布魯氏菌病血清學診斷靶點的研究進展

夏淑婷(綜述)，王 鵬，宋志忠(審校)

布魯氏菌病(Brucellosis，簡稱布病)是一種全世界廣泛分布的人獸共患慢性細菌性傳染病。人間布病是我國法定乙類傳染病，人患病后，累及多種器官功能，病程較長，久治不愈，嚴重者喪失勞動和生活能力。布病防控的關鍵在于“三早”，“三早”的前提則是診斷。在布病診斷上，由于其臨床癥狀易與類風濕性關節炎、病毒性肝炎、結核、流行性感冒及各種骨關節病相混淆，僅依靠臨床癥狀的誤診率仍然較高[1-7]，只有通過實驗室檢測才能確診。

傳統的布病實驗室檢測主要依賴于細菌分離培養直接查到病原體，該方法耗時耗力，且實驗室操作存在潛在的危險性，并不實用；隨著技術的發展，用于人畜布病的血清學診斷方法已有試管凝集(SAT)、虎紅平板凝集(RBPT)、補體結合試驗(CFT) 、酶聯免疫吸附試驗(ELISA)、膠體金標試驗(GICA)等近十種[8-9]，血清學診斷操作較為簡便，也較為快速，已逐漸成為布病診斷最為常用的手段。診斷靶點則是診斷方法的核心，其決定了診斷的特異性及敏感性，迄今布病的診斷靶點分為三類，即脂多糖(LPS)、外膜蛋白(OMPs)及其它菌體蛋白。現將各診斷靶點做一簡述。

1 脂多糖(LPS)

布魯氏菌LPS有3個區域：類脂A、核心低聚糖和O抗原或O鏈，它的O鏈部分含有布魯氏菌表面絕大多數的抗原位點，是布魯氏菌表面最為主要抗原，根據LPS是否含有O鏈將布魯氏菌分為粗造型(rough，R)和光滑型(smooth，S)。研究表明O鏈表面有7個不同的抗原位點，它們分別是A、M、C(M=A)、C(M〉A)、C/Y(M〉A)、C/Y(M=A)、C/Y(A〉M)等，這7種抗原決定基在所有的S型布魯氏菌中分布不均一，且沒有各自特異性特征[10]，所以在采用血清學診斷布魯氏菌病時，不能區分是自然感染還是疫苗免疫。在這7個抗原位點中C/Y抗原是布魯氏菌和小腸結腸炎耶爾森菌O∶9共有的抗原[11]，其中C/Y(M=A)抗原與小腸結腸炎耶爾森菌O∶9共有最多的一種抗原決定基，因此布魯氏菌病以LPS為基礎的診斷與小腸結腸炎耶爾森氏菌O∶9存在嚴重的交叉反應[12]；另外，布魯氏菌的LPS與沙門氏菌、土拉倫菌、假單胞菌、霍亂弧菌以及大腸桿菌O∶157等細菌也有一定的交叉反應[13-16]。

盡管如此，LPS仍是迄今用于布病診斷最為常用的靶點[17]，在布病的防控中發揮著不可替代的作用。文獻報道的所用的全菌蛋白、粗制外膜蛋白、鹽析蛋白、酚鹽蛋白等[18-19]中，從其提取工藝上可看出，最主要的成分仍是LPS。使用LPS為靶點診斷時，應充分考慮臨床癥狀及與可能交叉菌的排除檢查。

2 外膜蛋白(OMPs)

外膜蛋白(OMPs)是革蘭氏陰性細菌的一類非常獨特但又非常重要的蛋白質，它們具有為外膜提供通透性，維持外膜結構穩定等作用，同時有些OMPs又是一類重要的免疫原性物質，能刺激機體產生免疫應答反應，因此成為免疫學中一種重要的診斷靶點。在布魯氏菌中，已有十幾種外膜蛋白被研究作為診斷靶點，主要的有BCSP31、BP26、Omp10、Omp25及Omp31等，它們與布魯氏菌病診斷存在交叉反應細菌中同源蛋白的氨基酸同源性大都在50%以下(BCSP31與沙門氏菌的同源蛋白氨基酸相似性達57%～58%)，詳見表1。下面就幾種主要的蛋白分述如下。

