大櫻桃吉塞拉6號砧木組培培養(yǎng)基試驗研究

杜凱　孫訓彪

摘 要：以櫻桃砧木“吉塞拉6號”為試材，分別進行了增殖繼代和生根培養(yǎng)基篩選試驗。對“吉塞拉6號”砧木組培培養(yǎng)基激素做了多個梯度濃度對比試驗，并進行研究和總結，為大規(guī)模、快速繁育“吉塞拉6號”組培苗提供理論和實踐依據(jù)。結果表明：在本次試驗選取的培養(yǎng)基中，較適宜的增殖培養(yǎng)基為MS加1mg/L 6-BA加0.2mg/L GA3加0.2mg/L NAA，蔗糖30g/L，增殖系數(shù)可達4～5;較適宜的生根培養(yǎng)基為1/2MS加0.2mg/L NAA加0.7mg/L IBA，蔗糖20g/L，生根率達80%。

關鍵詞：櫻桃砧木;吉塞拉6號;組織培養(yǎng);培養(yǎng)基

中圖分類號：S-3

文獻標識碼：A

吉塞拉系列砧木是山東省果樹研究所最早引進的德國矮化砧，其中的“吉塞拉6號”屬半矮化砧，該砧木具有矮化、豐產(chǎn)、抗病、早實性強、土壤適應范圍廣等優(yōu)良特性。相較于同系列的“吉塞拉5號”，“吉塞拉6號”長勢更強，更適應露地栽培，“小腳”現(xiàn)象較“吉塞拉5號”輕，在黏土地上生長良好，但常規(guī)條件下該品種繁殖困難，扦插成活率低，根蘗法繁殖速度也較慢。為了加快其繁殖速度，試驗選取“吉塞拉6號”砧木為實驗材料，采用組織培養(yǎng)的繁殖方法，通過多次試驗，得出“吉塞拉6號”較適宜繼代增殖以及生根培養(yǎng)基配方，旨在為實現(xiàn)工廠化生產(chǎn)“吉塞拉6號”組培苗提供理論和實踐依據(jù)。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗材料

試驗材料為無性系甜櫻桃矮化砧木“吉塞拉6號”，采自上海交通大學農(nóng)學與生物學院苗圃。

組培所用基礎培養(yǎng)基為MS培養(yǎng)基（基礎成分為大量元素、瓊脂、微量元素、有機成分、鐵鹽成分、蔗糖等）和1/2MS培養(yǎng)基（大量元素用量為MS培養(yǎng)基1/2，其余成分與MS培養(yǎng)基一樣），所用激素為IBA、NAA、6-BA、IAA、GA3、KT、TDZ、BAP等。

1.2 試驗方法

1.2.1 莖尖剝離

選擇晴朗天氣采集外植體。選取生長健壯、無病蟲害的一年生幼嫩半木質化新生枝條進行釆集，枝條采回后及時整理修剪，去除多余葉片，選取新梢0.5～1cm備用。新梢釆回后當天處理剝離莖尖，如當天不能及時接種的，用塑料袋包好，保存在4℃左右的冰箱內(nèi)。

將采回的0.5～1cm新梢用自來水流動沖洗45～60min后，轉移至超凈工作臺上，用75%酒精浸泡消毒45s，然后用0.1%升汞溶液浸泡5～10min，最后用無菌水沖洗5～6遍，在解剖鏡下將生長點周圍葉片剝離，留下莖尖生長點約0.5～1mm大小，接種于初代誘導培養(yǎng)基上，每瓶接種1株，轉移到光照培養(yǎng)架上培養(yǎng)。

1.2.2 初代培養(yǎng)

試驗采用的初代培養(yǎng)基配方為MS加0.2mg/L IBA加0.5mg/L 6-BA。配方內(nèi)所有成分在高壓滅菌前加入，用0.1mol/L的氫氧化鈉溶液調整pH值至5.7～5.8，將培養(yǎng)基灌入培養(yǎng)瓶中，放入高壓滅菌鍋中加熱到120℃滅菌20min。

培養(yǎng)條件為光照周期為10h/14h（光培養(yǎng)10h，暗培養(yǎng)14h），光照強度為2000～2500Lx，溫度控制在24～27℃，空氣相對濕度最佳范圍為50%～60%，一般培養(yǎng)50d左右即可轉入繼代擴繁培養(yǎng)基中。

1.2.3 不同激素種類及濃度對試管苗繼代的影響

將經(jīng)過初代培養(yǎng)的外植體在超凈工作臺上切割為1cm左右的莖段，然后接種到繼代培養(yǎng)基中，試驗設Al～A7共7個種類繼代培養(yǎng)基處理（表1），每瓶接入2～3個莖段，每個處理接種20瓶。接種后置于培養(yǎng)室培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為光周期16h/8h（光培養(yǎng)16h，暗培養(yǎng)8h），光照強度控制在2000～3000Lx，培養(yǎng)溫度為24～27℃，空氣相對濕度60%～80%。分別在接種后7d、15d和25d統(tǒng)計繼代試管苗的成活、分化率情況。

繼代培養(yǎng)采用了7種不同成分的培養(yǎng)基進行試驗，具體如下。

A1：MS+0.5mg/L 6-BA+0.5mg/L KT+0.1mg/L NAA+0.01mg/L TDZ

[JP3]A2：MS+0.3mg/L 6-BA+0.1mg/L IBA+0.05mg/L TDZ[JP]

