丹參對野百合堿所致肺動脈高壓大鼠的保護作用

王志華，王玉水

（天津市南開醫(yī)院兒科，天津 300100）

丹參對野百合堿所致肺動脈高壓大鼠的保護作用

王志華，王玉水

（天津市南開醫(yī)院兒科，天津 300100）

[目的]觀察丹參（SMB）對野百合堿（MCT）所致肺動脈高壓（PAH）大鼠的保護。[方法]將30只健康雄性SD大鼠隨機分為3組：正常對照組、PAH組、SMB組。PAH組和SMB組大鼠一次性項背部皮下注射野百合堿（50 mg/kg）建立PAH模型，于制模后3周SMB組開始給予腹腔注射SMB[（200 mg/（kg·d）]，正常對照組不做任何處理，2周后觀察大鼠肺小動脈病理改變。[結(jié)果]SMB組肺小動脈管壁中膜厚度、中膜厚度與外徑的比值、管壁面積與血管總面積、管腔面積與血管總面積與PAH組、對照組比較有統(tǒng)計學差異（P＜0.05）。[結(jié)論]丹參能部分逆轉(zhuǎn)肺血管結(jié)構(gòu)重建，有效降低肺動脈高壓，從而修復(fù)野百合堿誘導(dǎo)的肺損傷。

丹參；野百合堿；肺動脈高壓

肺動脈高壓（PAH）是慢性肺源性心臟病發(fā)生的中心環(huán)節(jié)，如何降低肺動脈高壓，逆轉(zhuǎn)肺血管的病理變化，這是當前肺心病或肺血管病研究的重要內(nèi)容之一。實驗證明，丹參（SMB）具有舒張血管、保護心肌、抗氧化、抗凝和保護內(nèi)皮細胞的多種功效[1]，同時具有降低肺動脈壓及阻抑肺腺泡內(nèi)動脈結(jié)構(gòu)重建作用[2]。在治療心血管疾病等方面發(fā)揮著重要作用。本實驗以被國內(nèi)外許多學者采用的野百合堿（MCT）誘導(dǎo)肺動脈高壓大鼠模型[3-4]，進一步探討丹參對PAH的保護作用。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 動物 健康雄性SD大鼠30只，體質(zhì)量100～150 g。由本院實驗動物中心提供。

1.1.2 藥物 丹參（購自浙江正大青春寶藥業(yè)有限公司，規(guī)格：10 mL，每毫升相當于丹參1.5 g，批號：0011153）；野百合堿（MCT，Sigma公司產(chǎn)品）。

1.1.3 儀器 病理圖像分析系統(tǒng)：Leica Qwin V3公司。

1.2 實驗方法

1.2.1 模型制備 健康雄性SD大鼠30只，采用隨機數(shù)字表法隨機分為正常對照組（n=10）、肺動脈高壓模型組（PAH組，n=10）和丹參治療組（SMB組，n=10）。將MCT結(jié)晶以生理鹽水配成2%的溶液。正常對照組：以等量生理鹽水一次性項背部皮下注射。PAH組和SMB組：分別一次性項背部皮下注射MCT 50 mg/kg。3組動物均同等條件下自由飲水、攝食3周后，丹參組以[200 mg/（kg·d）]腹腔注射，其余組相同等條件下繼續(xù)飼養(yǎng)；2周后達實驗終點。PAH組大鼠在MCT注射后第1、2周因腹瀉和重度右心力衰竭分別死亡1只，SMB組大鼠在MCT注射后第2周因右心力衰竭死亡1只，正常對照組無死亡。實驗終點（第5周）時，正常對照組組存活10只，PAH組存活8只，SMB組存活9只。

1.2.2 肺組織標本制備 上述實驗動物在同樣條件下飼養(yǎng)14 d后，于第15天處死，開胸取每只大鼠的肺組織和心臟后立即用體積分數(shù)為10%的中性甲醛溶液固定1周，右下肺各取組織2塊，脫水，石蠟包埋，常規(guī)切片后行蘇木素伊紅（HE）染色，光學顯微鏡下觀察肺小動脈形態(tài)學改變。

