究

安美順1，王增濤2，金光洙2*

(1.延吉市傳統醫院，吉林 延吉 133000；2.延邊大學 藥學院 藥物化學教研部，吉林 延吉 133002)

目的：觀察連續灌胃給予紫茜抗癌膠囊對大鼠產生的毒性反應。方法：80只Wistar大鼠，雌雄各半，按體重隨機分為高、中、低劑量組及空白對照組，高、中、低劑量組給藥劑量分別為3.43、2.05、0.686g/kg (相當于臨床劑量的50、30、10倍)，連續灌胃給藥90天，按常規方法觀察動物一般狀況、體重、攝食量、血液學指標、血液生化學指標、臟器重量系數及組織病理學改變。結果：紫茜抗癌膠囊高劑量組肝臟略微出現少量炎性細胞浸潤，腎間質血管輕度擴張充血，其它各劑量組各項指標與對照組比較均無明顯差異。結論：紫茜抗癌膠囊長期連續灌胃未見明顯毒性反應，長期服用安全。

紫茜抗癌膠囊；長期毒性；大鼠

紫茜抗癌膠囊由紫草、茜草、莪術、香菇四味中藥組成，是依據中藥組方原則，并充分考慮各中藥抗癌有效成分及腫瘤細胞復制多環節作用機制進行組方的新復方制劑。其主要成分為紫草素等萘醌類化合物和茜草素等蒽醌類化合物[1-5]。紫茜抗癌膠囊已經進行了最佳提取工藝、制劑質量標準的制定及處方藥效學等實驗，同時完成了一般藥理學實驗和急性毒性實驗[6]。通過急性毒性實驗測定實驗小鼠灌胃給藥的半數致死量為23.54g/kg，相當于臨床劑量的343.40倍。在此基礎上為了確保其臨床用藥的安全性，為臨床提供客觀實驗數據，我們設計和開展了紫茜抗癌膠囊的長期毒性實驗[7-8]，現報道如下。

1 材料與方法

1.1 藥物

紫茜抗癌膠囊由本研究室自制，批號：070601，規格為0.39g/粒,保用時加蒸餾水及吐溫-80，研磨配制成不同藥物濃度供實驗用。

1.2 動物

健康Wistar大鼠80只，6周齡，體重 (70±10)g，雌雄各半，由延邊大學醫學部動物實驗室提供。

1.3 試劑與儀器

生化試劑尿素氮(BUN)試劑盒、白蛋白(ALB)、總蛋白(TP)、膽固醇(CHO)、血糖(GLU)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT),天門冬氨酸氨基轉移酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)、肌肝(CREA)、總膽紅素(TBIL )，以上試劑盒均由上海豐匯醫學科技有限公司生產。日本日立公司7600-010型全自動生物化學檢測儀、瑞典LKB208型超薄切片機及日本JEM-1200EX型透射電子顯微鏡。

1.4 實驗方法

采用雌雄分別隨機分組法將80只大白鼠分為四組(雌雄各10只)，其中三個組為給藥組，一個組為空白對照組。給藥劑量：高劑量定為3.43g/kg(相當于臨床劑量的50倍),中劑量定為 2.05g/kg(相當于臨床劑量的30倍),低劑量定為 0.686g/kg(相當于臨床劑量的10倍)，空白組給等體積的蒸餾水。每日定時上午8：30—9：30灌胃給藥1次，連續給藥90天，給藥體積相同，均為每100g體重給藥液1mL。實驗期間，每周稱體重1次，并根據體重變化調整給藥量。實驗前先按性別分籠在實驗室群養觀察1周，實驗開始后，觀察記錄動物的攝食、活動、毛發、糞便情況。實驗結束后，解剖動物以乙醚淺麻醉，自眼眶后靜脈叢穿刺取血檢測各種生化學指標，AST(天門冬氨酸氨基轉換酶)、ALT(丙氨酸氨基轉換酶)、ALP(堿性磷酸酶)、TP(總蛋白)、T-BIL(總膽紅素)、T-CHO(總膽固醇)、CRE(肌酐)、GLU(血糖)、GOT(谷氨酸草酰乙酸轉氨酶)、GPT(谷氨酸丙酮酸轉氨酶)值。各種動物分別取心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、甲狀腺、睪丸、卵巢、子宮、腦、前列腺，稱重實質性器官并按動物體重換算成臟器系數。取心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、甲狀腺、睪丸、前列腺、卵巢、子宮以10%甲醛固定，石蠟包埋，HE染色光學顯微鏡檢查病變。數據進行統計學t檢驗。

