四逆湯對急性缺血性心肌梗死模型大鼠SOD和MDA的動態藥效及各指標間相關性研究

尹翠翠1 藺建軍1，2 楊勇1 容蓉1

（1.山東中醫藥大學，山東濟南 250355；2.山東醫藥技師學院，山東泰安 271000）

四逆湯對急性缺血性心肌梗死模型大鼠SOD和MDA的動態藥效及各指標間相關性研究

尹翠翠1 藺建軍1，2 楊勇1 容蓉1

（1.山東中醫藥大學，山東濟南 250355；2.山東醫藥技師學院，山東泰安 271000）

目的：觀察四逆湯對急性缺血性心肌梗死模型大鼠SOD和MDA的動態藥效，分析時間與SOD和MDA指標相關性。方法：將Wistar大鼠隨機分為心肌缺血組、假手術組、四逆湯組。心肌缺血組：于左冠狀動脈前降支起始部下2mm處結扎；假手術組：穿線不結扎；四逆湯組：預先給大鼠灌服四逆湯4d，第4日給藥30min后，進行急性缺血性心肌梗死手術。分別于手術后按時間點0、5、10、20、40、60、90、120、150、180、210、360m in腹主動脈采血，檢測SOD和MDA含量，分析動態藥效和時間與指標間的相關性。結果：與假手術組比較，心肌缺血組大鼠SOD（40、120、150、180、210、360min）、四逆湯組SOD（5、210、360min）含量顯著降低，心肌缺血組MDA（10、60、90、150、210min）、四逆湯組MDA（210min）含量顯著升高；在造模后40m in時，四逆湯組大鼠SOD明顯高于心肌缺血組；造模后10、60、120、150m in時，四逆湯組大鼠MDA含量明顯低于心肌缺血組。心肌缺血組、四逆湯組SOD含量與時間變化均為負相關關系，四逆湯組MDA含量與時間變化為正相關關系。結論：四逆湯能夠有效地清除氧自由基，減輕脂質過氧化反應，減輕對缺血心肌的損傷，對大鼠缺血心肌具有一定的保護作用。但通過與時間相關性分析，提示四逆湯所具有的減輕氧自由基損傷作用可能不是其抗急性缺血性心肌梗死的主要途徑。

缺血性心肌梗死 四逆湯 SOD MDA 實驗研究

四逆湯始載于《傷寒論》，由炮附子、干姜、炙甘草組成，具有回陽救逆之功效，在現代臨床中應用廣泛，療效較好。作為回陽救逆的經典醫方，四逆湯對心血管系統有良好的保護和治療作用。現代醫學研究表明，四逆湯具有明顯的抗心臟、腸、腦等器官缺血-再灌注損傷的作用，其機制可能與清除氧自由基和增加組織灌流量有關[1-3]。超氧化物歧化酶（SOD）在生物體內具有清除自由基的首要作用；丙二醛（MDA）是一種脂質過氧化代謝產物，它具有的細胞毒性可引起細胞代謝及功能障礙，因此通過測定MDA的含量能反映機體內脂質過氧化的程度，間接反映細胞損傷的程度。這些研究表明，SOD、MDA的含量及其變化可以作為心肌梗死損傷程度的觀測指標。本研究通過觀察急性缺血性心肌梗死模型大鼠經四逆湯治療后不同時間點血漿中SOD、MDA含量，以分析四逆湯通過抗自由基損傷途徑防護心肌缺血的動態效應作用機制。

1 材料與方法

1.1 實驗動物Wistar大鼠，SPF級，雌雄各半，132只，體重250～300g，由山東魯抗動物實驗中心提供，動物許可證編號：SCXK（魯）20080002。飼養環境：室溫22～26℃，相對濕度40%～70%RH。

1.2 實驗儀器BL-420E生物機能實驗系統（成都泰盟科技有限公司）；UV2201紫外分光光度計（日本島津）；JA5003型電子天平（上海精科天平廠）；GL-20A型全自動高速冷凍離心機（湖南離心機廠）。

1.3 實驗試劑丙二醛（MDA）試劑盒，批號：20111216；總超氧化物歧化酶（T-SOD）試劑盒，批號：20110827，由南京建成生物工程研究所提供。

1.4 實驗藥材附子，產地四川省江油，為毛茛科多年生草本植物烏頭Aconitum carmichaeli Debx的子根的加工品。甘草，產地河北，為豆科（Leguminosae）植物甘草Glycyrrhiza uralensis Fisch.的根及根莖。干姜，產地廣西來賓，為姜科多年生草本姜Zingiber officinale Rosc.的干燥根莖。以上藥材均購于山東濟南建聯藥店，經山東中醫藥大學中藥學院李峰教授鑒定合格。以傳統臨床常用處方（黑附子30g、干姜20g、炙甘草30g）用量比例，按照本課題前期優化的提取方法[4]，將各單味藥分別提取，合并四逆湯提取液，藥物濃度為2g生藥材/mL，4℃冷藏備用。

1.5 動物分組與模型制備Wistar大鼠共132只，隨機分假手術組36只、心肌缺血組36只和四逆湯組60只。心肌缺血模型制備：用4%水合氯醛腹腔麻醉后，氣管插管，行人工呼吸；左側第3、4肋間開胸，剪開心包，暴露心肌，并用圓形無創縫合針6/0絲線置于左冠狀動脈前降支起始部下2mm處備用；結扎左冠狀前降支動脈，以ECGⅡ導聯ST段明顯抬高或T波高聳、心肌顏色變暗紅色為結扎成功的標志。心肌缺血組和四逆湯組大鼠按此方法造模，假手術組大鼠穿線不結扎。四逆湯組大鼠造模前預先給四逆湯灌胃4d，大鼠給藥劑量為21.60g生藥材/kg體重，第4日給藥30m in后進行造模。

