持續氣道正壓通氣對阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征合并高血壓患者外周血淋巴細胞DNA的影響

史可云，謝婧，蔣建中，丁偉良，朱文嬌，馬鐵梁*

（江蘇大學附屬宜興醫院1．老年醫學科，2．中心實驗室，江蘇宜興214200）

持續氣道正壓通氣對阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征合并高血壓患者外周血淋巴細胞DNA的影響

史可云1，謝婧1，蔣建中1，丁偉良2，朱文嬌2，馬鐵梁2*

（江蘇大學附屬宜興醫院1．老年醫學科，2．中心實驗室，江蘇宜興214200）

目的：探討持續氣道正壓通氣（continuous positive airway pressure，CPAP）治療前后阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征（obstructive sleep apnea hypopnea syndrome，OSAHS）合并高血壓患者外周血淋巴細胞DNA損傷的變化和意義。方法：采用多導睡眠儀對確診的53例OSAHS患者（OSAHS組，包括單純OSAHS 27例，合并高血壓26例），以及體檢健康志愿者33例（對照組）進行睡眠監測。使用Epworth嗜睡量表（Epworth sleepiness scale，ESS）評估患者白天嗜睡狀況和睡眠呼吸暫停的嚴重程度，用胞質阻滯法（cytokinesis blocked micronucleus，CBMN）檢測外周血淋巴細胞DNA損傷情況。結果：與對照組比較，OSAHS組呼吸暫停低通氣指數（apnea-hypopnea index，AHI）、外周血淋巴細胞微核率、染色體橋率和核芽率均明顯升高，而夜間最低血氧飽和度（LSpO2）、夜間平均血氧飽和度（MSpO2）明顯降低（P＜0．05或P＜0．01）。治療前，與單純OSAHS患者比較，合并高血壓患者AHI明顯升高（P＜0．01），而MSpO2及LSpO2明顯降低（P＜0．05）；而治療后，OSAHS組患者AHI、ESS、血壓、微核率、染色體橋率、核芽率均明顯降低，而LS-pO2、MSpO2明顯升高（P＜0．05或P＜0．01）。合并高血壓組治療后的MSpO2明顯低于單純OSAHS組（P＜0．01）。結論：CPAP可減輕OSAHS患者外周血淋巴細胞的DNA損傷，緩解高血壓癥狀，其機制可能與CPAP對患者心血管功能的改善有關。

高血壓；阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征；DNA損傷；持續氣道正壓通氣；淋巴細胞

阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征（obstructive sleep apnea hypopnea syndrome，OSAHS）以患者睡眠過程中的短暫呼吸停滯、夜間間歇缺氧以及反復上呼吸道阻塞為特點，往往會導致血氧飽和度降低并且患者反復覺醒。該病使正常睡眠中斷，從而影響患者白天精神狀態，進而導致生活質量降低。在一般人群中，有3%～7%的人會受到OSAHS的影響［1－2］，而有研究顯示，OSAHS和高血壓、心血管疾病有關，OSAHS患者常常伴有高血壓［3－4］。對于OSAHS的治療，最有效的手段是持續氣道正壓通氣（continuous positive airway pressure，CPAP），但是具體機制不明。因此，本研究使用胞質阻滯法檢測OSAHS合并高血壓患者外周血淋巴細胞微核的發生率［5］，期望從遺傳學角度獲得治療OSAHS的線索，以提高患者的生活質量。

1 對象與方法

1．1 對象

53例OSAHS患者均為2011年10月至2013年 12月在江蘇大學附屬宜興醫院呼吸內科初診的住院病例，均有睡眠時打鼾、呼吸暫停、白天嗜睡癥狀，經多導睡眠儀（polysomnography，PSG）進行睡眠監測獲得確診，包括單純OSAHS 27例，合并高血壓26例，年齡38～67（51．5±9．6）歲，體質量指數（body mass index，BMI）平均為（27．6±4．2）kg／m2。OSAHS的診斷依據中華醫學會呼吸病學分會睡眠呼吸疾病學組診斷標準［6］，高血壓診斷依據《中國高血壓防治指南2010》診斷標準［7］，并在確診后排除腎源性等繼發性高血壓。另選取同期在我院體檢的健康志愿者33例，年齡35～67（50．7±9．5）歲，BMI（25．5±2．0）kg／m2；經詢問病史、進行相關檢查及整夜PSG監測，排除OSAHS［睡眠呼吸暫停低通氣指數（apnea hypopnea index，AHI）＜5次／h］。所有研究對象均排除其他慢性呼吸系統疾病、代謝系統疾病、腎臟疾病、感染性疾病和其他系統慢性疾病，未使用過抗炎、抗凝等藥物，從未服用過對血壓、睡眠有影響的藥物。全部研究對象均知情同意。