2 結果

2.1 一般狀況

在給藥期間，供試品各劑量組動物外觀正常、活潑、被毛光澤，眼、鼻、耳、口、生殖器無異常分泌物，大小便顏色形狀均正常，各給藥組動物也未見有系統毒性癥狀出現，實驗進行第39天時發現有2只死亡,組別為雄性中劑量,發現時,兩只大鼠都有大面積傷痕,臟器并沒有因為藥物引起病變,確定為相互撕咬所致。

2.2 體重及攝食量

在大鼠給藥期間，每周稱重1次。結果：各劑量組動物體重正常增長，攝食量變化與正常對照組比較，無顯著性差異(P>0.05)。見表1、表2。

表1 對雄性大鼠體重增長的影響 ±s)

表2 對雌性大鼠體重增長的影響 ±s)

2.3 血液生化學檢查

與對照組相比，所有雌雄大鼠血液學指標及血液生化學指標均無顯著性差異(P>0.05)。詳情見表3、表4。

2.4 臟器重量及臟器系數

給藥3個月后，與對照組對比，臟器系數同期各組間未見明顯差異(P>0.05)。詳情見表5、表6。

表3 給藥90天雄性大鼠血液生化學指標 ±s)

表4 給藥90天雌性大鼠血液生化學指標

表5 給藥90天雄性大鼠臟器系數

組別心肝脾肺腎對照組0.34±0.043.5±0.510.19±0.270.69±0.0950.37±0.030低劑量0.60±0.904.4±0.640.22±0.0371.1±0.160.41±0.074中劑量0.34±0.0623.7±0.290.29±0.130.68±0.150.39±0.049高劑量0.31±0.0264.0±0.410.19±0.0370.56±0.0990.37±0.024組別腦腎上腺甲狀腺胸腺睪丸對照組0.50±0.0960.013±0.0150.21±0.170.14±0.0410.46±0.064低劑量0.52±0.100.022±0.0240.065±0.0180.10±0.0240.38±0.015中劑量0.51±0.0880.032±0.0360.051±0.0180.10±0.0370.45±0.053高劑量0.48±0.0950.020±0.0390.065±0.0160.17±0.0370.026±0.044

表6 給藥90天雌性大鼠臟器系數

組別心肝脾肺腎對照組0.29±0.103.9±0.540.25±0.0360.63±0.0590.40±0.054低劑量0.36±0.0444.1±0.370.27±0.0270.72±0.0930.87±0.014中劑量0.35±0.0264.3±0.360.23±0.0830.67±0.0750.40±0.034高劑量0.36±0.0364.6±0.330.26±0.0340.67±0.0850.43±0.040組別腦腎上腺甲狀腺胸腺卵巢對照組0.58±0.190.042±0.0170.081±0.0140.46±0.580.032±0.013低劑量0.67±0.0970.017±0.0320.082±0.0180.14±0.0310.029±0.013中劑量0.64±0.0900.019±0.0290.11±0.200.12±0.0190.029±0.017高劑量0.65±0.0700.020±0.0250.065±0.0160.17±0.0370.026±0.012

2.5 病理組織學觀察

各劑量組動物解剖后見胸腔、腹腔漿膜光滑，未見出血點及積液，主要臟器位置正常，肉眼觀察未見明顯病變，開顱后腦膜及腦未見異常。病理組織學檢查各劑量組與對照組肝臟與正常組相比肝細胞胞漿內有較多的空泡，肝小葉內未見炎細胞浸潤，匯管區血管擴張充血并少量炎性細胞浸潤。肺臟與正常組相比部分肺泡壁被少量淋巴細胞浸潤而輕度增厚。腎臟與正常組相比腎間質血管輕度擴張充血。進一步對中低劑量組相關臟器進行檢查，未見任何異常。