1.6 指標檢測各組大鼠造模成功后，4%水合氯醛腹腔注射麻醉，按時間點0、5、10、20、40、60、90、120、150、180、210、360m in（心肌缺血組、假手術組每個時間點3只大鼠，四逆湯組每個時間點5只大鼠），分別腹主動脈采血，肝素抗凝，置冷凍離心機中，3000r/m in離心10min，取上清，-20℃保存待用。按試劑盒說明采用紫外分光光度計檢測SOD、MDA含量。

1.7 統計學方法實驗數據采用SPSS17.0軟件統計分析，計量數據均以（±s）表示，采用單因素方差（LSD檢驗）進行組間差異分析，以P＜0.05為差異具有統計學意義。采用Pearson相關性分析進行各指標時間點間的差異性分析，以P＜0.05為差異呈顯著性線性相關。

2 實驗結果

2.1 各組大鼠不同時間點血漿中SOD含量與假手術組比較，心肌缺血組大鼠在40、120、180、210、360min時間點，四逆湯組在5、210、360min時間點，血漿中SOD含量明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）。與心肌缺血組比較，四逆湯組大鼠在40min時間點血漿SOD含量明顯升高（P＜0.05）。見表1、圖1。

表1 各組大鼠不同時間點血漿中SOD含量比較±s）U/mL

表1 各組大鼠不同時間點血漿中SOD含量比較±s）U/mL

注：與假手術組比較，*P＜0.05，**P＜0.01，與心肌缺血組比較，△P＜0.05

圖1 各組大鼠不同時段SOD含量變化

2.2 各組大鼠不同時間點血漿中MDA含量與假手術組比較，心肌缺血組大鼠在10、60、120、150、210min時間點，四逆湯組在210min時間點，血漿MDA的含量明顯升高（P＜0.05或P＜0.01）。與心肌缺血組比較，四逆湯組大鼠在10、60、120、150min時間點血漿MDA含量明顯降低（P＜0.05或P＜0.01）。見表2、圖2。

表2 各組大鼠不同時間點血漿中MDA含量比較（±s）nmol/mL

表2 各組大鼠不同時間點血漿中MDA含量比較（±s）nmol/mL

注：與假手術組比較，*P＜0.05，**P＜0.01；與心肌缺血組比較，△P＜0.05，△△P＜0.01。

圖2 各組大鼠不同時段MDA含量變化

2.3 各組時間與SOD、MDA含量間的相關性分析

2.3.1 假手術組時間與SOD、MDA含量間的相關性分析時間與SOD、MDA含量間的指數相關系數分別為-0.415、0.363（P＞0.05），尚不認為它們之間有線性相關關系，見圖3。

圖3 假手術組時間與SOD、MDA含量間的相關性分析

2.3.2 心肌缺血組時間與SOD、MDA含量間的相關性分析

時間與SOD含量的指數相關系數為-0.686（P＜0.05），為負相關關系；時間與MDA含量的指數相關系數為0.156（P＞0.05），尚不認為它們之間有線性相關關系。見圖4。

圖4 心肌缺血組時間與SOD、MDA含量間的相關性分析

2.3.3四逆湯組時間與SOD、MDA含量間的相關性分析時間與MDA含量的指數相關系數為0.791（P＜0.05），為正相關關系；時間與SOD含量的指數相關系數為-0.804（P＜0.01），為負相關關系。見圖5。

圖5 四逆湯組時間與SOD、MDA間的相關性分析

3 討論

本研究結果顯示，假手術組SOD含量與時間尚無相關性關系，心肌缺血組、四逆湯組SOD含量與時間呈負相關關系。假手術組、心肌缺血組MDA含量與時間尚無相關性關系，四逆湯組MDA含量與時間呈正相關關系。提示雖然四逆湯提取物能清除氧自由基，減輕缺血心肌的損傷，對大鼠心梗模型具有一定的保護作用，但隨著時間的增加，四逆湯抗大鼠急性心肌缺血的作用，與其增加機體SOD的含量，降低MDA含量的變化不是十分密切。通過相關性數據分析，提示四逆湯減輕氧自由基損傷不是其抗急性缺血性心肌梗死的主要途徑，有可能通過其他機制起作用，有待進一步研究。

[1]孫慧蘭，吳偉康，羅漢川，等.四逆湯有效部位抗心肌缺血-再灌注損傷作用.中草藥，2006，37（1）：77

[2]劉克玄，吳偉康，羅漢川，等.四逆湯對大鼠腸缺血再灌注后腸上皮細胞超微結構的影響.中國病理生理雜志，2004，20（4）：636

[3]顏建云，吳偉康，陸立鶴，等.四逆湯對大鼠局灶性腦缺血后bax、bcl-2表達的影響.中國病理生理雜志，2005，21（4）：669

[4]王曉莉，鞏麗麗，容蓉，等.3種方法制備的四逆湯中甘草苷、甘草酸含量測定.中國實驗方劑學雜志，2012，18（6）：71

R542.220.5

A

1672-397X（2014）02-0075-03

尹翠翠（1987-），女，碩士研究生。研究方向：經方的現代研究。

楊勇，yy7204@yahoo.com.cn

2013-07-20

編輯：吳寧

山東省高等學校科技計劃項目（Z09LF31）