1．2 方法

1．2．1 多導睡眠呼吸監測 采用美國偉康公司生產的Alice24 PSG記錄儀進行夜間PSG監測≥7 h。檢查前24 h內禁服安眠藥、酒、茶和咖啡等，且1周內無上呼吸道感染等疾病感染史。采用AHI、夜間平均血氧飽和度（mean pulse oxygen saturation，MS-pO2）、夜間最低血氧飽和度（lowest pulse oxygen saturation，LSpO2）、收縮壓和舒張壓反映患者疾病的客觀嚴重程度。使用Epworth嗜睡量表（Epworth sleepiness scale，ESS）［8］評估患者白天嗜睡狀況和睡眠呼吸暫停的嚴重程度。

1．2．2 治療 經鼻持續氣道正壓通氣（nasal continuous positive airway pressure，nCPAP）治療持續2周，每日治療時間控制在8 h左右。

1．2．3 胞質阻滯法（cytokinesis blocked micronucleus assay，CBMN）檢測外周血淋巴細胞DNA損傷狀態 用抗凝管采集靜脈血1．0 mL，在采血后使用1640混合培養基在細胞培養箱中培養（Hyclone公司）44 h，加細胞松弛素B（美國Sigma公司），終質量濃度6μg／mL，繼續培養72 h。1 000 r／min離心5 min，吸去上清液，留下約0．5 mL，加入7 mL已4℃預冷的0．075 mol／L KCl溶液，充分混勻。加入新配制的固定液（甲醇∶冰醋酸為3∶1）5 mL固定，立即1 000 r／min離心8 min，去上清液。同法固定2次，吸盡上清液，加入固定液0．2～0．5 mL，混勻后滴片，Giemsa染色8 min后，取出用水沖洗，自然干燥，盡量使用同一批次的試劑。鏡檢：計數1 000個雙核細胞，計算微核率（‰）、染色體橋率（‰）、核芽率（‰）［7］，采用雙盲法進行統計。

1．3 統計學處理

應用SPSS 12．0統計軟件分析數據，計量數據以均數±標準差±s）表示，兩組間的比較使用t′檢驗，CPAP治療前后的比較使用配對t檢驗，P＜0．05為差異有統計學意義。

2 結果

2．1 一般情況

OSAHS組患者年齡、BMI和性別與對照組間的差異無統計學意義（P均＞0．05），而AHI、ESS總分均比對照組明顯升高，LSpO2、MSpO2則明顯降低（P均＜0．01）。見表1。

表1 兩組患者一般資料 ±s

組別 性別（男／女） （次／h） ESS總分 LSpO2（%）AHI MSpO2（%）收縮壓（mmHg）舒張壓（mmHg ）對照組 33（17／16） 3．4±0．7 6．8±1．6 91．9±1．3 95．2±2．7 120．7±8．5＜0．01 ＜0．01 ＜0．01 ＜0．01 ＜0．01 ＜0．01 74．1±7．5 OSAHS組 53（30／23） 41．6±26．3 12．5±4．4 69．6±11．7 87．5±6．3 135．4±16．1 86．9±13．8 t′ 10．582 8．640 －13．746 －9．624 6．778 5．549 P

2．2 微核率、染色體橋率、核芽率的比較

OSAHS組治療前的微核率、染色體橋率和核芽率均明顯高于對照組（P＜0．05），且OSAHS合并高血壓患者又明顯高于單純OSAHS組。經CPAP治療后，所有OSAHS患者的微核率、染色體橋率和核芽率均明顯下降（P＜0．05）。見表2。

