維生素D受體基因多態性與晚期肺腺癌化療敏感性關系

張麗嬌 楊雁鴻 唐利娟 齊曦明 侯燕燕 周文文 劉靜波 程少會 彭勇

肺癌是目前在發達國家及我國大中城市病死率最高的惡性腫瘤。非小細胞肺癌(NSCLC)占肺癌的80%～85%，其中肺腺癌約占50%［1］。多數患者在疾病診斷時已發生遠處轉移，幾乎不可能被治愈。化療是治療晚期非小細胞肺癌(NSCLC)的主要方法，20世紀90年代末，第三代新藥吉西他濱(GEM)、紫杉醇((TAX)、多西他賽(TXT)、長春瑞濱(NVB)等相繼進入臨床，與鉑類聯合成為晚期NSCLC一線治療的標準方案。研究表明，GEM/DDP在降低疾病進展方面更具優勢［2］。但其療效受到許多因素的影響，且預先判斷患者的化療療效較為困難。對2010年10月至2013年3月，在秦皇島市第一醫院腫瘤科住院接受化療的晚期NSCLC患者52例，進行分析，探討VDR基因多態性與晚期肺腺癌化療療效的關系，報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 經病理學檢查確診的晚期肺腺癌患者(均為ⅢB期或Ⅳ期)52例，男28例，女24例;年齡30～75歲。患者均經CT掃描證實具有可測量的腫瘤病灶。化療前患者血常規肝腎功能均正常，心電圖無明顯異常，ECOG評分≤2，預期生存期≥3個月，排除有嚴重并發癥不能完成規定治療者。在化療前抽取靜脈血2 ml，提取外周血白細胞DNA，采用聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性(PCR-RFLP)方法對VDR基因Bsm1、Fok1位點的基因型進行分析。

1.2 化療方案 患者完成GP/GC方案:吉西他濱(GEM)+順鉑(DDP)/卡鉑(CBP)化療。具體用藥為:GEM 1 000 mg/m2，第1、8天;DDP 75 mg/m2，第1天，或CBP AUC等于5～6，第1天;21 d為1個周期，患者均為初治，均為單獨接受化療(排除同時放化聯合治療者)。上述方案每3～4周重復，2～3周期后按照RECIST1.0標準進行療效評價。

1.3 Bsm1、Fok1位點的基因型分析 以聚合酶鏈反應-限制性片段長度多態性(PCR-RFLP)方法分析VDR基因Bsm1、Fok1位點的多態。使用兩者公開發布的引物，采用PCR-RFLP方法對VDR基因Bsm1、Fok1位點的基因型進行檢測，Bsml位點PCR反應體系總量為25 μl，Fok1位點PCR反應體系總量為25 μl，然后分別取10 μl Bsm1、Fok1位點的PCR反應產物、基因組DNA、引物聚合酶緩沖液及0.2 μl的Bsm1、Fok1聚合酶分別于65℃恒溫箱16 h、37℃恒溫箱16 h。酶切產物于2%瓊脂糖凝膠電泳分析。質控:隨機抽取5%樣本重測，復閱瓊膠、登記數據和統計分析。

1.4 統計學分析 應用SPSS 13.0統計軟件，不同基因型患者間化療療效的差異采用χ2檢驗。當期望值＜5時用Fisher精確概率法進行計算。由Logistic回歸模型計算比值比(OR)及其95%可信區間(CI)，表示各種基因型及2個多態位點間聯合與療效的相關性，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 VDR基因Bsm1位點多態性與GP/GC方案化療敏感性的關系Bsm1位點，52例晚期NSCLC患者中，bb和Bb基因型分別為11例和41例，化療有效組Bsm1位點bb、Bb基因型分布頻率分別為8.7%、91.3%;無效組分別為5.3%、94.7%。2組基因型頻率分布差異無統計學意義(χ2=0.569，P＞0.05)。見表1。

2.2 VDR基因Fok1位點多態性與GP/GC方案化療敏感性的關系Fok1位點，52例患者中，ff、Ff、FF基因型分別為18例、22例、2例，化療有效組Fok1位點ff、Ff、FF基因型分布頻率分別為5.0%、52.0%、43.0%;無效組分別為8.1%、50.0%，41.9%。2組基因型頻率分布差異無統計學意義(χ2=0.232，P＞0.05)。見表1。

表1 VDR基因Bsm1、Fok1位點多態性與GP/GC方案化療敏感性的關系%

3 討論

VDR介導1，25(OH)2D3發揮生物效應，是類固醇激素、甲狀腺激素受體超家族成員。維生素D在正常肺組織內有抑制細胞生長、促進細胞分化的作用，由轉錄調節因子-VDR的調節。1，25(OH)2D3即活性維生素D在體內具有多方面的活性，可維持鈣、磷平衡和骨代謝。許多研究發現，1，25(OH)2D3在腫瘤的預防和治療方面也具有重要作用［3-5］。惡性腫瘤多是由環境和遺傳因素共同作用的結果，環境致癌物和(或)其代謝產物攻擊機體細胞引起DNA損傷，修復系統進行修復，以保證基因組的完整性和穩定性。當DNA損傷不能得到及時有效地修復，積累到一定程度則導致基因組不穩定性提高，引起細胞增殖和分化失控，最終導致腫瘤的發生。多項研究報道，血清中低水平的維生素D代謝活性形式1，25(OH)2D3可使結直腸癌［6，7］、乳腺癌［8，9］、前列腺癌［10］的危險性和病死率明顯升高。

