艾灸預處理對胃黏膜細胞調控作用的研究進展

★ 謝宇鋒 陳赟 馮軍 楊宗保 王晨光 劉瓊

(1.深圳市福田區中醫院 廣東 深圳 518000；2.江西中醫藥大學2012級碩士研究生 江西 南昌 330006；3.廣州中醫藥大學2012級碩士研究生 廣東 廣州 510000；4.廈門大學醫學院中醫系 福建 廈門 361005)

灸法主要是借灸火的熱力給人體以溫熱性刺激，通過經絡腧穴的作用，以達到防治疾病目的的一種方法[1]。灸法具有獨特的療效，在中醫學中起著重要的作用，《醫學入門·針灸》言：“藥之不及，針之不到，必須灸之。”《靈樞·官能》載：“針所不為，灸之所宜。”由此可見，灸法具有針藥所不能及的獨特功效。而《名醫別錄》更言：“艾味苦，微溫，無毒，主灸百病。”由此可見艾灸作為主要的灸法，具有廣泛的適應范圍。自古以來，艾灸更是被廣泛應用于預防保健領域，也就是所謂的“逆灸法”。《諸病源候論·小兒雜病諸疾》記載：“河洛間土地多寒，兒喜疾驚。其俗生兒三日，喜逆灸以防之，又灸以防噤。”明高武《針灸聚英》解釋：“無病而先針灸曰逆，逆，未至而迎之也。”使用逆灸的方法溫補、預防可以取得很好的效果。《醫說·針灸》也說：“若要安，三里莫要干。”由此可見，灸法作用為一種預防保健方法，具有悠久的歷史；而艾灸足三里更是預防保健“逆灸法”的典型代表。也正是基于艾灸足三里具有良好預防保健作用的臨床實踐基礎，國內學者通過大量的實驗研究證實了艾灸對胃黏膜損傷具有良好的預保護作用，并從不同的角度闡述了其可能的作用機制。筆者通過查閱文獻發現目前國內學者主要從艾灸調控胃黏膜細胞的增殖與凋亡的相關作用機制探討了艾灸對胃黏膜損傷預保護機制，現將其歸納如下。

1 艾灸預處理調控胃黏膜細胞增殖的相關作用機制

胃黏膜損傷的修復主要是通過損傷后的早期重建(上皮移行)及細胞增生來實現[2,3]。胃黏膜深度損傷和慢性損傷的基本修復方式則為細胞增殖，而適應性細胞保護是一種細胞增殖的過程，其是通過細胞的有絲分裂來補充已損傷或壞死的黏膜細胞，這便是胃黏膜損傷后的重要修復功能。適應性細胞保護的細胞增殖起始于胃腺小凹的底部和頸部的增殖區，其修復過程包括炎癥反應、細胞分裂和分化以及新生的細胞遷移到損傷病灶的周圍，使損傷的黏膜組織恢復正常的形態和功能[4,5]。在這一胃黏膜損傷修復的過程中，存在多種物質如生長因子和細胞因子等參與調節胃黏膜損后的細胞增殖修復作用。目前國內學者關于艾灸調控胃黏膜細胞增殖的作用機制主要包括以下兩個方面。