表1布魯氏菌免疫原性外膜蛋白與存在交叉反應細菌中同源蛋白的氨基酸相似性

Tab.1AminoacidsimilaritybetweenimmunogenicityoutermembraneproteinofBrucellaandthehomologousproteinofitscross-reactionbacteria

細菌(Bacteria)氨基酸相似性Amino acid similarity/%布魯氏菌(Brucella)BCSP31(330 aa)BP26(250 aa)Omp10(126 aa)Omp25(230 aa)Omp31(240 aa)耶爾森氏菌(Yersiniaa)26-2728-30﹨25-2624-36沙門氏菌(Salmonellab)57-5827-313825-3424-33弧菌(Vibrioc)36-3730-83﹨﹨23-69弗朗西斯菌(Francisellad)53﹨﹨﹨﹨

Note: a--Yersiniapestis,Yersiniapseudotuberculosis,Yersiniaenterocolitica;b--Salmonellaenterica,Salmonellatyphimurium;c--Vibriocholerae,Vibrioparahaemolyticus,Vibriovulnificus;d--Francisellatularensis.

2.1BCSP31該蛋白分子量大小約31 kD，為布魯氏菌細胞外膜蛋白，它抗原性強，具有保守性及多態性，且種間同源性較高，經證實牛、羊、豬布魯氏菌BCSP31基因同源性可達100%[20]。不同研究團隊的免疫蛋白質組學結果顯示，該蛋白既有良好的免疫反應性，又有較高的特異性[21-22]。在布魯氏菌的基因診斷中，BCSP31的編碼基因也被作為PCR診斷的主要靶點[23]。但有研究者利用蛋白芯片進行布魯氏菌蛋白免疫學檢測時，BCSP31的抗體只存在于感染的山羊血清中，而被測定的62份確認感染布病的人血清中并未發現其抗體[24]，這也提示該外膜蛋白作為診斷靶點在人群的檢測中并不適用。

2.2Omp10 該蛋白分子量大小為10 kDa，屬于菌體外膜脂蛋白，是布魯氏菌重要的免疫原性蛋白，存在于所有已知的布魯氏菌的種和生物型之中[25-26]。Omp10與布魯氏菌的毒力相關，有研究表明編碼基因的3′端具有138 bp的核酸序列與HemH亞鐵螯合酶相同，因此推測其與細菌對鐵的利用和生物合成有關，其具體的作用機制有待進一步的研究[27]。有關其作為診斷靶點進行研究的報道較少，且主要是國內的一些報道，在布魯氏菌相關免疫蛋白質組的報道中[21-22]，也找不到Omp10有關的信息。

2.3Omp25 該蛋白分子量大小為25 kDa，在維持布魯氏菌菌外膜結構穩定性中發揮著重要作用。其編碼基因在布魯氏菌種、生物型及各菌株中是一個高度保守(除綿羊附睪種布魯氏菌外同源性都在98%以上)。Omp25的氨基酸序列在與布病有交叉的細菌中又是最為特異。Boigegrain等[28]在分析布魯氏菌受到酸刺激分泌的蛋白質時發現， Omp25 也被分泌到了細胞外；這提示這種蛋白與布魯氏菌的膜分泌系統相關，其可分泌的特征一方面說明其可能在菌相關蛋白中占有較高的豐度，相關蛋白質組分析顯示其在2D圖譜上出現多個蛋白點[21]；另一方面，當布魯氏菌感染宿主時，其可游離的特性使其更易激發機體發生抗體。

2.4BP26又稱Omp28，分子量大小為26 kDa，為布魯氏菌細胞周質蛋白，BP26存在于所有的布魯氏菌菌株中，在布魯氏菌感染牛、綿羊、山羊和人中均為優勢免疫原，許多報道顯示其可以用來作為血清學檢測的靶蛋白，并有較高的準確率[29-31]；且有研究者采用蛋白芯片的方法發現，該蛋白在所的布魯氏菌蛋白質組中唯一可與感染的人及羊血清特異反應的靶點[24]。近來，BP26上兩個線性表位已經確認(93DRDLQTGGI101及104QPIYVYPD111)[32]，為進一步對該蛋白的免疫學分析提供了基礎。綜合上述信息，該蛋白在布病檢測上有較好的應用前景。