表2 OSAHS患者治療前后外周血淋巴細胞DNA損傷指標 ±s，‰

a：P＜0．05，b：P＜0．01，與對照組比較；c：P＜0．01，與治療前比較；d：P＜0．05，與單純OSAHS組比較

微核率 染色體橋率 核芽率治療前 治療后 治療前 治療后 治療前 治療后對照組 33 12．6±5．4 — 4．0±2．1 — 3．6±2．9組別n—OSAHS組 53 38．8±10．0b 18．1±4．1c 7．4±6．0b 3．6±3．0c 7．6±4．1a 4．7±2．7c單純OSAHS組 27 36．7±9．4 17．7±3．9c 5．8±4．8 3．0±2．6c 6．9±3．8 3．8±2．1c合并高血壓組 26 41．0±10．2d 18．5±4．3c 9．0±6．7d 4．3±3．3c 8．5±4．3d 5．7±2．9c

2．3 各組臨床療效比較

與治療前比較，單純OSAHS和合并高血壓患者治療后AHI、ESS和血壓明顯降低，而LSpO2、MSpO2明顯升高（P＜0．05或P＜0．01）。治療前，與單純OSAHS患者比較，合并高血壓患者AHI明顯升高（P＜0．01），而MSpO2及LSpO2顯著降低（P＜0．05）；而治療后，與單純OSAHS患者組比較，合并高血壓患者組僅有MSpO2較低（P＜0．01），其他指標則無明顯差異（P＞0．05）。見表3。

表3 各組OSAHS患者療效比較 ±s

a：P＜0．05，b：P＜0．01，與單純OSAHS組治療前比較

組別 n治療 AHI（次／h） （kg／m2） ESS LSpO2（%）BMI MSpO2（%）收縮壓（mmHg）舒張壓（mmHg ）6．3 135．4±16．1 86．9±13．8后 28．9±16．7 27．7±4．1 8．9±2．8 80．8±6．1 91．4±2．6 127．6±12．4 81．9±10．4 t 6．834 －1．292 8．275 －8．964 －5．053 4．970 5．148 P ＜0．01 0．202 ＜0．01 ＜0．01 ＜0．01 ＜0．01 ＜0．01單純OSAHS組27前 24．6±15．1 27．6±3．5 11．5±4．3 76．1±9．3 89．6±3．9 122．7±11．1 76．0±9．8后 21．3±13．3 27．6±3．5 8．4±2．4 83．5±3．4 92．1±1．7 120．9±9．4a 74．5±8．3 t 2．877 1．442 4．907 －4．461 －3．132 2．178 2．126 P ＜0．01 0．161 ＜0．01 ＜0．01 ＜0．01 ＜0．05 ＜0．05合并高血壓組26 前 59．3±23．8b 27．7±4．7 13．7±4．4 62．7±10．0a 85．3±7．5b 145．6±8．6b 98．3±5．6b后 36．9±16．4 27．7±4．7 9．5±3．1 77．9±6．9 90．7±3．1b 134．6±11．2 89．6±5．5 t 9．333 －1．335 6．957 －9．734 －4．141 5．405 5．554 P OSAHS組 53前 41．6±26．3 27．6±4．2 12．5±4．4 69．6±11．7 87．5±＜0．01 0．194 ＜0．01 ＜0．01 ＜0．01 ＜0．01 ＜0．01

3 討論

OSAHS患者在睡眠過程中上氣道坍塌阻塞，使得呼吸反復暫停，并有血氧飽和度下降等病理生理改變。間歇性低氧導致機體產生較多的氧自由基而打破原有的氧平衡，進而引起氧化應激［9］，進一步導致心血管疾病的發生［10］。氧化應激會導致DNA鏈斷裂損傷，并且修復能力下降，最后影響染色體的穩定性［11］。Konstantina等［12］研究發現，OSAHS患者的外周血淋巴細胞的DNA受損，而我們前期的研究結果顯示OSAHS患者外周血淋巴細胞具有較高的微核發生率，而且微核率隨OSAHS的嚴重程度而升高［13］。本研究結果亦發現，與單純OSAHS組比較，OSAHS合并高血壓患者的微核率、染色體橋率及核芽率3個指標明顯升高，說明OSAHS患者機體中由于間斷缺氧引起了較為嚴重的DNA氧化損傷，且這種損傷由于高血壓的發生而更加嚴重。