A3：MS+1.2mg/L BAP

A4：MS+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/L IBA（暗處理3～5d）

A5：MS+0.5mg/L 6-BA+0.2mg/L GA3+0.1mg/L NAA

A6：MS+1mg/L 6-BA+0.2mg/L GA3+0.2mg/L NAA

A7：MS+2mg/L 6-BA+0.2mg/L GA3+0.4mg/L NAA

1.2.4 不同激素種類及濃度對試管苗生根的影響

選擇苗高3cm左右的健壯增殖繼代苗，在超凈工作臺上由莖基部剪斷，轉接到生根培養(yǎng)基上誘導生根，每個培養(yǎng)瓶內(nèi)接入2株。試驗設生根培養(yǎng)基種類B1～B10共10個處理（表2），每處理接種20瓶。培養(yǎng)條件為光周期18h/6h（光培養(yǎng)18h，暗培養(yǎng)6h），在外植體開始生根后，逐漸增加光培養(yǎng)時間。光照強度范圍在2000～3000Lx，培養(yǎng)溫度控制在（25±1）℃，空氣相對濕度40%～70%。在接入生根培養(yǎng)基15d左右，試管苗會生長出白色的根點，接種20d后，開始統(tǒng)計新生根數(shù)量和生根率。

B1：1/2MS+0.1mg/L IBA

B2：1/2MS+0.3mg/L IBA

B3：1/2MS+0.5mg/L IBA

B4：1/2MS+0.7mg/L IBA

B5：1/2MS+0.2mg/L IBA+0.2mg/L IAA

B6：1/2MS+0.2mg/L IBA+0.4mg/L IAA

B7：1/2MS+0.2mg/L IBA+0.6mg/L IAA

B8：1/2MS+0.2mg/L NAA+0.5mg/L IBA

B9：1/2MS+0.2mg/L NAA+0.7mg/L IBA

B10：1/2MS+0.2mg/L NAA+0.9mg/L IBA

2 結果分析

2.1 不同培養(yǎng)基對外植體繼代培養(yǎng)的影響

“吉塞拉6號”外植體在不同培養(yǎng)基中的誘導分化情況不同，其中在6號培養(yǎng)基中成活率最高，為97.2%，且分化率最高，為5～6，不定芽為鮮嫩綠色，轉入增殖培養(yǎng)基后增殖速度較快;3號培養(yǎng)基成活率最低，為65%，且在1號和5號培養(yǎng)基上誘導分化的外植體，易出現(xiàn)玻璃化現(xiàn)象。因此，此次試驗中，較適宜的繼代培養(yǎng)基為MS加1mg/L 6-BA加0.2mg/L GA3加0.2mg/L NAA。

2.2 不同培養(yǎng)基對外植體生根培養(yǎng)的影響

通過實驗數(shù)據(jù)采集發(fā)現(xiàn)，試管苗在10種生根培養(yǎng)基上的生根數(shù)量集中在3～5條，其中，B2、B3培養(yǎng)基上生根最少，B10培養(yǎng)基上生根最多（表4）。但是單純從生根數(shù)量上不能直接判斷培養(yǎng)基的適用程度，植株發(fā)出的新根是否健康、是否具備良好的組織結構才是制約試管苗移栽成活的關鍵。接種在添加NAA培養(yǎng)基上的試管苗，愈傷組織產(chǎn)生的新根數(shù)量雖然多但根系脆弱，長度較短（圖3），不能形成健康良好的根系。接種在添加IBA培養(yǎng)基上的試管苗，產(chǎn)生的愈傷較少，且IBA濃度較大時根系粗大脆弱（圖4），也不能形成健康良好的根系。綜合比較發(fā)現(xiàn)，接種在B9培養(yǎng)基上的幼苗沒有產(chǎn)生過多的愈傷組織，且新根數(shù)量較多，粗細適中，側根分化多，形態(tài)較好（圖5），由此可以判斷B9培養(yǎng)基較適合“吉塞拉6號”生根培養(yǎng)。

3 小結

經(jīng)過試驗研究，以“吉塞拉6號”為試驗材料，利用植物組織培養(yǎng)技術快速繁殖時，較為適宜的培養(yǎng)基分別為增殖培養(yǎng)基：MS加1mg/L 6-BA加0.2mg/L NAA加0.2mg/L GA3，蔗糖30g/L，增殖系數(shù)可達4～5;最佳生根培養(yǎng)基為：1/2MS加0.2mg/L NAA加0.7mg/L IBA，蔗糖20g/L，生根率達80%。另外，在生根試驗中，試管苗過于幼嫩，或繼代次數(shù)過多，都不利于“吉塞拉6號”外植體生根，試驗用到的激素中，IBA濃度對試管苗生根影響較大。

參考文獻

[1]馮社章，范繼紅，紀書琴，趙印.吉塞拉的組織培養(yǎng)技術研究[J].河北農(nóng)業(yè)科學，2010，14（10）：76-79，86.

[2]夏國海，葉霞，趙冰梅，等.櫻桃組織培養(yǎng)研究進展[J].中國果樹，2003（3）：46-50.

（責任編輯 李媛媛）