安神補腦液制備工藝優化研究

周穎

[摘要] 目的 為了優化安神補腦復方制劑制備工藝，提高藥效。 方法 正交實驗法確定最佳醇沉工藝。結果 藥液相對密度為1.20，含醇量為60%，靜置時間24 h的醇沉效果最佳。結論 按優化工藝制得的制劑2，3，5，4-四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷、淫羊藿苷含量和出膏率高，且質量穩定。

[關鍵詞] 安神補腦液；正交設計；淫羊藿苷；制備工藝

[中圖分類號] R461 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2014）10-0048-02

安神補腦液由鹿茸、制何首烏、淫羊藿、干姜、甘草、大棗、維生素B1等7味藥物制成，具有生精補髓、益氣養血、強腦安神等功效。適用于腎精不足、氣血兩虧所致的頭暈、乏力、健忘、失眠；神經衰弱癥見上述證候者。是臨床上常用的成方制劑。雖然《中國藥典》2010版一部中收載了該制劑，但“制法”項下僅記載了將“濾液濃縮至適量，加3倍量乙醇，靜置，濾過，濾液備用”[1]， 對于醇沉工藝并沒有具體的方法，為細化復方工藝，提高復方的藥效和生物利用度，現采用正交法對該復方的醇沉工藝進行考察及優化。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100型液相色譜系統，包括：高壓二元泵（G1311A），可變波長檢測器（G1313A），Agilent 1100 series色譜工作站（美國安捷倫科技有限公司）。

1.2 對照品

淫羊藿苷對照品購自中檢所，供含量測定用，純度>98%。

1.3 試劑

乙腈、甲醇均為色譜純，乙醇為分析純，購自天津科密歐化學試劑有限公司。

1.4 藥材

制何首烏、淫羊藿、干姜、甘草和大棗等藥材購自沈陽市藥材市場，經鑒定均為正品。

2 方法與結果

2.1醇沉前提取液的制備

由于藥典中未記載該制劑的處方量，根據部頒標準的記載[2]，按處方配比取處方中的制何首烏62.5 g，淫羊藿50 g，干姜 12.5 g，甘草 6.25 g，大棗 12.5 g，精密測定。加水煎煮3次，第1次2 h，第2、3次各1 h，合并煎液，濾過，濾液平均分成三份，分別減壓濃縮至相對密度為1.15、1.20、1.25時備用。

2.2供試品溶液制備及色譜條件

通過組方分析，該復方醇沉部分的主要藥味為何首烏和淫羊藿，因此，主要考察指標為出膏率、2，3，5，4-四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷（以下簡稱二苯乙烯苷）、淫羊藿苷。采用HPLC法對該復方的上述兩個成分同時進行含量測定。

2.2.1供試品溶液的制備 將醇沉后的溶液濾過，加水定容至1000 mL搖勻，精密吸取1～10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.2.2色譜條件 迪馬DiamonsilTM C18色譜柱（4.5 mm×250 mm，5 μm）；乙腈-水為流動相， 梯度洗脫（0～10 min，乙腈體積分數為30%～50%；10～11 min，乙腈體積分數為50%～80%；11～15 min，乙腈體積分數為80%～100%；15～20 min，乙腈體積分數為100%）；流速為1.0 mL/min；檢測波長為350 nm；柱溫為30℃；進樣量25 μL[3]。

2.3醇沉工藝的優化

采用L9（34）正交實驗對醇沉條件中的密度、醇濃度及靜置時間進行3種水平的考察，確定最佳醇沉方法。其影響因素水平見表1。

表1 醇沉工藝相關因素水平表

按L9（34）正交表安排進行試驗。取上述不同相對密度的三份樣品分別按正交表安排試驗。以出膏率、淫羊藿苷、二苯乙烯苷三個指標進行考察，加權綜合評分，其中總分100分，出膏率占20分，淫羊藿苷占40分、二苯乙烯苷占40分。正交分析與加權評分結果見表2、表3。