2.5Omp31 該蛋白分子量大小為25 kDa，該蛋白暴露于細菌表面，常以寡聚體形式存在，當溫度低于60 ℃時，具有SDS變性的能力。它在布魯氏菌不同種屬間非常保守，除流產布魯氏菌(B.Abortus)外，其它所有布魯氏菌種株都有表達[33-34]。Omp31可以誘導針對布魯氏菌感染的細胞免疫作用，同時布魯氏菌的Omp31有3個親水性氨基酸殘基片段，它還能引起保護性體液免疫反應[35]。已有以OMP31為基礎建立的免疫學檢測方法檢測布病的相關報道[36]，但在最近的蛋白芯片對感染人及山羊檢測的報道中，均未發現針對該蛋白抗體[24]，因此對該蛋白作為檢測靶點需進一步研究。

3 其它蛋白

除OMPs外，布魯氏菌中還有核蛋白L7/L12，伴侶蛋白GroEL及GroES，熱休克蛋白DnaK，以及超氧貨物歧化酶SOD等具有免疫原性，也是潛在的診斷靶點而被關注，但這些蛋白其它交叉細菌同源蛋白的氨基酸相似性大都達60%以上(表2)，這會一定程度上影響其作為布魯氏菌診斷的特異性。

表2布魯氏菌免疫原性菌體蛋白與存在交叉反應細菌中同源蛋白的氨基酸相似性

Tab.2AminoacidsimilaritybetweenimmunogenicitymycoproteinofBrucellaandthehomologousproteinofitscross-reactionbacteria

細菌(Bacteria)氨基酸相似性Amino acid similarity/%布魯氏菌(Brucella)DnaK637 aaGroEL546 aaSOD199 aaL7/L12124 aaGroES98 aa耶爾森氏菌(Yersiniaa)65606348-6945沙門氏菌(Salmonellab)66614943﹨弧菌(Vibrioc)62-6561-6250-5363-6642-43弗朗西斯菌(Francisellad)63596050﹨

Note: a--Yersiniapestis,Yersiniapseudotuberculosis,Yersiniaenterocolitica;b--Salmonellaenterica,Salmonellatyphimurium;c--Vibriocholerae,Vibrioparahaemolyticus,Vibriovulnificus;d--Francisellatularensis.

3.1L7/L12 該蛋白分子量大小為10 kDa左右，為布魯氏菌胞漿核蛋白，它是核糖體的重要組成部分，在細菌蛋白質合成過程中與延長因子相互作用，在布魯氏菌中它的基因同源性高達97.1%以上，免疫原性分析L7/L12只有第15至第35個氨基酸屬于疏水性氨基酸，剩余親水性氨基酸殘基占整個蛋白序列的80%以上[35]，且作為抗原決定簇構成了蛋白的主要部分，是T細胞優勢抗原。以其為基礎構建的疫苗對感染具有最顯著的抵抗作用[37-38]。因此該蛋白是一個潛在的診斷靶點。

3.2GroEL 該蛋白分子量大小為60 kDa左右，是微生物中參與蛋白損傷修復的重要蛋白，同時在壓力條件下保持蛋白的正常折疊中發揮重要作用。有研究者通過構建的布魯氏菌納米小體抗體文庫，發現文庫可特異性的識別伴侶蛋白GroEL，從而認為該蛋白是布魯氏菌的免疫主要蛋白[39]。其它研究者也發現，GroEL在對人及牛的感染中是一種重要的毒力因子，可與受布氏菌感染的人、牛及綿羊的血清反應[21-22,40]。但該蛋白進化中具有較高的保守性，因此單獨將此作為診斷靶點，可能影響診斷的特異性。

綜上所述，由于布魯氏菌是革蘭氏陰性菌，存在O特異性抗原，因此LPS仍然是布魯氏菌病診斷的最為重要的靶點，只是在做出診斷結論時要充分考慮交叉反應的問題，可以結合臨床癥狀與排除試驗加以確認。布魯氏菌蛋白為靶點的診斷是布病診斷的重要補充，是發展特異性診斷的努力方向。在蛋白靶點中外膜蛋白更是重點，而其它蛋白則又是補充。外膜蛋白中，從目前國內外研究進展看，BP26為首選靶點，BCSP31次之，后續為OMP25，OMP10，OMP31，其中OMP25與OMP31各一布魯氏菌的一個生物型中缺失。當然由于同一蛋白不同研究者不同的實驗條件，有些結果往往是相悖的，因此在研制診斷試劑時，全面的評價所有靶點，從中篩選實驗所得的較好靶點進行進一步研究是比較可靠的途徑。

參考文獻：

[1]Wang XM. Misdiagnosis analysis of 2 cases of brucellosis[J]. Clin Misdiagn Misther, 2010, 23(5): 466. (in Chinese)

王雪梅. 布魯桿菌病二例誤診分析[J].臨床誤診誤治, 2010,23(5): 466.

