不同等級(jí)杭白芍中3個(gè)有效成分的考察

杜偉鋒， 胡淑珍， 吳 芳， 來平凡， 葛衛(wèi)紅

（1.浙江中醫(yī)藥大學(xué) 中藥炮制技術(shù)研究中心，浙江 杭州 311401； 2.富陽市科技信息中心， 浙江 杭州311401）

不同等級(jí)杭白芍中3個(gè)有效成分的考察

杜偉鋒1， 胡淑珍2， 吳 芳1， 來平凡1， 葛衛(wèi)紅1

（1.浙江中醫(yī)藥大學(xué) 中藥炮制技術(shù)研究中心，浙江 杭州 311401； 2.富陽市科技信息中心， 浙江 杭州311401）

目的 比較不同等級(jí)杭白芍藥材中兒茶素、 芍藥內(nèi)酯苷、 芍藥苷3個(gè)有效成分的量。 方法 參照 《七十六種藥材商品規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)》將所收集的杭白芍分為六個(gè)等級(jí)，采用高效液相色譜法測定杭白芍中3個(gè)有效成分的量。結(jié)果 不同等級(jí)的杭白芍藥材中 3 個(gè)成分的量沒有規(guī)律性， 以芍藥苷為例， 六等品樣品 (2-6) 中芍藥苷的量最高， 遠(yuǎn)高于一等品 (2-1) 樣品中的芍藥苷的量。 結(jié)論 目前， 杭白芍的等級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)不能全面的反映杭白芍的自身品質(zhì)， 也不符合按質(zhì)論價(jià)的商業(yè)需求，應(yīng)該結(jié)合藥材中成分含有量來制定藥材規(guī)格等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)。

等級(jí)；杭白芍；兒茶素；芍藥內(nèi)酯苷；芍藥苷

杭白芍是著名的 “浙八味” 之一，主產(chǎn)于浙江金華磐安和東陽。市售杭白芍按照 《七十六種藥材商品規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)》分為不同規(guī)格等級(jí)，均是按照杭白芍的質(zhì)地、斷面、顏色、長度、中部直徑為依據(jù)，未涉及到藥材所含成分的量，然而，成分含有量是藥材質(zhì)量的重要體現(xiàn)。杭白芍的等級(jí)劃分與成分含有量是否存在一定的正相關(guān)，尚不得而知，需要我們進(jìn)一步研究。 《中國藥典》 規(guī)定， 杭白芍主要質(zhì)控成分是芍藥苷［1］， 但以芍藥苷這單一指標(biāo)的質(zhì)控模式過 于片面［2-3］， 介于 此， 陸續(xù)開 展了以多成分指標(biāo)控制白芍藥材質(zhì)量的研究［4-15］。 本 實(shí)驗(yàn)在前期研究的基礎(chǔ)上，選取兒茶素、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷等3個(gè)成分作為杭白芍的質(zhì)控指標(biāo)，對(duì)不同等級(jí)的杭白芍藥材質(zhì)量進(jìn)行考察，以期探尋等級(jí)劃分與成分含有量的相關(guān)性。

1 儀器與試藥

1.1 儀 器 Agilent1200 型系 列 高 效 液 相 色 譜 儀(美國 Agilent公司)， 包括 G1312A 四元梯度泵、G1313A自動(dòng)進(jìn)樣器、 G1316A柱溫箱、 G1315A二極管陣列 檢 測 器，Chemstation 6.01 色 譜 工 作 站；KQ-250B超聲波清洗器 ( 昆山市超聲儀器有限公司)； TGL-16C高速臺(tái)式離心機(jī)； DFT-200 手提式高速中藥粉碎機(jī) (溫嶺市林大機(jī)械有限公司制造)； DHG型電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱 (上海一恒科技有限公司)； AL204 電子天平、 XS105 分 析天平(梅特勒-托利多儀器 (上海) 有限公司)； MB45型快速水分測定儀。

1.2 試劑 兒茶素、 芍藥內(nèi)酯苷、 芍藥苷等對(duì)照品，均購自中國藥品生物制品檢定所 (批號(hào)分別為:877-200001、 01420110801、 111736-200934)；無水乙醇、甲醇、磷酸均為分析純，甲醇、乙腈為色譜純，水為哇哈哈純凈水。

1.3 樣品 杭白芍藥材共 11 批， 購自浙江中醫(yī)藥大學(xué)中藥飲片有限公司，來源為浙江不同產(chǎn)地，采集時(shí)間在當(dāng)年6月下旬至7月上旬間，經(jīng)鑒定為白芍 Paeonia lactiflora Pall.三年 生的干燥根。 參照《七十六種藥材商品規(guī)格標(biāo)準(zhǔn)》 將所收集的杭白芍分為六個(gè)等級(jí)， 杭白芍樣品分別記為 1-1、 1-2…1-6； … 11-1、 11-2…11-6。