1.1 ERK信號轉導通絡啟動的細胞增殖 ERK途徑，是Ras/Raf/MEK/ERK途徑的簡稱，該途徑主要是依靠特異性的細胞因子或生長因子與相應的特異性受體結合啟動，在核內，ERK依次激活一系列靶蛋白，ERK激酶在細胞質中的主要催化底物為90kD核糖體蛋白S6激酶，該激酶再通過激活一系列的核轉錄因子如核因子-kB等，調節細胞增殖相關基因的轉錄。李健玲等[6]研究表明TGF-α不僅可以顯著上調AP-1的活性，而且可以明顯激活MEK和ERK1/2，且該作用可以被EGFR特異性抑制劑PD153035或MEK特異性抑制劑PD98059能完全阻斷。由此可見，TGF-α誘導的胃黏膜細胞增殖與分化，主要是通過大鼠胃黏膜細胞EGFR介導的ERK1/2信號途徑激活AP-1轉錄因子來實現的。易受鄉等[7,8]研究發生艾灸預處理可以通過增加胃黏膜血流量，促進TGF-α合成、增強HSP70與PCNA的表達，促進損傷胃黏膜周圍的細胞增殖，從而達到對抗應激性胃黏膜損傷的作用；劉密等[9]研究發現艾灸足三里等穴位預處理可以明顯減輕因束縛水浸而造成的應激性胃黏膜損傷，并上調血清及胃黏膜細胞中EGF、TGF-α水平，促進胃黏膜細胞中TFF1和PCNA的表達水平，提示艾灸穴位預處理對胃黏膜損傷后增殖修復相關因子有較好的調控作用：艾灸足三里等穴所誘發的經氣可刺激機體合成和分泌內源性保護因子(EGF、TGF-α)，啟動黏膜修復的相關機制，誘導TFF1與EGF、TGF-α協同作用，加強胃黏膜細胞增殖能力，對抗應激性損傷，促進損傷黏膜周圍的細胞增殖。劉密等[10]的研究還發艾灸預處理可以使束縛水浸應激大鼠的胃粘膜內的EGFR、ERK1/2磷酸化、AP-1表達較單純束縛水浸應激大鼠明顯增高，并提出艾灸調控細胞增殖對應激性胃黏膜損傷的預保護作用機制可能是通過上調應激大鼠血清和胃黏膜組織內的EGF、TGF-α等水平，高水平的EGF和TGF-α與胃黏膜細胞膜上的特異性受體EGFR結合后，啟動ERK信號轉導通路，促使胃黏膜細胞內ERK磷酸化和AP-1核轉錄因子表達增強，調節與生長有關的基因轉導，從而促進胃黏膜細胞的增殖。綜上所述，艾灸啟動ERK信號轉導通路，調控胃黏膜細胞的增殖可能是其對胃黏膜損傷發揮預保護作用可能是機制之一。

1.2 神經通路傳導途徑調節胃腸激素啟動的胃黏膜細胞增殖 以俞穴刺激為基礎的針灸治療作用機理研究均證實：神經與體液等的綜合調節是其發揮作用的重要基礎。而以俞穴為刺激部位的艾灸對胃黏膜損傷的預保護作用也不例外，且神經通絡傳導途徑在調節胃腸激素水平，影響細胞增殖，發揮胃黏膜損傷預保護中起著重要的作用。文瓊[11]研究發現艾灸足三里穴預處理對胃黏膜損傷大鼠的胃黏膜組織形態具有良好的改善作用，該作用可能與艾灸預處理上調應激性胃黏膜損傷大鼠血清IL-2的含量、下調應激性胃黏膜損傷大鼠血清IL-1 P的含量，從而促進細胞增殖和組織修復；而該調節作用在切斷迷走神經后明顯降低，初步證實了迷走神經通路可能是艾灸預處理對胃黏膜損傷與保護因子表達的重要途徑之一。彭亮等[12]研究發現艾灸足三里穴預處理對大鼠胃黏膜損傷的組織形態學具有較好的改善作用，該作用與上調胃黏膜細胞是中EGF和下調生長抑制素(SS)有關。有研究表明，當胃腸道出現損傷時，在治療后體液中EGF含量明顯增高，尤其是損傷部位，說明EGF刺激了胃黏膜損傷部位細胞的代謝，加速了胃黏膜損傷部位上皮細胞的修復[13]。生長抑制素(生長激素釋放抑制激素)(SS)經由內分泌D細胞分泌產生，為抑制性功能的胃腸激素之一。生長抑制素可以明顯抑制胃黏膜細胞在動態修復過程中的自我增殖，阻礙黏膜的修復過程。由此可見，艾灸預處理對EGF與SS的調節作用，可以促進胃黏膜損傷部位上皮細胞的自我增殖，促進胃黏膜的修復作用。但在脊髓橫斷損毀、孤束核損毀、迷走神經損毀、腓總神經切斷后艾灸預處理對降低胃黏膜損傷指數具有明顯的干擾作用，因此推斷脊髓、孤束核、迷走神經、腓總神經可能是艾灸預處理對胃黏膜損傷發揮預保護作用的神經途徑之一。綜上所述，艾預處理對胃黏膜損傷的預保護作用可能是通過脊髓、孤束核、迷走神經、腓總神經等神經途徑調節胃腸道激素水平，從而實現了對胃黏膜細胞增殖的調節。