[2]Song LQ, Yue LY, Song GJ, et al. Misdiagnosis retrospectively analysis of a case of a case of brucellosis[J]. Clin Misdiagn Misther, 2007, 20(10): 57. (in Chinese)

宋麗琴, 岳麗英, 宋廣杰, 等.布氏桿菌病一例多次誤診回顧性分析[J]. 臨床誤診誤治, 2007,20(10): 57.

[3]Yang T, Wu B. Misdiagnosis analysis of 22 case of brucellosis[J]. Chin Clin Doctors, 2005, 33(6): 29-30. (in Chinese)

楊濤, 吳兵.布氏桿菌22例誤診分析[J].中國臨床醫生, 2005,33(6):29-30.

[4]Chang AN, Zhang WG, Huo XL, et al. Misdiagnosis analysis of 2 case of brucellosis[J]. Clin Misdiagn Misther, 2008, 21(6): 51. (in Chinese)

常愛娜, 張文貴, 霍星蕾, 等.布魯氏菌病二例誤診報告[J].臨床誤診誤治, 2008,21(6): 51.

[5]Zhang HY, Yu MX, Li XX. Misdiagnosed of brucellosis[J]. Beijing Med, 2008, 30(3): 144-146. (in Chinese)

張紅宇, 于孟雪, 李小霞.布魯菌病誤診分析[J]. 北京醫學, 2008,30(3):144-146.

[6]Song QS. Misdiagnosis analysis of 29 cases of brucellosis[J]. Chin J Misdiagn, 2008, 8(9): 2113-2114. (in Chinese)

宋青松.布魯氏菌病誤診29例分析[J].中國誤診學雜志, 2008,8(9): 2113-2114.

[7]Zhou WX, Luo YJ. Misdiagnosis analysis of 32 cases of brucellosis[J]. Chin J Prac Int Med, 2009, 29(6): 559. (in Chinese)

周文興, 羅英杰.布氏菌病32例誤診原因分析[J]. 中國實用內科雜志, 2009, 29(6): 559.

[8]Gao MH, Zhang ZY, Li Y. Advanced on the study of lab diagnosis method for brucellosis[J]. Chin J Zoonoses, 2010, 26(1): 81-83. (in Chinese)

高明華, 張志琰, 李躍. 布魯氏菌病實驗室診斷研究進展[J]. 中國人獸共患病學報, 2010,26(1): 81-83.

[9]Wang J, Xu WG. Advanced on the study of serodiagnosis methods for brucellosis[J]. Chin J Pathogn Biol, 2008, 3(2): 149-152. (in Chinese)

王佳, 徐衛國.布魯氏菌病血清學診斷研究進展[J].中國病原生物學雜志, 2008,3(2): 149-152.

[10]Mei JJ, Shi HY. Press on drug resistance macrocyclic lactone endectocides[J]. Progr Vet Med, 2005, 26(10): 13-18. (in Chinese)

梅建軍, 石慧英.布魯氏菌表面抗原研究進展[J]. 動物醫學進展, 2005,26(10): 13-18.

[11]Weynants V, Gilson DA, Cloeckaert A, et al. Characterization of smooth lipopolysaccharides and 0 poplysaccharides of brucella species by competition binding assay with mono clonal antibodies[J]. Infect Immun, 1997, 65: 1939-1943.

[13]Qing Y, Wang WD, Mu HTE, et al. The observation ofBrucellaand some species of bacteria between serological cross reaction observation[J]. Chin J Zoonoses, 1994, 10(4): 47-48. (in Chinese)

卿燕, 王偉導, 木合塔爾, 等.布魯氏菌與某些菌屬細菌之間血清學交叉反應觀察[J].中國人獸共患病學報, 1994, 10(4): 47-48.

[14]Corbel MJ, Stuart FA, Brewer RA. Observations on serological cross-reactions between smooth Brucella species and organisms of other genera[J]. Dev Biol Stand, 1984, 56: 341-348.

