Ⅲ型前列腺炎治療前后前列腺液中B7-H3、IFN-γ、IL-10的表達(dá)及臨床意義*

鐘景琦屈平保錢海寧程曙杰宋愛莉

1. 山東中醫(yī)藥大學(xué)（濟(jì)南 250355）; 2. 上海市長寧區(qū)中心醫(yī)院

·臨床經(jīng)驗·

Ⅲ型前列腺炎治療前后前列腺液中B7-H3、IFN-γ、IL-10的表達(dá)及臨床意義*

鐘景琦1,2屈平保2錢海寧2程曙杰2宋愛莉1*

1. 山東中醫(yī)藥大學(xué)（濟(jì)南 250355）; 2. 上海市長寧區(qū)中心醫(yī)院

Ⅲ型前列腺炎（Chronic non-bacterial prostatitis/ chronic pelvic pain syndrome CP/CPPS）主要表現(xiàn)為長期、反復(fù)的骨盆區(qū)域疼痛或不適，可伴有不同程度的排尿癥狀，嚴(yán)重影響患者的生活質(zhì)量，占前列腺炎疾病的90%左右[1]。傳統(tǒng)的分類方法在治療上并沒有顯示出明顯的指導(dǎo)作用，近年來許多學(xué)者認(rèn)為自身免疫因素在慢性前列腺炎中占有重要地位，但在眾多的檢測結(jié)果中，各家對免疫細(xì)胞因子的表述不一致，甚至存在互相矛盾的現(xiàn)象，因此，尋找更敏感的檢測因子變得越發(fā)重要。近年來共刺激分子B7-H3的研究逐漸深入，其在子宮、胰腺、前列腺組織中含量豐富，在不同疾病的免疫過程中起到共刺激或共抑制的作用。Wei等[2]研究認(rèn)為B7-H3在前列腺炎的發(fā)病過程中有明顯變化，但對其相關(guān)的下游細(xì)胞因子的調(diào)節(jié)沒有報道。因此本文旨在研究Ⅲ型前列腺炎治療前后前列腺液中B7-H3的表達(dá)的基礎(chǔ)上，進(jìn)一步探索下游免疫反應(yīng)的變化情況。

資料與方法

一、臨床資料

選取2013年1月至2013年9月在泌尿外科門診就診的符合Ⅲ型前列腺炎診斷標(biāo)準(zhǔn)的患者56例。同時選取15例來院做婚前查體的健康男性作為對照組。

1. 納入標(biāo)準(zhǔn)：按照參考文獻(xiàn)[1]制定納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡在18～50歲，平均34.7歲，病程3月至5年。（2）長期、反復(fù)的骨盆區(qū)域疼痛或不適；（3）伴尿頻、尿急、尿不盡等排尿不適癥狀；（4）前列腺液（Expressed prostatic secretions, EPS）鏡檢：卵磷脂小體正常或減少，白細(xì)胞≥或＜10個/HP；（5）前列腺液或按摩后尿液細(xì)菌培養(yǎng)陰性。（6）美國國立衛(wèi)生院前列腺炎癥狀指數(shù)評分（NIH-Chronic Prostatitis Symptom Index, NIH-CPSI）≥10分；（7）1周內(nèi)未服用其他治療慢性前列腺炎和影響排尿的藥物；其中（2）、（3）、（5）項為必備。

2. 排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）年齡＜18歲或＞50歲者；（2）前列腺液或按摩后尿液中細(xì)菌培養(yǎng)或支原體、衣原體等病原微生物檢測陽性者；（3）由精索靜脈曲張、附睪炎等其他疾病引起的疼痛不適者；（4）具有嚴(yán)重的肝腎功能不全者。

3. 給藥方法：西樂葆加清熱活血類中成藥為主的綜合治療，共4周。

二、標(biāo)本的收集和保存

治療前及治療4周后收集前列腺液，采集前禁欲3～5d，常規(guī)前列腺按摩獲取，除少許行常規(guī)鏡檢外，剩余標(biāo)本于2 h內(nèi)放置-80℃保存，統(tǒng)一測定分析。

三、標(biāo)本ELISA 法測定

采用 ELISA 法檢測前列腺液中的B7-H3、IFN-γ、IL-10含量，ELISA 試劑盒購自上海藍(lán)晶試劑公司，操作程序嚴(yán)格按照試劑盒所提供方法進(jìn)行。所有標(biāo)本復(fù)溫至4℃，量少樣本采用倍比稀釋，用酶標(biāo)儀在450 nm 波長下測定吸光度（A值），根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計算樣品濃度。