2 方法與結(jié)果

2.1 樣品處理 杭白芍原藥材洗凈， 除去頭尾和細(xì)根，置沸水中水煮透心后除去外皮，切片，曬干，打粉過4號(hào)篩。

2.2 供試品溶液的制備 取杭白芍粉末 0.1 g，精密稱定， 置于 250 mL錐形瓶中， 精密加入稀乙醇25 mL， 超聲提取 30 min， 放冷至室溫后， 補(bǔ)足損失質(zhì)量， 取續(xù)濾液 15 000 r/min 高速離心，上清液過 0.45 μm微孔濾膜， 得供試液。

2.3 對(duì)照品溶液的制備 精密稱取芍藥苷、 芍藥內(nèi)酯苷、兒茶素3種對(duì)照品適量，置于適量棕色量瓶中，加甲醇溶解并定容至刻度，作為對(duì)照品混標(biāo)貯備液， 3 個(gè)對(duì)照品的質(zhì)量濃度分別為 1 750、 67、67 μg/m L。

2.4 色譜條件 Agilent1200 高效液相色譜儀； Agilent ZORBAX SB-C18色譜 柱 (4.6 mm×250 mm， 5 μm)； 檢測波長 230 nm； 體積流量 1 mL/min； 柱溫30 ℃； 進(jìn)樣量 10 μL； 流動(dòng)相為乙腈-0.1%磷酸溶液 (86 ∶14)， 洗脫時(shí)間 16min。 色譜圖， 見圖 1。

圖1 對(duì)照品 （A） 和樣品溶液 （B） 的 HPLC色譜圖Fig.1 HPLC chromatograms ofm ixed reference substances（ A） and the crude sample（ B）

2.5 方法學(xué)考察

2.5.1 標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制 分別準(zhǔn)確吸取一定量的混標(biāo)貯備液，置量瓶中，并加甲醇稀釋定容，配制成7個(gè)不同質(zhì)量濃度的混合對(duì)照品溶液，芍藥苷分別為 87.5、 175、 350、 700、 875、 1 400、 1 750 μg/mL， 芍 藥 內(nèi) 酯 苷 分 別 為 3.35、 6.7、 13.4、26.8、 33.5、 53.6、67 μg/mL， 兒 茶 素 分 別 為3.35、 6.7、 13.4、 26.8、 33.5、 53.6、 67 μg/mL。在本實(shí)驗(yàn)色譜條件下，各質(zhì)量濃度對(duì)照品溶液分別進(jìn)樣 10 μL。 以峰面積(y)對(duì)質(zhì)量濃度 (x，μg/mL)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程:兒茶素 y= 27.421x+5.781 4， r=0.999 9， 線性范圍 3.35 ～67.00 μg/mL； 芍藥內(nèi)酯苷 y=26.76x+6.047 3，r=0.999 7， 線性范圍 3.35 ～67.00 μg/mL； 芍藥苷y=1.221x+15.082， r=0.999 9， 線 性 范 圍87.50 ～1 750.00 μg/mL。

2.5.2 精密度試驗(yàn) 稱取 1 份杭白芍樣品 (編號(hào)11-1)0.1 g， 精密稱定， 按供試液制備方法制備供試液，注入高效液相色譜儀，連續(xù)進(jìn)樣6次測定，測得兒茶素、芍藥內(nèi)酯苷、芍藥苷的峰面積RSD分別為 0.64%、 0.27%和 0.12%。 表明儀器精密度良好。

2.5.3 重復(fù)性試驗(yàn) 稱取 6 份杭白芍樣品 (編號(hào)11-1) 各 0.1 g，精密稱定，按供試液制備方法制備供試液，注入高效液相色譜儀進(jìn)行測定，測得兒茶素、 芍藥內(nèi)酯苷、 芍藥苷的 RSD分別為 1.51%、0.33%和 0.15%。 表明該方法的重復(fù)性良好。

2.5.4 穩(wěn)定性試驗(yàn) 稱取 1 份杭白芍樣品 (編號(hào)11-1)0.1 g， 精密稱定， 按供試液制備方法制備供試液， 注入高效液相色譜儀， 分別在 0、 2、 4、6、 8、12 h 進(jìn)樣進(jìn)行檢測，測得兒茶素、 芍藥內(nèi)酯苷、 芍 藥 苷 的 峰 面 積 RSD 分 別 為 1.37%、0.20%和 0.20%。 表明該法穩(wěn)定可靠。

