馬 /齒 /莧 /抗 /菌 /試 /驗

黃修奇

(商丘職業技術學院畜牧獸醫系 ,河南商丘476005)

馬齒莧為馬齒莧科植物馬齒莧的全草。屬一年生肉質草本,全株光滑無毛,莖圓柱形,平臥或斜向上,由基部分枝四散,生于田間地頭、路旁及荒蕪地,在我區分布較廣,數量較大,在夏、秋兩季莖葉茂盛時采收、割取全草,洗凈泥沙,用沸水略燙后曬干備用。馬齒莧性寒味酸,入大腸、肝、脾經,具有清熱解毒、涼血止血、散血消腫作用[1]。在我區廣泛應用于人或動物的腸炎拉稀均有良好的療效。是民間常用的自采自用藥物之一。但馬齒莧對常見致病菌的抗菌作用在獸醫資料中尚未見報道。我們用馬齒莧水煎劑對常見致病菌進行了體外抑菌試驗及抗致病菌攻擊的體內抗菌試驗。報告如下。

1 材料

1.1 器材 冰箱,恒溫培養箱,接種箱,顯微鏡,90 mm培養皿,接種環,不銹鋼小管(高,內外徑分別為0.6、0.8 mm),試管,注射器等。

1.2 藥物來源 馬齒莧由本院中獸醫實驗室在當地自采備用。

1.3 菌種 金黃色葡萄球菌(編號:26113)、表皮球菌(26101)、乙型溶血性鏈球菌(32210)、大腸桿菌(44103)、痢疾桿菌(51597)、綠膿桿菌(10102),由中國藥品生物制品鑒定所提供。

1.4 培養基 肉湯,血清肉湯,營養瓊脂,血瓊脂培養基,按規定方法配制,分裝滅菌備用。

1.5 實驗動物 小鼠,雌雄各半,體重20～22 g,由本院實驗動物養殖場提供。

2 方法與結果

2.1 體外抑菌試驗

2.1.1 供試藥液制備 馬齒莧12.5 g加適量蒸餾水浸泡20 min后煮沸30 min,過濾濃縮藥液至25 mL,制成0.5 g/mL生藥液。用蒸餾水等倍稀釋再制成0.25 g/mL,0.125 g/mL生藥液置冰箱待用。2.1.2 菌液制備 從斜面培養基上分別取一接種環以上菌種的菌苔,乙型溶血性鏈球菌接種于血清肉湯培養基中,其他菌種分別接種于肉湯培養基中,在37℃培養18 h,取出,分別用血清肉湯、肉湯培養基把原菌液作1∶500稀釋成各種細菌的菌液。

2.1.3 取已制備的乙型溶血性鏈球菌菌液0.3 mL置于血瓊脂平板表面;取其他菌液各0.3 mL各置于瓊脂平板表面;用無菌圓型小玻璃棒反復均勻涂布后置37℃恒溫箱中10 min,使表面干燥。取出,在每個平板上等距離平放打有標記的不銹鋼小管3只,每只管內分別加入等量的不同濃度的馬齒莧的藥液。于37℃培養18 h。取出3個濃度的馬齒莧藥液,每菌種做6個平板[2]。結果見表1。

表1 馬齒莧的抑菌環直徑m,±SD)n=6

表1 馬齒莧的抑菌環直徑m,±SD)n=6

?

2.2 體內抗菌試驗[3]

2.2.1 供試藥液制備 黃連(由商丘市醫藥供應站提供)3.0 g加適量蒸餾水浸泡20 min后煮沸30 min,過濾濃縮30mL,即 0.1 g/mL藥液;馬齒莧9.0 g按上述方法制成0.2 g/mL、0.1 g/1mL藥液各30 mL,置冰箱供兩天用藥。

2.2.2 菌液制備 活化大腸桿菌菌種后,取典型菌落接種于肉湯培養基中,經培養后作為原菌液。用無菌生理鹽水采用連續稀釋方法并同時做活菌計數配制菌液濃度(CFU/mL)分別為6.0×105、6.0×106、6.0×107、6.0×108、6.0×109的大腸桿菌菌液5份。

2.2.3 預試 小鼠30只,隨機分5組。各組小鼠分別腹腔注射不同菌濃度的大腸桿菌菌液0.5 mL/只,觀察48 h內動物死亡情況。結果為:使小鼠死亡率達90%的大腸桿菌濃度是6.0×107CFU/mL;劑量是0.5 mL/只。

2.2.4 攻擊試驗 小鼠80只隨機機分4組,按表2的藥物及劑量分別灌胃給藥,每天3次連續3 d。第4天早晨每只小鼠腹腔注射6.0×107CFU/mlL腸桿菌菌液0.5 mL造成感染。感染后繼續灌胃給藥,每天3次,連續3 d。于感染后第7天統計各組小鼠死亡只數。做X2檢驗,結果見表2。

表2 馬齒莧抗大腸桿菌感染作用

根據表2可以看出,黃連和高劑量馬齒莧可顯著提高受大腸桿菌攻擊小鼠的存活率;低劑量馬齒莧亦可提高小鼠的存活率。

3 小結

使用體外抗菌試驗的管碟法,取量精確,單位體積中藥物濃度、菌液濃度一致,實驗結果較為準確及有規律。是研究有抑菌作用藥物的首選方法。藥物的體內抗菌試驗由于有機體因素參與,是藥物、致病菌、機體三者相互作用的結果,能更好地反映藥物的抗感染療效。本試驗研究從體外、體內抗菌作用兩個方面闡明馬齒莧水煎劑對6種常見致病菌有明顯抑菌作用;對受大腸桿菌攻擊的小鼠可提高存活率。為我們在獸醫臨床上使用馬齒莧治療某些感染性疾病提供一定的理論依據。馬齒莧全草含大量甲基腎上腺素、多量鉀鹽、二羥基苯乙胺、二羥基苯丙氨酸,尚含生物堿、香豆精類、黃酮類、強心甙和蒽醌甙等;故在體內抗菌試驗中用黃連、小檗堿[4]作陽性對照藥。這又從另一個角度闡明馬齒莧與黃連的共性與差異性-均與抗致病菌作用。但馬齒莧的作用稍遜于黃連。

[1]江蘇新醫學院中藥大辭典(上冊)[M].上海:上海人民出版社,1975:7:289.

[2]中國藥典委員會.中國藥典1995年版二部附錄[S].

[3]陳琦.中藥藥理研究方法學[M].北京:人民衛生出版社,1993:278.

[4]于船.中獸醫學(上冊)[M].北京:農業出版社,1979:153.