四、統(tǒng)計學(xué)分析

結(jié) 果

一、治療前后B7-H3、IFN-γ、IL-10水平的變化

Ⅲ 型前列腺炎患者治療前后B7-H3、IFN-γ、IL-10水平測定結(jié)果，見表1。治療前后 EPS 中的B7-H3水平均低于正常對照組，治療前B7-H3水平最低，治療后濃度增加，有顯著差異（P＜0.05）。IFN-γ、IL-10均出現(xiàn)治療前升高，治療后降低的結(jié)果，比較有統(tǒng)計學(xué)差異（P＜0.05），但均高于正常對照組。

表1 各組EPS中B7-H3、IFN-γ、IL-10的表達(dá)

二、B7-H3與IFN-γ、IL-10水平的相關(guān)性

慢性前列腺炎患者EPS中B7-H3水平與IFN-γ、IL-10水平進(jìn)行相關(guān)性分析，結(jié)果示B7-H3與IFN-γ、IL-10無相關(guān)性，IFN-γ與IL-10呈明顯正相關(guān)（r=0. 524，P＜0.01）。

討 論

近年來對Ⅲ型前列腺炎的研究顯示，炎癥和自身免疫反應(yīng)都參與了Ⅲ型前列腺炎的病理生理過程，說明該疾病存在免疫反應(yīng)網(wǎng)絡(luò)的功能失調(diào)。在眾多的免疫細(xì)胞因子中，多數(shù)研究結(jié)果表明選擇的觀察指標(biāo)有效，但能夠應(yīng)用于臨床的較少，而對免疫反應(yīng)的起始階段的文獻(xiàn)報道更少。因此，本研究選取了免疫反應(yīng)中的上、下節(jié)點來探索前列腺炎局部免疫反應(yīng)的變化。

在免疫反應(yīng)過程中，T細(xì)胞的活化是第一步，必須有協(xié)同刺激分子或協(xié)同抑制分子提供的第二信號參與。B7-H3屬于協(xié)同刺激或抑制分子，是近年來發(fā)現(xiàn)的一個B7家族新成員，它在免疫調(diào)節(jié)中起著重要作用[3]。研究發(fā)現(xiàn)，B7-H3是免疫調(diào)節(jié)開始的關(guān)鍵因子之一[4]，免疫應(yīng)答的發(fā)生與其對下游細(xì)胞因子的調(diào)控關(guān)系密切。本研究中，我們發(fā)現(xiàn)Ⅲ型前列腺炎患者EPS 中的B7-H3水平明顯低于正常對照組，治療后濃度明顯增加，接近正常對照組。這與Wei等[2]的研究結(jié)果相似，他們發(fā)現(xiàn)健康對照組高于慢性前列腺炎（chronic prostatitis，CP）組EPS中sB7-H3的水平，兩者有顯著性差異，但血清檢測卻發(fā)現(xiàn)兩組之間無差別，提示局部的前列腺液更能反應(yīng)出CP的變化過程。B7-H3mRNA在淋巴及非淋巴器官內(nèi)均廣泛表達(dá)，但蛋白僅表達(dá)于活化的淋巴細(xì)胞、DC細(xì)胞以及部分組織器官，如肺、肝臟、前列腺等[5]。我們推測B7-H3在Ⅲ型前列腺炎的發(fā)病過程中起到抑制作用。患者前列腺局部環(huán)境中的B7-H3濃度低，不能抑制T細(xì)胞的活化，從而導(dǎo)致T細(xì)胞免疫反應(yīng)的繼續(xù)發(fā)展。在臨床應(yīng)用中，我們可以將CP患者EPS中B7H3濃度作為診斷與療效評價的指標(biāo)之一，這樣可將具有前列腺炎癥狀的患者進(jìn)行區(qū)分，有效避免診斷的擴(kuò)大化。