表2 醇沉條件考察實驗結果

表3 方差分析表

注：F0.05（2，2）=19.00； F0.1（2，2）=9.00

直觀分析和方差分析結果表明：三個考察因素中靜止時間對結果影響最為顯著，為主要影響因素；藥液相對密度和含醇量對結果影響較小，為次要因素。最佳提取條件為A2B1C3，即藥液相對密度為1.20，含醇量為60%，靜止時間24 h。

2.4驗證試驗

稱取何首烏（制）、淫羊藿、干姜、甘草、大棗，共3份，分別加水煎煮3次，第1次2個小時，第2、3次各1個小時，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.20，加入乙醇使含醇量達到60%，靜止放置24 h后分別測定出膏率、二苯乙烯苷、淫羊藿苷的量，見表4。

表4 驗證實驗結果

3討論

原提取工藝是將水提液濃縮至流浸膏，而流浸膏要求濃縮到每1 mL相當于原藥材1 g，這對工業生產時質量監控極其不方便，因此，按流浸膏的比例濃縮后檢測密度為1.20，因此選擇將水提液減壓濃縮至相對密度為1.15、1.20、1.25備正交實驗使用。檢測指標由體積改為密度，為工業生產質量監控提供方便。

正交實驗結果的確定方法是無顯著性差異因素選擇最節能水平，有顯著性差異因素選擇結果最高的因素水平。由于正交結果表明藥液密度和含醇量兩個因素無顯著性差異，因此按節能原則選擇水平：藥液密度選擇1.20，因為其比1.15加甲醇量相對較少，且比1.25需要耗費的能源少；選擇60%含醇量是因為其加醇量相對較少，節省資源。另外，靜置時間因素由于其三個水平的結果有顯著性差異，因此選擇正交實驗結果最好的水平，即24 h為最佳靜置時間。

根據傳統的復方制備工藝，本實驗僅考察優化何首烏（制）、淫羊藿、干姜、甘草、大棗的提取后的醇沉工藝，未對貴重藥材鹿茸的制備工藝進行優化。優化后的醇沉工藝可以為該復方今后的制劑工藝研究提供依據。

[參考文獻]

[1] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典2010版一部[S]. 北京：中國醫藥科技出版社，2010：715-716.

[2] 中華人民共和國衛生部藥典委員會. 中華人民共和國衛生部藥品標準中藥成方制劑第三冊[S]. 1991：73-78.

[3] 王偉，許祺，杜秀芳，等. 高效液相色譜法同時測定安神補腦液中淫羊藿苷和二苯乙烯苷的含量[J]. 河北科技大學學報，2010，31（5）：403-405.endprint

[摘要] 目的 為了優化安神補腦復方制劑制備工藝，提高藥效。 方法 正交實驗法確定最佳醇沉工藝。結果 藥液相對密度為1.20，含醇量為60%，靜置時間24 h的醇沉效果最佳。結論 按優化工藝制得的制劑2，3，5，4-四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷、淫羊藿苷含量和出膏率高，且質量穩定。

[關鍵詞] 安神補腦液；正交設計；淫羊藿苷；制備工藝

[中圖分類號] R461 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2014）10-0048-02

安神補腦液由鹿茸、制何首烏、淫羊藿、干姜、甘草、大棗、維生素B1等7味藥物制成，具有生精補髓、益氣養血、強腦安神等功效。適用于腎精不足、氣血兩虧所致的頭暈、乏力、健忘、失眠；神經衰弱癥見上述證候者。是臨床上常用的成方制劑。雖然《中國藥典》2010版一部中收載了該制劑，但“制法”項下僅記載了將“濾液濃縮至適量，加3倍量乙醇，靜置，濾過，濾液備用”[1]， 對于醇沉工藝并沒有具體的方法，為細化復方工藝，提高復方的藥效和生物利用度，現采用正交法對該復方的醇沉工藝進行考察及優化。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100型液相色譜系統，包括：高壓二元泵（G1311A），可變波長檢測器（G1313A），Agilent 1100 series色譜工作站（美國安捷倫科技有限公司）。