3 討論

本實驗研究結果表明，實驗期間各劑量組動物狀態良好，生長正常，未出現中毒癥狀及死亡;體重、尿液檢查、血液檢查，各劑量組與對照組相比均無明顯差異，高劑量組肝臟略微出現少量炎性細胞浸潤，腎間質血管輕度擴張充血，其它各劑量組各項指標與對照組比較均無明顯差異，但是在病理組織學檢查肝、腎等臟器未見相關病變，故認為無明顯的毒理學意義。各劑量組動物解剖后胸腔、腹腔漿膜光滑，未見出血點及積液甲心、肝、脾、肺、腎等主要臟器位置正常，肉眼觀察未見明顯病變，開顱后腦膜及腦未見異常，病理組織學檢查除肝、肺間質可見輕度炎細胞浸潤外，其余臟器未見異常，且與對照組比較均無顯著性差別，所以并不具有毒理學意義。綜上所述，紫茜抗癌膠囊在相當于臨床人用劑量的50倍(3.43g/kg)大鼠長期灌胃給藥，未見明顯毒性反應，安全范圍廣。

[1] 劉梅青.不同劑量紫草醇提取物對表皮細胞過度增殖的實驗研究[J].臨床醫藥實踐, 2003,12(7):485-487.

[2] 樸成哲，孫東植，宋京郁. 茜草提取物對胃癌MGC-803細胞株的誘導凋亡及抗增殖作用[J].延邊大學醫學學報,2008,31(4):261-264.

[3] 張玉紅，張世高，周才新,等. 中藥茜草注射液的抗腫瘤作用及其毒性實驗[J].中國中醫藥雜志，2004,2(11):446-447.

[4] 吳萬垠，鄧嶸，區勇全. 經肝動脈灌注莪術油微球對大鼠移植性肝癌的治療作用[J].中華肝臟病雜志，2000,8(1):24-26.

[5] 李志平.微創置管引流及腔內注射香菇多糖治療癌性胸水的療效分析[J].河南大學學報，2003,22(1):24-26.

[6] 王增濤，金光洙.紫茜抗癌膠囊的急性毒性實驗研究[J].時珍國醫國藥,2009,20(9)：2230-2231.

[7] 呂秋軍.新藥藥理學研究方法 [M]. 第1版.北京：化學工業出版社，2007：367-379.

[8] 袁伯俊，廖明陽，李波. 藥物毒理學實驗方法與技術[M].第1版.北京：化學工業出版社，2007:200-210.

(責任編輯：宋勇剛)

Long-term Toxicity of ZIQIAN Anti-cancer Capsule in Rats

An Meishun1, Wang Zengtao2, Jin Guangzhu2*

(1.Traditional Hospital,Yanjin 133000,China;2.College of Pharmacy,Yanbian University,Yanji 133002,China)

Objective:To evalute the long-term toxicity of ZIQIAN anti-cancer capsule in rats. Methods:80 Wistar rats were randomly divided into one of four diet groups, each group was orally supplemented either normal diets or diets with ZIQIAN anti-cancer capsule at a dose of 3.43, 2.05,0.686g/kg (equivalent to the clinical dose of times 50,30,10) for up to 90d, respectively. The toxicity of ZIQIAN anti-cancer capsule to rats was assessed based on the status changes of growth rate,appetite,bloodhemo and bichemical outcomes, organ weight index and histopathologic profile in post-dosing.Results:ZIQIAN anti-cancer capsule high-dose group, liver slightly in a small number of inflammatory cell infiltration, renal vascular mild expansion of congestion. No significant differences of other physiological parameters were seen in the rats treeted with 2.05 and 0.686g/kg.Conclusion:Highest dosing of ZIQIAN anti-cancer capsule could produce slightly toxicities in rats, and receving a dose below 2.05 g/kg is relatively safe.

ZIQIAN Anti-cancer Capsule; Long-term Toxicity ; Rat

2014-05-18

吉林省科技廳重點項目(20050909)

安美順(1966-)，女， 吉林省延吉市傳統醫院主治醫師，研究方向為中醫臨床和新藥研究。

金光洙(1954-)，男，朝鮮族，博士，延邊大學教授，研究方向為抗腫瘤藥物。

R285

A

1673-2197(2014)17-0003-03