改變胱抑素C實驗參數對檢驗結果的影響分析
2014-04-23 11:42:50張雙元
中國現代醫生 2014年10期
張雙元
[摘要] 目的 檢驗通過適當改變胱抑素C試驗參數對試劑盒實驗結果的影響。方法 收集覆蓋試劑盒線性范圍的標本在改變參數前后分別檢驗一次，并對前后兩次結果分別進行配對t檢驗和線性相關與回歸分析，對常數a與斜率b進行單樣本均數t檢驗。結果 實驗前后結果經配對t檢驗，t=1.81，P >0.05，無統計學意義，線性回歸方程為Y=0.9981X-0.0364，r=0.9982，對常數a斜率b進行單樣本均數t檢驗結果為ta=0.70633< t（0.05/2，22）=2.074，P>0.05無統計學意義；tb=0.151802< t（0.05/2，22）=2.074，P>0.05無統計學意義。結論 胱抑素C適當改變試驗參數前后對檢驗結果無影響，不影響試劑盒線性。
[關鍵詞] 胱抑素C；改變試驗參數；實驗結果
[中圖分類號] R446.1 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2014）10-0054-02
胱抑素C 是一種小分子蛋白[1]，也被稱為γ-微量蛋白及γ-后球蛋白，廣泛存在于各種組織的有核細胞和體液中，是一種低分子量、堿性非糖化蛋白質，其血中濃度由腎小球濾過決定，而不依賴任何外來因素，如性別、年齡、飲食的影響，是一種反映腎小球濾過率變化的理想同源性標志物[2，3]。胱抑素C 能夠自由通過腎小球， 并且由腎小管重吸收后降解，生理情況下幾乎沒有影響胱抑素C穩定的因素。胱抑素具有產生速率恒定、只能通過腎小球濾過排泄，在腎小管內完全被重吸收降解[4]，這一特點使得血清胱抑素 C成為引人注目的腎臟腎小球濾過率的替代標志物[5，6]，是衡量早期腎功能損害的重要指標[7-10]。最近本科室也開展了此項目，在實驗過程中發現R1試劑消耗多R2試劑消耗少，隨著累積檢驗次數的增加，這種現象更加明顯，造成試劑大量浪費，本研究就是通過改變試劑實驗參數使試劑R1與試劑R2消耗量相互匹配，并對改變參數前后的標本檢驗結果進行統計分析。
1材料與方法
1.1檢測系統
奧林巴斯AU640全自動生化分析儀，某膠乳增強免疫比濁胱抑素C試劑盒。原試劑參數，R1 250 μL，R2 50 μL、吐水10 μL；改為R1 220 μL，R2 50 μL、吐水10 μL。實驗所需所有試劑均在有效期內，在改變試驗參數前后分別定標，質控在控。
1.2 樣本收集與處理
收集2013年5月22日～6月18日在試劑線性范圍內低、中、高濃度標本血清24例放置于超低溫冰箱中儲存備用，實驗時取出室溫復溶，然后對24例標本分別在改變試劑參數前后各測試一次。
1.3 實驗方法
通過EXCEL2003首先對實驗數據進行配對t檢驗；再以改變參數前數據為橫坐標，改變參數后數據為縱坐標，繪制散點圖，并得到回歸方程與回歸系數，通過統計學方法驗證回歸曲線與Y=X的關系。
1.4 統計學方法
計量資料以（x±s）表示，對實驗數據采用EXCEL2003軟件進行統計學分析，統計方法采用配對t檢驗和直線相關線性與回歸分析，單樣本均數t檢驗，P <0.05表示有統計學意義。
2結果
改變參數前實驗數據（3.66±2.01），改變參數后實驗數據（3.60±1.99）。改變參數前后實驗結果經配對t檢驗比較，t=1.81，P=0.08 >0.05，差異無統計學意義。線性相關與回歸分析：實驗前后結果呈正相關R2=0.9966，r=0.9982接近1，回歸方程Y=0.9981X-0.0364。如圖1。對-0.0364（a）與0，0.9981（b）與1進行單樣本均數t檢驗，ta=0.70633
圖1 改變參數前實驗數據
3討論
首先在EXCEL2003工作表中對改變參數前后數據進行配對t檢驗，將實驗前后數據分左右各列一列，然后選擇函數TTEST，分別將兩列數據代入，參數選為雙尾配對t檢驗得到結果為P=0.08，因此實驗前后結果沒有統計學意義，利用TINV函數得到t值，分別將概率值（P=0.08）、自由度（d=23）輸入得到結果t=1.81。然后進行線性相關與回歸分析，選中兩列數據點擊插入選擇圖表選擇XY散點圖點擊完成，散點圖就會出現在工作表中，選中散點圖在點擊圖表選擇添加趨勢線，選擇線性，點擊選項選擇顯示公式、顯示R平方值，點擊確定，就會出現圖一結果，然后對Y= 0.9981X-0.0364中的系數（b）與常數（a）進行單樣本均數t檢驗。
本研究在改變試驗參數過程中減少了R1 試劑用量，從而使總反應體積變小，使抗體濃度相對增加可能出現免疫反應中的“前帶現象”，主要原因可能是抗原抗體比例不合適，而產生抑制反應現象，使反應信號弱化，從而使實驗結果出現嚴重誤差。因此通過收集高、中、低濃度的胱抑素C標本，在改變實驗參數前后分別檢驗一次，并對實驗結果進行配對t檢驗，t=1.81，P>0.05無統計學意義；以及直線相關與回歸分析，通過對回歸方程Y=0.9981X-0.0364與Y=X比較。分別對a與0、b與1進行單樣本均數t檢驗，ta=0.70633
通過對本實驗的數據研究表明適當改變胱抑素C的試驗參數可以解決試劑不匹配的問題，并對實驗結果無明顯影響。原因有：①本試劑的R1為甘氨酸緩沖液主要是為R2混合后提供抗原抗體反映合適的酸堿環境，減少R1用量對對反應體系影響較小。②本次實驗中的胱抑素C測定試劑盒使用的是膠乳增強免疫透射比濁法（PETIA），是以多克隆抗體為基礎的改良免疫比濁分析法，利用基因工程方法將抗體與膠乳顆粒結合，當抗原抗體相結合時便形成了抗原-抗體-膠乳顆粒復合物，增強了反應吸光度，反應液在一定波長處比濁，與同樣處理的標準液比較，計算標本中抗原的含量，利用生化分析儀進行比濁測定，整個分析過程只需幾分鐘，該方法與傳統免疫比濁法比較其靈敏度更高。重要的是此種方法與傳統比濁法相比可能使抗原抗體反應的“等價帶”變寬，因此有更高的靈敏度和更寬的線性范圍，本次試驗改變了反應的總體積并沒有對實驗前后的檢驗結果產生影響，也充分體現了膠乳增強免疫比濁類試劑盒對胱抑素C測試的優異性。因此在日常工作中對R1、R2試劑不匹配的項目經過論證適當改變試驗參數既產生一些經濟效益也避免了浪費，值得我們注意。
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（收稿日期：2013-11-04）endprint
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