本研究進(jìn)一步分析了B7-H3調(diào)控的下游促炎癥細(xì)胞因子IFN-γ和抑炎性細(xì)胞因子IL-10的表達(dá)情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，前列腺炎患者EPS液中促炎癥細(xì)胞因子IFN-γ增高，與丁協(xié)剛[7]的研究結(jié)論一致，在前列腺炎癥狀明顯階段，局部的炎癥及免疫反應(yīng)明顯，活化的T細(xì)胞增多，產(chǎn)生的INF-α隨之增加。通過綜合治療， INF-α隨之減少，患者癥狀減輕，達(dá)到正常治愈狀態(tài)。本研究中抑炎性細(xì)胞因子IL-10在治療前呈現(xiàn)出高表達(dá)狀態(tài)，治療后下降。我們認(rèn)為前列腺炎患者 EPS中IFN-γ的高水平表達(dá)，造成組織炎癥損傷，機(jī)體為了維持促炎性細(xì)胞因子與抑炎性細(xì)胞因子之間的平衡做出的自身調(diào)節(jié)，這與黃志洪[8]的觀點相同，在治療過程中，IL-10的發(fā)展趨勢和IFN-γ的一致。

雖然最初的研究[9]認(rèn)為，B7-H3刺激T細(xì)胞增殖并選擇性地誘導(dǎo)INF-γ分泌。但近年來的報道更趨向認(rèn)為B7-H3介導(dǎo)的信號可抑制T細(xì)胞的體外增殖,降低INF-γ的分泌[10,11]。因此，B7-H3對細(xì)胞因子的進(jìn)一步調(diào)節(jié)，是揭開其導(dǎo)致免疫反應(yīng)的重要途徑。盡管本研究未發(fā)現(xiàn)治療前后的EPS中B7-H3與INF-γ、IL-10的表達(dá)存在相關(guān)性，但治療后B7-H3的表達(dá)升高，IFN-γ和IL-10表達(dá)下降，一定程度上反映出三者的潛在相互關(guān)系。進(jìn)一步揭示B7-H3對下游因子IFN-γ和IL-10的調(diào)控作用對尋找B7-H3的發(fā)病機(jī)制具有重要的意義。本研究中B7-H3與INF-γ、IL-10表達(dá)無相關(guān)可能是受到檢測標(biāo)本量少的影響，抑或三者并非簡單的線性對應(yīng)關(guān)系。

綜上所述，B7-H3為免疫調(diào)節(jié)的關(guān)鍵因子之一，在Ⅲ型前列腺炎的發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮抑制作用，治療后B7-H3的表達(dá)下降，以及IFN-γ、IL-10的升高，提示我們在臨床治療中，可將B7-H3并可作為了解病情、評價治療效果的一個有價值的指標(biāo)。

前列腺炎; B7-H3; 干擾素II型; 白細(xì)胞介素10

1 張凱主編. 前列腺炎診治指南2011版. 北京:人民衛(wèi)生出版社, 2011: 548-581

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3 Pardoll DM. Sponning molecular immunnology into successful immunal therapy.Nat Rev Immuno J2002; 2(4): 227-238

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5 Suh WK, Wang SX, Jheon AH,et al. The immune regulatory protein B7-H3 promotes osteoblast differentiation and bone mineralization.Proc Natl Acad Sci USA2004; 101(35): 12969-12973

6 Miller LJ, Fischer KA, Goralnik SJ,et al.Interleukin-10 levels in seminal plasma: implications for chronic prostatitis-chronic pelvic pain syndrome.J Urol2002; 167(2 pt 1): 753-756

7 丁協(xié)剛, 李世文, 鄭新民, 等. 慢性前列腺炎/慢性骨盆疼痛綜合征患者前列腺液中IFN-γ、TGF-β1的檢測. 中華男科學(xué)雜志 2006; 12(11): 982-984

8 黃志洪, 袁少英, 李慎果, 等. 檢測前列腺液中 IL-8、IL-10 對于慢性非細(xì)菌性前列腺炎分型的臨床意義. 中國醫(yī)藥導(dǎo)報 2009; 6(12): 25-27

9 Chapoval AL, Ni J, Lau JS,et al.B7-H3: a costimulatory molecule for T cell activation and INF-gamma production.Nat Immumol2001; 2(3): 269-274

10 Prasad DV, Nguyen T, Li Z,et al. Murine B7-H3 is a negative regulator of T cells.J Immunol2004; 173(4): 2500-2506

11 Xu J, Huang B, Xiong P,et al. Soluble mouse B7-H3 down-regulates dendritic cell stimulatory capacity to allogenic T cell proliferation and production of IL-2 and IFN-gamma.Cell Mol Immunol2006; 3(3): 235-240

（2013-12-09收稿）

10.3969/j.issn.1008-0848.2014.04.015

R 697.33

資助: 本課題受上海市長寧區(qū)科學(xué)基金（資助號CNKW2013J08）資助
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, E-mail:songaili218@126.com