1.2 對照品

淫羊藿苷對照品購自中檢所，供含量測定用，純度>98%。

1.3 試劑

乙腈、甲醇均為色譜純，乙醇為分析純，購自天津科密歐化學試劑有限公司。

1.4 藥材

制何首烏、淫羊藿、干姜、甘草和大棗等藥材購自沈陽市藥材市場，經鑒定均為正品。

2 方法與結果

2.1醇沉前提取液的制備

由于藥典中未記載該制劑的處方量，根據部頒標準的記載[2]，按處方配比取處方中的制何首烏62.5 g，淫羊藿50 g，干姜 12.5 g，甘草 6.25 g，大棗 12.5 g，精密測定。加水煎煮3次，第1次2 h，第2、3次各1 h，合并煎液，濾過，濾液平均分成三份，分別減壓濃縮至相對密度為1.15、1.20、1.25時備用。

2.2供試品溶液制備及色譜條件

通過組方分析，該復方醇沉部分的主要藥味為何首烏和淫羊藿，因此，主要考察指標為出膏率、2，3，5，4-四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷（以下簡稱二苯乙烯苷）、淫羊藿苷。采用HPLC法對該復方的上述兩個成分同時進行含量測定。

2.2.1供試品溶液的制備 將醇沉后的溶液濾過，加水定容至1000 mL搖勻，精密吸取1～10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.2.2色譜條件 迪馬DiamonsilTM C18色譜柱（4.5 mm×250 mm，5 μm）；乙腈-水為流動相， 梯度洗脫（0～10 min，乙腈體積分數為30%～50%；10～11 min，乙腈體積分數為50%～80%；11～15 min，乙腈體積分數為80%～100%；15～20 min，乙腈體積分數為100%）；流速為1.0 mL/min；檢測波長為350 nm；柱溫為30℃；進樣量25 μL[3]。

2.3醇沉工藝的優化

采用L9（34）正交實驗對醇沉條件中的密度、醇濃度及靜置時間進行3種水平的考察，確定最佳醇沉方法。其影響因素水平見表1。

表1 醇沉工藝相關因素水平表

按L9（34）正交表安排進行試驗。取上述不同相對密度的三份樣品分別按正交表安排試驗。以出膏率、淫羊藿苷、二苯乙烯苷三個指標進行考察，加權綜合評分，其中總分100分，出膏率占20分，淫羊藿苷占40分、二苯乙烯苷占40分。正交分析與加權評分結果見表2、表3。

表2 醇沉條件考察實驗結果

表3 方差分析表

注：F0.05（2，2）=19.00； F0.1（2，2）=9.00

直觀分析和方差分析結果表明：三個考察因素中靜止時間對結果影響最為顯著，為主要影響因素；藥液相對密度和含醇量對結果影響較小，為次要因素。最佳提取條件為A2B1C3，即藥液相對密度為1.20，含醇量為60%，靜止時間24 h。

2.4驗證試驗

稱取何首烏（制）、淫羊藿、干姜、甘草、大棗，共3份，分別加水煎煮3次，第1次2個小時，第2、3次各1個小時，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.20，加入乙醇使含醇量達到60%，靜止放置24 h后分別測定出膏率、二苯乙烯苷、淫羊藿苷的量，見表4。

表4 驗證實驗結果

3討論

原提取工藝是將水提液濃縮至流浸膏，而流浸膏要求濃縮到每1 mL相當于原藥材1 g，這對工業生產時質量監控極其不方便，因此，按流浸膏的比例濃縮后檢測密度為1.20，因此選擇將水提液減壓濃縮至相對密度為1.15、1.20、1.25備正交實驗使用。檢測指標由體積改為密度，為工業生產質量監控提供方便。