CPAP為目前治療OSAHS的常規方法，通過增加咽腔內的正壓來對抗吸氣負壓，從而阻止氣道塌陷［14］。研究發現，CPAP治療后OSAHS患者許多氧化應激指標趨于正常，如硝基酪氨酸、COX2［15］、蛋白質硝基［16］、羰基［17］及丙二醛［18］等。本研究結果顯示，OSAHS患者使用CPAP治療后的微核率、染色體橋率及核芽率明顯下降，說明治療使得機體的氧化應激水平有一定的下降，DNA損傷程度減輕，這可能與CPAP改善了患者夜間間斷缺氧狀態有關。

研究顯示，CPAP能降低OSAHS合并高血壓患者的高血壓程度［19］，且具有潛在的預防OSAHS合并高血壓患者心血管并發癥的效果［20］。有研究發現，CPAP不但可明顯改善患者白天嗜睡癥狀，而且可能會降低高血壓或心血管事件的發生率［21－22］。OSAHS患者高血壓的發生機制還不明確，有研究認為高血壓是化學感受器受刺激從而增加交感神經張力而導致［23－24］。CPAP可以降低交感神經張力，改善低氧血癥，防止胸腔壓力波動［25－26］，進而降低OSAHS患者的血壓。我們的研究結果也顯示，對于合并高血壓的OSAHS患者，CPAP對高血壓有一定的治療作用，從而使治療后的血壓與單純OSAHS組患者差異減小。CPAP對高血壓癥狀的緩解，也體現在兩組間治療后微核率、染色體橋率的差值較治療前變小。由于微核實驗中的核芽率并非染色體損傷的指標，因此我們的結果中兩組核芽率間差異并不明顯［13］。

此外，有研究發現，CPAP治療至少需要超過4 h／夜，且應長期堅持［27］。我們的結果也提示，經過2周的CPAP治療，OSAHS合并高血壓患者的血壓、微核率、染色體橋率等指標較治療前明顯下降，但與對照組比較，仍然較高。因此，對于OSAHS患者，CPAP是一個需要長期堅持的措施。

綜上所述，間斷缺氧導致OSAHS患者外周血淋巴細胞DNA損傷，這種損傷由于高血壓的發生而更加嚴重。作為治療OSAHS的常規手段，CPAP在治療OSAHS的同時，使機體DNA損傷降低，同時緩解高血壓癥狀，這可能與氧化應激導致的心腦血管等靶器官損害的發病機制相關。

［1］ Durán J，Esnaola S，Rubio R，et al．Obstructive sleep apnea-hypopnea and related clinical features in a population-based sample of subjects aged 30 to 70 yr［J］．Am JRespir Crit Care Med，2001，163（3）：685－689．

［2］ Punjabi NM．The epidemiology of adult obstructive sleep apnea［J］．Proc Am Thorac Soc，2008，5（2）：136－143．

［3］ Peppard PE，Young T，Palta M，et al．Prospective study of the association between sleep-disordered breathing and hypertension［J］．N Engl JMed，2000，342（19）：1378－1384．

［4］ O′Connor GT，Caffo B，Newman AB，etal．Prospective study of sleep-disordered breathing and hypertension：the Sleep Heart Health Study［J］．Am J Respir Crit Care Med，2009，179（12）：1159－1164．

［5］ Fenech M．Cytokinesis-block micronucleus cytome assay［J］．Nat Protoc，2007，2（5）：1085－1104．

［6］ 中華醫學會呼吸病學分會睡眠呼吸障礙學組．阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征診治指南：2011年修訂版［J］．中華結核和呼吸雜志，2012，35（1）：9－12．

［7］ 中國高血壓防治指南修訂委員會．中國高血壓防治指南2010［J］．中華高血壓雜志，2011，19（8）：701－743．

［8］ Johns MW．A new method formeasuring daytime sleepiness：the Epworth sleepiness scale［J］．Sleep，1991，14（6）：540－545．

［9］ Svatikova A，Wolk R，Lerman LO，et al．Oxidative stress in obstructive sleep apnoea［J］．Eur Heart J，2005，26（22）：2435－2439．

［10］ Yamauchi M，Kimura H．Oxidative stress in obstructive sleep apnea：putative pathways to the cardiovascular complications［J］．Antioxid Redox Signal，2008，10（4）：755－768．