2 艾灸預處理調控胃黏膜細胞凋亡的相關作用機制

細胞凋亡是指多細胞有機體為調控機體發育，維護內環境的穩定，由基因控制的細胞主動死亡過程。正常胃黏膜細胞存在程序性死亡，即細胞凋亡，籍以清除衰老的細胞，維持胃黏膜生理平穩和完整性。人體各組織細胞數目的維持是由細胞增殖與凋亡之間平衡來實現的，任何原因所致細胞凋亡加快或減慢，均可使機體內環境穩定發生變化，機體結構和功能受損，產生各種疾病。急性胃黏膜損傷的初起階段，如果過多的大量的細胞發生凋亡則會導致胃黏膜損傷機制與保護機制的平衡失調，胃黏膜組織結構遭到破壞，造成繼發性的、不可逆性的損害。細胞凋亡的兩條主要通路分別是死亡受體介導的凋亡途徑或外在途徑和線粒體凋亡途徑或內在途徑。目前，國內學者主要從線粒體凋亡通路的不同靶點探討了艾灸預處理對胃黏膜損傷保護作用的可能機制。

2.1 線粒體信號通路介導的細胞凋亡 線粒體凋亡途徑作為調控細胞凋亡的重要途徑之一，其可以被胞外刺激或胞內刺激而啟動，主要包括氧化作用和細胞毒性藥物刺激。線粒體凋亡途徑是細胞凋亡進程中關鍵的一步，不同的促凋亡信號轉導通路和損傷通路匯集于線粒體，使其結構和功能發生顯者的改變，特別是線粒體膜通透性改變，從而加速核凋亡特征的出現[14,15]。因此，線粒體在細胞凋亡中起著重要的調控作用，在某種意義上說，它是凋亡的執行者，直接決定著細胞的生死存亡[16,17]。基于線粒體凋亡途徑在調控細胞凋亡的重要意義，國內學者則不同的角度探討了艾灸對胃黏膜損傷預保護作用的在細胞凋亡調節上的可能機制，具體如下：常小榮[18]研究團隊在明確艾灸預處理可以對胃黏膜損傷發揮良好的保護作用基礎上，進一步研究發現其預保護作用可能與增強HSP70蛋白和基因的表達有關。而有研究表明HSP70mRNA及蛋白是細胞凋亡的指征之一[19]。HSP70合成增加能減輕細胞凋亡，阻止細胞開自殺途徑，而HSP70抑制劑能促使細胞凋亡，且其調節細胞凋亡作用可能與其保護線粒體、抑制氧自由基生成、抑制凋亡激活基因的表達、抑制凋亡信號轉導中Caspase等有關。易受鄉等[20]研究發現艾灸預處理可以使應激性胃黏膜損傷大鼠的胃黏膜細胞中的細胞色素-C (Cyt-C)、凋亡活化因子1(Apaf-1)、Caspase-9和Caspase-3的表達明顯降低，由此推斷，艾灸預處理對應激性胃黏膜損傷的保護作用可能是通過調胃黏膜細胞的HSP70，并作用于相關細粒體凋亡途徑的相關靶點，從而啟動抑制胃黏膜細胞的凋亡，以達到預保護的作用。郁潔[21]在其導師易受鄉的研究基礎上，使用HSP70合成的特異性阻斷劑與艾灸同時給予預處理，則研究發現艾灸預處理對胃黏膜損傷的保護作用被取消，再一次證明艾灸對胃黏膜損傷的預保護作用與上調HSP70的表達有關。此外，彭宏[22]還研究發現，艾預預處理可以通過抑制Smac基因表達，從而抑制細胞凋亡，達到拮抗胃黏膜損傷的作用。細粒促凋亡蛋白(Smac/Diablo)2000年發現的一種由線粒體釋放的促凋亡蛋白，參與細胞凋亡線粒體通路下游反應，當其受到凋亡刺激時，Smac/Diablo的線粒體定位信號肽會被切斷，能夠從信粒體中釋放至胞質，與凋亡抑制蛋白(IAP)分子特異性結合，解除其對caspase的阻礙作用，激活各級caspase引起級聯反應，從而促進細胞凋亡。綜上所述，艾灸預處理可以通過調節線粒體信號途徑的不同靶點來調控細胞凋亡，從而發揮對胃黏膜損傷的保護作用。

3 評述

以穴位為基礎的艾灸預處理對胃黏膜損傷的保護作用，不僅與胃黏膜細胞的增殖有關，而且與胃黏膜細胞的凋亡相關；而艾灸預處理對黏膜細胞增殖與凋亡的調節作用，是ERK信號通路、神經通路及線粒體信號通路等多通路協同調節的結果。但目前國內外學者對艾灸對胃黏膜損傷相關疾病的預保護作用研究，僅僅停留在于急性胃黏膜損傷的研究，因此，盡快開展以胃黏膜損傷為基礎的慢性萎縮性胃炎、胃癌等相關疾病的艾灸預保護研究對拓展艾灸的應用范圍，充分體現“逆針灸”在防治重大疾病中的作用具有深遠的意義。

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