正交實驗結果的確定方法是無顯著性差異因素選擇最節能水平，有顯著性差異因素選擇結果最高的因素水平。由于正交結果表明藥液密度和含醇量兩個因素無顯著性差異，因此按節能原則選擇水平：藥液密度選擇1.20，因為其比1.15加甲醇量相對較少，且比1.25需要耗費的能源少；選擇60%含醇量是因為其加醇量相對較少，節省資源。另外，靜置時間因素由于其三個水平的結果有顯著性差異，因此選擇正交實驗結果最好的水平，即24 h為最佳靜置時間。

根據傳統的復方制備工藝，本實驗僅考察優化何首烏（制）、淫羊藿、干姜、甘草、大棗的提取后的醇沉工藝，未對貴重藥材鹿茸的制備工藝進行優化。優化后的醇沉工藝可以為該復方今后的制劑工藝研究提供依據。

[參考文獻]

[1] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典2010版一部[S]. 北京：中國醫藥科技出版社，2010：715-716.

[2] 中華人民共和國衛生部藥典委員會. 中華人民共和國衛生部藥品標準中藥成方制劑第三冊[S]. 1991：73-78.

[3] 王偉，許祺，杜秀芳，等. 高效液相色譜法同時測定安神補腦液中淫羊藿苷和二苯乙烯苷的含量[J]. 河北科技大學學報，2010，31（5）：403-405.endprint

[摘要] 目的 為了優化安神補腦復方制劑制備工藝，提高藥效。 方法 正交實驗法確定最佳醇沉工藝。結果 藥液相對密度為1.20，含醇量為60%，靜置時間24 h的醇沉效果最佳。結論 按優化工藝制得的制劑2，3，5，4-四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷、淫羊藿苷含量和出膏率高，且質量穩定。

[關鍵詞] 安神補腦液；正交設計；淫羊藿苷；制備工藝

[中圖分類號] R461 [文獻標識碼] B [文章編號] 1673-9701（2014）10-0048-02

安神補腦液由鹿茸、制何首烏、淫羊藿、干姜、甘草、大棗、維生素B1等7味藥物制成，具有生精補髓、益氣養血、強腦安神等功效。適用于腎精不足、氣血兩虧所致的頭暈、乏力、健忘、失眠；神經衰弱癥見上述證候者。是臨床上常用的成方制劑。雖然《中國藥典》2010版一部中收載了該制劑，但“制法”項下僅記載了將“濾液濃縮至適量，加3倍量乙醇，靜置，濾過，濾液備用”[1]， 對于醇沉工藝并沒有具體的方法，為細化復方工藝，提高復方的藥效和生物利用度，現采用正交法對該復方的醇沉工藝進行考察及優化。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

Agilent 1100型液相色譜系統，包括：高壓二元泵（G1311A），可變波長檢測器（G1313A），Agilent 1100 series色譜工作站（美國安捷倫科技有限公司）。

1.2 對照品

淫羊藿苷對照品購自中檢所，供含量測定用，純度>98%。

1.3 試劑

乙腈、甲醇均為色譜純，乙醇為分析純，購自天津科密歐化學試劑有限公司。

1.4 藥材

制何首烏、淫羊藿、干姜、甘草和大棗等藥材購自沈陽市藥材市場，經鑒定均為正品。

2 方法與結果

2.1醇沉前提取液的制備

由于藥典中未記載該制劑的處方量，根據部頒標準的記載[2]，按處方配比取處方中的制何首烏62.5 g，淫羊藿50 g，干姜 12.5 g，甘草 6.25 g，大棗 12.5 g，精密測定。加水煎煮3次，第1次2 h，第2、3次各1 h，合并煎液，濾過，濾液平均分成三份，分別減壓濃縮至相對密度為1.15、1.20、1.25時備用。

2.2供試品溶液制備及色譜條件

通過組方分析，該復方醇沉部分的主要藥味為何首烏和淫羊藿，因此，主要考察指標為出膏率、2，3，5，4-四羥基二苯乙烯-2-0-β-D-葡萄糖苷（以下簡稱二苯乙烯苷）、淫羊藿苷。采用HPLC法對該復方的上述兩個成分同時進行含量測定。