[15]Shang DQ, Yu ES, Zhao HY. Brucellosis experiment nonspecific reaction and its differential diagnosis[M]. Beijing: Maritime Press, 1995: 89-91, 97. (in Chinese)

尚德秋, 于恩庶, 趙恒云.布魯氏菌病實驗診斷的非特異性反應及其鑒定[M]. 北京:海洋出版社, 1995:89-91,97.

[16]Wang L. Shaanxi province found salmonella paratyphi a and severe brucella serological cross reaction[J]. Endem Dis Bull, 2004, 19(4): 52-53. (in Chinese)

王麗. 陜西省發現甲型副傷寒沙門氏菌與布魯氏菌存在嚴重血清學交叉反應[J]. 地立病通,2004,19(4):52-53.

[17]Laurent TC, Mertens P, Dierick JF, et al. Functional, molecular and structural characterisation of five anti-BrucellaLPS mAb[J]. Mol Immunol, 2004, 40: 1237-1247. DOI: 10.1016/j.molimm. 2003.11.037

[18]Li LM, Wang Y, Wang GZ. Evaluation on the effect of colloidal gold immunochroma to graphy rapid screen test for detection ofBrucellainfection[J]. Chin J Ctrl Enden Dis, 2006, 21(3): 148-150. (in Chinese)

李恪梅,王燕,王國治.布氏菌膠體金免疫層析快速檢測板使用效果評價[J].中國地方病防治雜志,2006, 21(3):148-150.

[19]Zhang XY, Wu YG, Wang ZL. Cell wall antigen for brucellosis diagnostic test research[J]. Chin J Anim Quarantine, 2004, 21(2): 24-26. (in Chinese)

張喜悅,吳延功,王志亮.細胞壁抗原用于布氏桿菌病診斷試驗的研究[J].中國動物檢疫, 2004, 21(2): 24-26.

[20]Li P, Luo DY, Gao YH, et al. Construction of the recombinant expression plasmid BCSP31/PVAXI ofBrucellaand evaluation of its immuno-protective effect[J]. Chin J Zoonoses, 2006, 22(6): 493-497. (in Chinese)

李鵬, 羅德炎, 高永輝, 等.布氏桿菌BCSP31 /pVAX1重組表達質粒的構建及其免疫保護效果的研究[J].中國人獸共患病學報, 2006,22(6): 493-497.

[21]Connolly JP, Comerci D, Alefantis TG, et al. Proteomic analysis ofBrucellaabortuscell envelope and identification of immunogenic candidate proteins for vaccine development[J]. Proteomics, 2006, 6(13): 3767-3680. DOI: 10.1002/pmic.200500730

[22]AlDahouk S, N?ckler K, Scholz HC, et al. Immunoproteomic characterization ofBrucellaabortus1119-3 preparations used for the serodiagnosis ofBrucellainfections[J]. Immunol Methods, 2006, 309(1-2): 34-47.

[23]Probert WS, Schrader KN, Khuong NY, et al. Real-time multiplex PCR assay for detection ofBrucellaspp.,B.abortus, andB.melitensis[J]. Chin Microbiol, 2004, 42(3): 1290-1293.DOI: 10.1128/jcm.42.3.1290-1293.2004

[24]Liang L, Leng D, Burk C, et al. Large scale immune profiling of infected humans and goats reveals differential recognition ofBrucellamelitensisantigens[J]. PLoS Negl Trop Dis, 2010, 4(5): 673. DOI: 10.1371/journal.pntd.0000673

[25]Tibor A, Decelle B, Letesson JJ. Outer membrane proteins Omp10, Omp16, and Omp19 ofBrucellaspp. are lipoproteins[J]. Infect Immun, 1999, 67(9): 4960-4962.

[26]Cloeckaert A, Tibor A, Zygmunt MS.Brucellaouter membrane lipoproteins share antigenic determinants with bacteria of the family Rhizobiaceae[J]. Clin Diagn Lab Immunol, 1999, 6(4): 627-629.

