5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態性與妊娠期高血壓疾病的相關性研究

李俊華

河北省廊坊市婦幼保健中心婦產科，河北廊坊065000

5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶基因多態性與妊娠期高血壓疾病的相關性研究

李俊華

河北省廊坊市婦幼保健中心婦產科，河北廊坊065000

目的探究與分析5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶（MTHFR）基因多態性與妊娠期高血壓疾病的相關性。方法選取2013年6月～2014年6月河北省廊坊市婦幼保健中心收治的60例妊娠期高血壓疾病患者作為試驗組，另選擇同期無妊娠期高血壓疾病的孕婦60例作對照組。采用熒光定量PCR技術對兩組患者MTHFR C677T及A1298C基因進行檢測。結果試驗組MTHFR C677T C/T基因型頻率為38.33%，對照組MTHFR C677T C/T基因型頻率為21.67%，試驗組明顯高于對照組，差異有統計學意義（χ2=4.03，P＜0.05）。試驗組突變T等位基因頻率為24%，對照組突變T等位基因頻率為16%，試驗組顯著高于對照組，差異有統計學意義（χ2=4.26，P＜0.05）。試驗組MTHFR A1298C A/A基因型頻率為55.00%，對照組MTHFR A1298C A/A基因型頻率為60.00%，組間比較差異無統計學意義（χ2=2.71，P＞0.05）。試驗組MTHFR A1298C A/C基因型頻率為33.33%，對照組MTHFR A1298C A/C基因型頻率為26.67%，組間比較差異無統計學意義（χ2=2.66，P＞0.05）。試驗組MTHFR A1298C C/C基因型頻率為11.67%，對照組MTHFR A1298C C/C基因型頻率為13.33%，組間比較差異無統計學意義（χ2=2.26，P＞0.05）。試驗組突變A等位基因頻率為76.1%，對照組突變A等位基因為79.0%，組間比較差異無統計學意義（χ2=2.09，P＞0.05）。試驗組突變C等位基因頻率為23.9%，對照組突變C等位基因頻率為21.0%，組間比較差異無統計學意義（χ2=2.57，P＞0.05）。結論MTHFR基因A1298C多態性與妊娠期高血壓疾病的發病無明顯相關性，而MTHFR基因C677T多態性可作為誘發妊娠期高血壓疾病的危險因素，同時可將其作為評價妊娠期高血壓疾病預后情況的一項指標，應引起臨床工作者的重視。

妊娠期高血壓；亞甲基四氫葉酸還原酶；基因多態性

妊娠期高血壓疾病作為婦產科臨床上一類發病率較高的疾病，嚴重威脅了母嬰的生命健康，但其病因尚未明確，隨著分子生物學技術的不斷發展，妊娠期高血壓疾病病因的研究重點開始集中于與該病發病相關的基因上[1]。大量研究表明，高同型半胱胺酸血癥與妊娠期高血壓疾病的發生具有相關性，而5，10-亞甲基四氫葉酸還原酶（5，10-methylenetetrahydrofolate reductase，MTHFR）參與了同型半胱氨酸的代謝，其中編碼基因若出現突變，則會改變相應酶的活性，造成血中同型半胱氨酸水平受到影響[2]。因此，本研究通過分析MTHFR基因的多態性，研究其與妊娠期高血壓疾病的相關性，現將研究結果總結報道如下：

1 資料與方法

1.1 一般資料

將河北省廊坊市婦幼保健中心（以下簡稱“我院”）自2013年6月～2014年6月收治的60例妊娠期高血壓疾病患者作為試驗組，所有患者均在我院確診，診斷標準參考《婦產科學》第8版，本研究經醫院倫理委員會通過，并簽署知情同意書。患者年齡24～32歲，平均（28.6±1.5）歲，平均孕齡為（37.4±1.6）周，其中妊娠期高血壓34例，子癇前期26例。另選同時期我院無妊娠期高血壓疾病的孕婦60例為對照組，年齡25～34歲，平均（27.9±2.4）歲，平均孕齡為（36.8± 1.8）周。所有孕婦均無遺傳性疾病、血液性疾病或生殖器畸形，兩組人員年齡及孕齡等一般資料比較，差異無統計學意義（P＞0.05），具有可比性。