［11］ Moller P，Loft S，Lundby C，et al．Acute hypoxia and hypoxic exercise induce DNA strand breaks and oxidative DNA damage in humans［J］．FASEB J，2001，15（7）：1181－1186．

［12］ Konstantina K，Niki M，Konstantinos C，et al．DNA damage and repair capacity in lymphocytes from obstructive sleep apnea patients［J］．Environ Mol Mutagen，2007，48（9）：722－727．

［13］ 謝婧，張學良，任茜，等．阻塞性睡眠呼吸暫停低通氣綜合征患者外周血淋巴細胞的DNA損傷及意義［J］．臨床薈萃，2010，25（2）：108－111．

［14］ BarbéF，Durán-Cantolla J，Sánchez-de-la-Torre M，et al．Effect of continuous positive airway pressure on the incidence of hypertension and cardiovascular events in nonsleepy patients with obstructive sleep apnea：a randomized controlled trial［J］．JAMA，2012，307（20）：2161－2168．

［15］ Jelic S，Padeletti M，Kawut SM，et al．Inflammation，oxidative stress，and repair capacity of the vascular endothelium in obstructive sleep apnea［J］．Circulation，2008，117（17）：2270－2278．

［16］ Karamanll H，Ozol D，Ugur KS，et al．Influence of CPAP treatment on airway and systemic inflammation in OSAS patients［J］．Sleep Breath，2014，18（2）：251－256．

［17］ Jurado-Gamez B，Gomez-Chaparro JL，Mu?oz-Calero M，et al．Serum proteomic changes in adults with obstructive sleep apnoea［J］．JSleep Res，2012，21（2）：139－146．

［18］ Jordan W，Cohrs S，Degner D，etal．Evaluation of oxidative stress measurements in obstructive sleep apnea syndrome［J］．JNeural Transm，2006，113（2）：239－254．

［19］ Dorkova Z，Petrasova D，Molcanyiova A，et al．Effects of continuous positive airway pressure on cardiovascular risk profile in patients with severe obstructive sleep apnea and metabolic syndrome［J］．Chest，2008，134（4）：686－692．

［20］ BarbéF，Durán-Cantolla J，Capote F，et al．Long-term effectof continuous positive airway pressure in hypertensive patients with sleep apnea［J］．Am J Respir Crit Care Med，2010，181（7）：718－726．

［21］ Hedner J，Grote L．The link between sleep apnea and cardiovascular disease：time to target the nonsleepy sleep apneics？［J］．Am JRespir Crit Care Med，2001，163（1）：5－6．

［22］ Marin JM，Carrizo SJ，Vicente E，etal．Long-term cardiovascular outcomes in men with obstructive sleep apnoea hypopnoea with or without treatment with continuous positive airway pressure：an observational study［J］．Lancet，2005，365（9464）：1046－1053．

［23］ Lesske J，Fletcher EC，Bao G，et al．Hypertension caused by chronic intermittent hypoxia influence of chemoreceptors and sympathetic nervous system［J］．J Hypertens，1997，15（12 Pt2）：1593－1603．

［24］ Cooper VL，Elliott MW，Pearson SB，et al．Daytime variability of baroreflex function in patients with obstructive sleep apnoea：implications for hypertension［J］．Exp Physiol，2007，92（2）：391－398．

［25］ Hedner J，Darpo B，Ejnell H，et al．Reduction in sympathetic activity after long-term CPAP treatment in sleep apnoea：cardiovascular implications［J］．Eur Respir J，1995，8（2）：222－229．

［26］ Narkiewicz K，Kato M，Phillips BG，et al．Nocturnal continuous positive airway pressure decreases daytime sympathetic traffic in obstructive sleep apnea［J］．Circulation，1999，100（23）：2332－2335．

［27］ Pepperell JCT，Ramdassingh-Dow S，Crosthwaite N，et al．Ambulatory blood pressure after therapeutic and subtherapeutic nasal continuous positive airway pressure for obstructive sleep apnoea：a randomised parallel trial［J］．Lancet，2002，359（9302）：204－210．

R562

A

1671－7783（2014）05－0441－04

10．13312／j．issn．1671-7783．y140167

宜興市科技基金資助項目（宜科字［2013］59號）

*：通訊作者，助理研究員，E-mail：matieliang＠foxmail．com

2014－06－11 ［編輯］ 陳海林