[27]Tibor A, Wansard V, Biclartz V, et al. Effect of omp10 or omp19 deletion onBrucellaabortusouter membrane properties and virulence in mice[J]. Infect Immun, 2002, 70(10): 5540-5546.DOI: 10.1128/iai.70.10.5540-5546.2002

[28]Boigegrain RA, Salhi I, Alvarez-Martinez MT, et al. Release of periplasmic proteins ofBrucellasuisupon acidic shock involves the outer membrane protein Omp25[J]. Infect Immun, 2004, 72(10): 5693-5703. DOI: 10.1128/iai.72.10.5693-5703.2004

[29]Rossetti OL, Arese AI, Boschiroli ML, et al. Cloning ofBrucellaabortusgene and characterization of expressed 26-kilodalton periplasmic protein: potential use for diagnosis[J]. J Clin Microbiol, 1996, 34(1):165-169.

[30]Cloeckaert A, Baucheron S, Vizcaino N, et al. Use of recombinant BP26 protein in serological diagnosis ofBrucellamelitensisinfection in sheep[J]. Clin Diagn Lab Immunol, 2001, 8: 772-775.

[31]Seco-Mediavilla P, Verger JM, Grayon M, et al. Epitope mapping of theBrucellamelitensisBP26 immunogenic protein: usefulness for diagnosis of sheep brucellosis[J]. Clin Diagn Lab Immunol, 2003, 10(4): 647-651. DOI: 10.1128/cdli. 10.4.647-651.2003

[32]Qiu J, Wang W, Wu J, et al. Characterization of periplasmic protein BP26 epitopes ofBrucellamelitensisreacting with murine monoclonal and sheep antibodies[J]. PLoS One, 2012, 7(3): 342-346. DOI: 10.1371/journal.pone.0034246

[33]Vizcaino N, Pasquevich K, Bruno L, et al. Cloning, nucleotide sequence, and expression of theBrucellaomp31 gene coding for an immunogenic major outer membrane protein[J]. Infect Immun, 1996, 64(9): 6537-6540.

[34]Cassataro J, Pasquevich K, Bruno L, et al. Antibody reactivity to Omp31 fromBrucellamelitensisin human and animal infections by smooth and rough brucellae[J]. Clin Diagn Lab Immunol, 2004, 11(1): 111-114. DOI: 10.1128/cdli.11.1.111-114.2004

[35]Zhang GL, Miao LG, Liu YH, et al.Brucellaabout L7/L12, OMP31 gene cloning, sequencing and analysis of immunogenicity[J]. Special Wild Econom Anim Plant Res, 2009, 4: 5-8. (in Chinese)

張廣雷, 苗利光, 劉艷環, 等.布魯氏菌 L7/L12、OMP31 基因的克隆、測序及免疫性分析[J].特產研究, 2009,4:5-8.

[36]Chen WY, Wang SJ, Wang Y, et al . Recombinant BP26 and OMP31 Proteins ofBrucellaused as the diagnostic antigen in indirect ELISA test[J]. Chin J Zoonoses, 2006, 22(6): 518-521. (in Chinese)

陳偉業, 王淑杰, 王永, 等.重組布氏桿菌BP26蛋白和OMP31蛋白作為間接ELISA診斷抗原研究[J].中國人獸共患病學報, 2006, 22 (6): 518-521.

[37]Kurar E, Splitter GA. Nucleic acid vaccination ofBrucellaabortusribosomal L7/L12 gene elicits immune response[J]. Vaccine, 1997, 15(17-18): 1851-1857. DOI: 10.1016so264-410x(97)00140-0

[38]Zeng Z, Wang Y, Zhao GY, et al. Construction of DNA vaccine carryingBrucellaabortusribosomal L7/L12 gene and evaluation of its immune response in vaccinated mice[J]. Chin J Immunol, 2004, 20(3): 208-212. (in Chinese)

曾政, 王英, 趙光宇, 等.布氏桿菌pCDNA3.1-L7/L12核酸疫苗的構建及其免疫學評價[J].免疫學雜志, 2004,20(3): 208-212.

[39]Abbady AQ, Al-Daoude A, Al-Mariri A, et al. Chaperonin groel aBrucellaimmunodominant antigen identified using Nanobody and MALDI-TOF-MStechnologies[J]. Vet Immunopathol, 2012, 146(3-4): 254-263. DOI:10.1016/j.vetimm.2012.01.015

[40]Amirmozafari N, Ghazi F, Mostafazadeh A, et al. Comparison of heat shock response inBrucellaabortusandBrucellamelitensis[J]. Pak J Biol Sci, 2008, 11: 188-194.