1.2.3 圖像分析 采用Leica Qwin V3病理圖像分析系統(tǒng)測量與終末細支氣管伴行的肺小動脈（直徑＜200 μm）管壁中膜厚度（MT）、外徑（ED）、管壁面積（MA）、管腔面積（VA）以及血管總面積（TAA）；分別計算MT與ED比值（MT%）、MA與TAA比值（MA%）及VA與TAA比值（VA%），每只大鼠選一張肺組織切片，每張切片隨機測量8條肺小動脈計算均值作為大鼠的肺血管形態(tài)計量學指標[5]，計算出均數(shù)作為該只大鼠的血管指標進行統(tǒng)計分析。

1.3統(tǒng)計學處理 應(yīng)用SPSS 18.0軟件進行統(tǒng)計學處理，計量資料用均數(shù)±標準差（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠的肺小動脈MT、MT%、MA%和VA%測定結(jié)果 見表1。PAH組肺小動脈管壁增厚，管腔狹窄，丹參在一定程度上可逆轉(zhuǎn)肺血管形態(tài)重建（P＜0.01），但SMB組各指標仍未完全恢復(fù)到正常對照組水平。

表1 各組大鼠肺小動脈MT、MT%、MA%和VA%測定結(jié)果比較（±s）Tab.1Comparison of MT%,MT%,MA%and VA%of lung arterioles of rats in each group（±s）

表1 各組大鼠肺小動脈MT、MT%、MA%和VA%測定結(jié)果比較（±s）Tab.1Comparison of MT%,MT%,MA%and VA%of lung arterioles of rats in each group（±s）

注：與正常對照組比較：*P＜0.01，**P＜0.05；與PAH組比較：P＜0.01。

組別 nMT（μm） MT% MA% VA%正常對照組 10 3.52±0.73 17.78±2.70 44.92±5.36 55.28±5.37 PAH組 8 9.59±0.48 39.58±3.85 65.13±5.89 34.87±5.89 SMB組 9 6.45±0.68*26.58±1.28*51.79±2.25**48.21±2.23**

2.2 各組大鼠肺組織學檢查 光鏡下，正常對照組大鼠肺小動脈管壁菲薄，內(nèi)皮細胞扁平連續(xù)，細胞分布均勻，大小、厚薄較一致（圖1A）。PAH組大鼠肺小動脈的中膜平滑肌明顯增生肥大，管壁管壁厚度增加，管腔明顯狹窄；肺血管損傷明顯，內(nèi)皮細胞變性腫脹，突向血管腔內(nèi)，甚至壞死脫落（圖1B）。SMB組大鼠肺小動脈管壁增厚程度及管腔狹窄程度較PAH組有不同程度地減輕（圖1C）。

3 討論

圖1 各組大鼠肺小動脈的形態(tài)變化（HE染色,×200）Fig.1 Morphology change of lung arterioles in rats（HE,×200）

肺動脈高壓是一處理極為棘手，高致死率和致殘率的病理生理綜合征，被認為是“假惡性”腫瘤[6]。它以肺小動脈的血管增生和重構(gòu)[7]，以進行性肺血管阻力和肺動脈壓增高[8]，為特征的一種疾病，現(xiàn)代醫(yī)學認為，慢性肺動脈高壓的病理進展一定程度上取決于肺小血管中膜的變化，包括平滑肌細胞的肥大、增生，并從中膜遷移至內(nèi)膜大量增殖，使肺動脈中膜增厚和無肌型動脈肌化，血管管腔變窄，血流阻力增加。同時合成和分泌細胞外基質(zhì)增多，肺血管彈性回縮力和順應(yīng)性降低，促使肺動脈壓力升高。

判斷肺動脈高壓存在與否除直接測定肺動脈壓力外，尚可測定右心室肥厚和肺血管重建等形態(tài)學指標。本研究中，在MCT制模后大鼠肺組織HE染色切片中，可見肺小動脈管壁明顯增厚，管腔明顯狹窄，圖像分析示其MT%和MA%均顯著增高，VA%降低。提示已形成了肺血管重建，說明已經(jīng)成功建立了肺動脈高壓模型。