2.5.5 加樣回收率試驗(yàn) 稱取已知各成分含有量的杭白芍樣品粉末 0.05 g(11-1 樣品)， 精密稱定，共6份，分別加入一定量的兒茶素、芍藥內(nèi)酯苷、 芍藥苷對(duì)照品，樣品制備方法同 “2.2” 項(xiàng)，測定各成分，計(jì)算加樣回收率。 結(jié)果見表1。

表 1 加樣回收率試驗(yàn)結(jié)果 （n=6）Tab.1 Result of recovery tests（n=6）

2.6 樣品分析 按 “2.2”項(xiàng)下方法制備不同等級(jí)的杭白芍樣品的供試液， 進(jìn)樣10 μL分析， 用標(biāo)準(zhǔn)曲線法測定3個(gè)成分。 結(jié)果見表2。

表 2 不同等級(jí)杭白芍中 3 種成分的測定結(jié)果 （n=3）Tab.2 Contents of the 3 maker com pounds in differen t grades of Hangzhou white peony （ n=3）

3 討論

3.1 本實(shí)驗(yàn)建立了同時(shí)定量測定杭白芍中芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷和兒茶素等 3 個(gè)成分的 HPLC分析方法，該法穩(wěn)定可靠，重復(fù)性、精密度、穩(wěn)定性及加樣回收率結(jié)果都良好，可以用于多指標(biāo)評(píng)價(jià)白芍質(zhì)量。

3.2 中藥材具有藥用性和商品性的雙重特性， 中藥材的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)該在保證藥材藥用安全有效的同時(shí)能夠滿足商品按質(zhì)論價(jià)的要求。 通過對(duì)11批杭白芍六個(gè)等級(jí)中芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷和兒茶素3個(gè)成分的測定發(fā)現(xiàn):芍藥苷、芍藥內(nèi)酯苷和兒茶素3個(gè)成分的量與杭白芍的等級(jí)不成正比。以芍藥苷為例，等級(jí)最高的杭白芍，芍藥苷的量未必最高，六等品樣品 (編號(hào) 2-6) 中芍藥苷的量最高， 遠(yuǎn)高于一等品 (編號(hào) 2-1) 樣品中的芍藥苷的量。 兒茶素和芍藥內(nèi)酯苷的量與等級(jí)之間亦無規(guī)律可循。按照目前杭白芍的等級(jí)劃分標(biāo)準(zhǔn)，不能全面反映杭白芍的自身品質(zhì)，也不符合按質(zhì)論價(jià)的商業(yè)需求。筆者建議，制定藥材規(guī)格等級(jí)標(biāo)準(zhǔn)時(shí)，應(yīng)該結(jié)合藥材的指標(biāo)性成分含量，綜合控制藥材質(zhì)量。

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Sim ultaneous determ ination of three active constituents in different grades of Hangzhou white peony

DUWei-feng1， HU Shu-zhen2， WU Fang1， LAIPing-fan1， GEWei-hong1

(1.Research Center of TCM Processing Technology， Zhejiang University of Chinese Medicine， Hangzhou 311401， China； 2.Fuyang Science and Technology Information Center， Hangzhou 311401， China)

AIM To determine and compare the contents of catechin， albiflorin， and paeoniflorin in different grades of Hangzhou white peony.METHODS Reference to“seventy-six kinds ofmedicinalmaterials commodity specifications” ， the samples of Hangzhou white peony were divided into six grades.The contents of three components in different grade samples were determined by HPLC.RESULTS The contents of three components in different grades of Hangzhou white peony had no regularity.HPLC data showed that the paeoniflorin content in the sixth-grade sample(2-6)presented the highest， much hipher than that in the first-grade(2-1).CONCLUSION At present， traditional grading standards neither reflects the quality of Hangzhou white peony， normeetsbusiness requirements of″quality deciding price″.Therefore， it is suggested that the grading standards of Chinesemedicinal materials should be established in combination with the contents of active components.

grades； Hangzhou white peony； catechin； albiflorin；paeoniflorin

R284.1

:A

:1001-1528(2014)02-0358-05

10.3969/j.issn.1001-1528.2014.02.031

2013-04-18

國家自然科學(xué)基金 (81303224)； 浙江省中醫(yī)藥科學(xué)研究基金計(jì)劃 (2012ZB032， 2013ZA027)； 浙江省教育廳科研計(jì)劃(Y201224449)； 浙江省中藥現(xiàn)代化專項(xiàng) (浙經(jīng)信醫(yī)化 ［2012］ 237 號(hào))

杜偉鋒 (1984—) ， 男， 助理研究員， 從事中藥分析和質(zhì)量控制研究。 Tel:(0571)87195915， E-mail:duweifeng-200158@ sohu.com