2.2.1供試品溶液的制備 將醇沉后的溶液濾過，加水定容至1000 mL搖勻，精密吸取1～10 mL量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，即得。

2.2.2色譜條件 迪馬DiamonsilTM C18色譜柱（4.5 mm×250 mm，5 μm）；乙腈-水為流動相， 梯度洗脫（0～10 min，乙腈體積分數為30%～50%；10～11 min，乙腈體積分數為50%～80%；11～15 min，乙腈體積分數為80%～100%；15～20 min，乙腈體積分數為100%）；流速為1.0 mL/min；檢測波長為350 nm；柱溫為30℃；進樣量25 μL[3]。

2.3醇沉工藝的優化

采用L9（34）正交實驗對醇沉條件中的密度、醇濃度及靜置時間進行3種水平的考察，確定最佳醇沉方法。其影響因素水平見表1。

表1 醇沉工藝相關因素水平表

按L9（34）正交表安排進行試驗。取上述不同相對密度的三份樣品分別按正交表安排試驗。以出膏率、淫羊藿苷、二苯乙烯苷三個指標進行考察，加權綜合評分，其中總分100分，出膏率占20分，淫羊藿苷占40分、二苯乙烯苷占40分。正交分析與加權評分結果見表2、表3。

表2 醇沉條件考察實驗結果

表3 方差分析表

注：F0.05（2，2）=19.00； F0.1（2，2）=9.00

直觀分析和方差分析結果表明：三個考察因素中靜止時間對結果影響最為顯著，為主要影響因素；藥液相對密度和含醇量對結果影響較小，為次要因素。最佳提取條件為A2B1C3，即藥液相對密度為1.20，含醇量為60%，靜止時間24 h。

2.4驗證試驗

稱取何首烏（制）、淫羊藿、干姜、甘草、大棗，共3份，分別加水煎煮3次，第1次2個小時，第2、3次各1個小時，合并煎液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.20，加入乙醇使含醇量達到60%，靜止放置24 h后分別測定出膏率、二苯乙烯苷、淫羊藿苷的量，見表4。

表4 驗證實驗結果

3討論

原提取工藝是將水提液濃縮至流浸膏，而流浸膏要求濃縮到每1 mL相當于原藥材1 g，這對工業生產時質量監控極其不方便，因此，按流浸膏的比例濃縮后檢測密度為1.20，因此選擇將水提液減壓濃縮至相對密度為1.15、1.20、1.25備正交實驗使用。檢測指標由體積改為密度，為工業生產質量監控提供方便。

正交實驗結果的確定方法是無顯著性差異因素選擇最節能水平，有顯著性差異因素選擇結果最高的因素水平。由于正交結果表明藥液密度和含醇量兩個因素無顯著性差異，因此按節能原則選擇水平：藥液密度選擇1.20，因為其比1.15加甲醇量相對較少，且比1.25需要耗費的能源少；選擇60%含醇量是因為其加醇量相對較少，節省資源。另外，靜置時間因素由于其三個水平的結果有顯著性差異，因此選擇正交實驗結果最好的水平，即24 h為最佳靜置時間。

根據傳統的復方制備工藝，本實驗僅考察優化何首烏（制）、淫羊藿、干姜、甘草、大棗的提取后的醇沉工藝，未對貴重藥材鹿茸的制備工藝進行優化。優化后的醇沉工藝可以為該復方今后的制劑工藝研究提供依據。

[參考文獻]

[1] 國家藥典委員會. 中華人民共和國藥典2010版一部[S]. 北京：中國醫藥科技出版社，2010：715-716.

[2] 中華人民共和國衛生部藥典委員會. 中華人民共和國衛生部藥品標準中藥成方制劑第三冊[S]. 1991：73-78.

[3] 王偉，許祺，杜秀芳，等. 高效液相色譜法同時測定安神補腦液中淫羊藿苷和二苯乙烯苷的含量[J]. 河北科技大學學報，2010，31（5）：403-405.endprint