目前已明確肺動脈內(nèi)皮細胞無序增生和凋亡異常在肺動脈高壓發(fā)病中占重要地位[9]，而文獻報道，丹參其主要水溶性成分丹酚酸B可促進恢復(fù)受損內(nèi)皮的功能[10-13]，此外，丹參能夠刺激肺泡巨噬細胞分泌細胞因子，參與機體的免疫調(diào)節(jié)[14]，而丹參能明顯抑制豬肺動脈缺氧性內(nèi)皮細胞條件培養(yǎng)液對豬肺動脈平滑肌細胞增生及膠原蛋白的合成,因而達到阻抑肺血管構(gòu)型重建和降低肺動脈高壓的作用。本實驗結(jié)果提示SMB組MT、MT%、MA%、VA%與PAH組比較有明顯統(tǒng)計學意義（P＜0.01），可能與丹參直接擴張肺小動脈的平滑肌，減少肺循環(huán)阻力，增加心輸出量，改善肺血管順應(yīng)性，改善微循環(huán)，延緩肺血管構(gòu)型重建的病理進程，減輕肺血管構(gòu)型重建的有關(guān)。但肺血管構(gòu)型重建的形成是一個長期的復(fù)雜的病理過程，且發(fā)生了構(gòu)型重建的肺動脈對一些血管舒張因子的反應(yīng)性降低，導(dǎo)致目前臨床應(yīng)用血管擴張藥對PAH的治療效果并不理想。丹參作為傳統(tǒng)中藥，可望成為治療肺動脈高壓的一種有效的治療措施。

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[3]李 娟，孫 新，畢 輝,等.低壓低氧性大鼠肺動脈高壓模型的建立[J].臨床心血管病雜志，2008,24(4):297-301.

[4] Xu MH,Gong YS,Su MS,et al.Absence of the adenosine A2A re-ceptor confers pulmonary arterial hypertension and increased pulmonary vascular remodeling in mice[J].J Vasc Res,2011,48(2):171-183.

[5]周光德，陳瑞芬，劉國貞,等.野百合堿引起肺血管重建的觀察[J].中國病理生理雜志,2001,17(6):573-574.

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[12]王 虹，高秀梅，張伯禮，等.丹參不同組分對大鼠血管平滑肌細胞增殖的影響[J].天津中醫(yī)藥，2004,21(3):231.

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Protective effect of SMB against pulmonary arterial hypertension caused by MCT in rats

WANG Zhi-hua，WANG Yu-shui
（Department of Paediatrics,Tianjin Nankai Hospital，Tianjin 300100,China）

[Objective]To investigate the protective effects of SMB in rats with pulmonary arterial hypertension caused by MCT.[Methods]Thirty male rats were randomly divided into three groups：normal control group,PAH group,SMB group.The rats in PAH group and SMB group were injected with a single subcutaneous MCT（50 mg/kg）respectively to induce the models of vascular remodeling of pulmonary artery.The rats in these 3 groups were fed in the same condition.After 3 weeks,SMB group was injected with SMB[200 mg/(kg·d)] intraperitoneally.Nothing was given in normal control group.The microstructure changes of small arterial were determined and observed two weeks later.[Results]MT，MT%，MA%and VA%of pulmonary arterial in SMB group were compared with those of pulmonary arterial in PAH group and control group respectively，and there was a statistical difference(P＜0.05).[Conclusion]To some degree,SMB can reverse the progression of the pulmonary arteries remodeling,decrease effectively PAH,then repair the monocrotaline damaged lung.

salvia miltiorrhiza bunge；monocrotaline；pulmonary arterial hypertension

R541.6

：A

：1672-1519（2014）04-0231-03

2013-10-24）

（本文編輯：馬 英，于春泉）

10.11656/j.issn.1672-1519.2014.04.13

王志華（1975-），女，碩士研究生，天津中醫(yī)藥大學博士在讀，副主任醫(yī)師，主要研究方向為中西醫(yī)結(jié)合兒科臨床工作。