基因組DNA序列中頻率＞1%的單個核苷酸的變異可導致其編碼的蛋白結構和功能發生改變，從而影響其生物學功能。在腫瘤治療領域表現為不同基因型患者對治療效果產生不同的反應［11］。晚期腫瘤患者化療仍是主要治療手段，腫瘤耐藥是化療失敗的主要原因之一，其中MRP(多藥耐藥相關蛋白)和LRP(肺耐藥蛋白)在NSCLC中高表達，可反映腫瘤細胞的多藥耐藥性。王英田等［12］關于維生素D的實驗研究證實，ATRA(全反式維甲酸)或維生素D可下調肺腺癌MRP、LRP基因的表達水平，兩藥合用有協同作用，可以提高肺腺癌的化療敏感性。國內也有相似結果報道［13，14］。維生素D不僅可以增強化療、放療和內分泌治療腫瘤的療效，甚至還能降低甚至逆轉腫瘤細胞對放化療的抵抗性。維生素D通過VDR介導發揮生物學作用，VDR基因具有多態性也影響了維生素D效應的發揮。研究基因多態性與化療敏感性的關系可為個體化治療提供依據。王小杰等［15］研究發現ERCC1 118C/T和XPD Asp312Asn、Lys751Gln多態性與晚期NSCLC患者鉑類藥物化療敏感性密切相關。韓麗芳等［16］發現在小細胞肺癌和非小細胞肺癌中，eIF3a 2554G＞A不同基因型的個體具有不同的鉑類化療療效。李文駿等［17］發現晚期非小細胞肺癌患者XRCC1基因第194位變異型(Arg/Trp或Trp/Trp)對鉑類化療敏感性優于野生型(Arg/Arg)。

結果顯示，VDR基因多態性與化療敏感性之間無關聯。

1 Subramanian J，Morgensztern D，Goodgarne B，et al.Distinctive characteristics of non—small cell lung cancer(NSCLC)in the young:a surveillance，epidemiology，and end results(SEER)analysis.J Thorac Oncol，2010，5:23-28.

2 Schiller JH，Harrington D，Belani CP，et al.Comparision of four chemotherapy regiments for advanced non-small cell lung cancer.J New Eng J Med，2002，346:92-98.

3 Bouillon R，Eelen G，Verlinden L，et al.Vitamin D and cancer.Steroid Biochem Mol Biol，2006，102:156-162.

4 Krishnan AV，Trump DL，Johnson CS，et al.The role of vitamin D in cancer prevention and treatment.Endocrinol Metab Clin North Am，2010，39:401-418.

5 Davis CD，Milner JA.Nutrigenomics，Vitamin D and cancer prevention.J Nutrigenet Nutrigenomics，2011，4:1-11.

6 Pereira F，Larriba MJ，Muoz A，et al.Vitamin D and colon cancer.Endocr Relat Cancer，2012，19:51-71.

7 Ma Y，Zhang P，Wang F，et al.Association between vitamin D and risk of colorectal cancer:a systematic review of prospective studies.J Clin Oncol.2011，29:3775-3782.

8 Colston K，Welsh J.Vitamin D and breast cancer.Elsevier Academic Press，2005，38:1663-1677.

9 Engel P，Fagherazzi G，Boutten A，et al.Serum 25(OH)vitamin D and risk of breast cancer:a nested case-control study from the French E3N cohort.Cancer Epidemiol Biomarkers Prev，2010，19，2341-2350.

10 Tretli S，Hernes E，Berg JP，et al.Association between serum 25(OH)D and death from prostate cancer.Br J Cancer，2009，100:450-454.

11 劉炬，徐兵河.單核苷酸多態性與肺癌化療療效及預后相關研究進展.中國癌癥雜志，2007，17:9769-9782.

12 王英田，牟曉燕，姜淑娟.全反式維甲酸聯合維生素D3提高肺腺癌化療敏感性的作用.山東大學報，2005，12:48-51.

13 苗華軍，李懷臣.維甲酸聯合維生素D3對非小細胞肺癌耐藥基因表達的影響及其意義的探討.泰山醫學院學報，2007，5:13-16.

14 張懷嶺，范建新，單長波.肺癌原代細胞耐藥基因的表達和化療敏感性的研究.中國現代醫生，2008，20:33-34.

15 王小杰，許崇安.切除修復交叉互補基因1和著色性干皮病基因多態性與晚期非小細胞肺癌鉑類藥物化療敏感性的關系研究.中國全科醫學，2012，15:1010-1014.

16 韓麗芳，徐瀟靜.eIF3a2554G＞A基因多態性對肺癌患者鉑類藥物化療敏感性的影響.腫瘤藥學，2011，01:40-47.

17 李文駿，向華.DNA修復基因XRCC1的194位點多態性與晚期非小細胞肺癌鉑類化療敏感性關系的Meta分析.中國全科醫學，2011，14:2417-2420.