1.2 方法

在兩組孕婦入院之后均進行處理前抽取空腹12 h的外周靜脈血10 mL，分別置于兩個試管中，并標明1號試管及2號試管，其中1號試管采用乙二胺四乙酸二鈉抗凝后，采用過柱法對基因組DNA進行提取，2號食管則通過EDTA抗凝，進行充分搖勻后，送至離心機，3000 r/min離心10 min，將上層清液去除后，置于-80℃的超低溫冰箱中保存，分批待測。對DNA進行提取時采用Set與Column set兩部分試劑盒進行，均購自大連寶生物工程有限公司。嚴格按照試劑盒說明說進行操作，以得到純化的高純度基因組DNA。采用熒光定量PCR技術，檢測MTHFR C677T、 A1298C的基因多態性。相關儀器、試劑均購自美國ABI公司。每個反應體系10 μL：1 μL DNA模板（20 ng/μL），5 μL Taqman Universal Master Mix，0.5 μL Taqman-MGB探針，3.5 μL去離子水。反應條件：95℃預變性10 min，92℃變性15 s，60℃延伸1 min，20個循環；89℃變性15 s，60℃延伸90 s，30個循環。反應完成后，在ABI7900型熒光定量PCR儀上讀取樣品孔中的終點熒光，利用分析軟件確定各個樣本的基因分型結果。

1.3 統計學方法

采用SPSS 18.0統計學軟件進行數據分析，計數資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 兩組MTHFR基因C677T多態性比較

試驗組MTHFR C677T C/C、T/T基因型頻率與對照組比較，差異均無統計學意義（χ2=2.58、2.97，均P＞0.05）。試驗組MTHFR C677T C/T基因型頻率明顯高于對照組，差異有統計學意義（χ2=4.03，P＜0.05）。試驗組突變C等位基因頻率與對照組比較，差異無統計學意義（χ2=2.43，P＞0.05）。試驗組突變T等位基因頻率顯著高于對照組，差異有統計學意義（χ2=4.26，P＜0.05）。見表1。

表1 兩組MTHFR基因C677T多態性對比

2.2 兩組MTHFR基因A1298C多態性比較

試驗組MTHFR A1298C A/A、A/C、C/C基因型頻率與對照組比較，差異均無統計學意義（χ2=2.71、2.66、2.26，均P＞0.05）。試驗組突變A、C等位基因頻率與對照組比較，差異均無統計學意義（χ2=2.09、2.57，均P＞0.05）。A1298C雜合子聯合C667T雜合子基因型發生妊娠期高血壓疾病的危險性無明顯差異，提示A1298基因多態性與妊娠期高血壓疾病發生無密切關系。見表2。

表2 兩組MTHFR基因A1298C多態性比較

3 討論

妊娠期高血壓作為孕婦妊娠期一類特有的疾病，現在臨床上與產后出血、感染、妊娠合并心臟病一同構成造成孕產婦死亡的四大原因，為一類多器官損傷性疾病，發病率高達7%～10%，極易導致產婦及圍生兒的死亡。而對其病因及發病機制的研究一直作為產科相關專家及學者所研究的重點[3]。近年來，隨著醫療科學技術的不斷進步，已有大量研究證實，MTHF基因多態性與先兆子癇的發病具有密切的關系。而據臨床研究資料顯示，妊娠期高血壓疾病發病過程中常伴隨著不同程度上的同型半胱氨酸水平升高，而同型半胱氨酸作為半胱氨酸及蛋氨酸代謝過程中的中間產物，其本身與蛋白質的合成并無明顯關系[4]。大量研究表明，同型半胱氨酸不僅可通過誘導細胞快速進入細胞分裂期達到促進細胞增殖的目的，同時還可通過加速低密度脂蛋白的氧化過程，以促進并激活血小板的黏附和聚集，從而對血管內皮細胞造成損傷，使其機體抵抗妊娠期高血壓等疾病的能力明顯下降[5-7]。同型半胱氨酸再甲基化途徑中一類不可或缺的酶即為MTHFR基因所編碼的產物。在同型半胱氨酸再甲基化的過程中，其與甲基供體合成所需的關鍵物質為5-甲基四氫葉酸，該物質能幫助二者進一步合成四氫葉酸與蛋氨酸。而5，10-甲基四氫葉酸作為5-甲基四氫葉酸的還原前物質，完成此過程則需要MTHFR的幫助，即同型半胱氨酸甲基化成為蛋氨酸所必需的葉酸衍生物則為MTHFR[8-9]。

有專家學者曾于1994年首次克隆出MTHFR基因，之后他們采用DNA測序技術及PCR技術發現MTHFR基因內存在二十余種多態[10]。另有專家學者在研究中發現MTHFR C677T突變的雜合子或純合子與MTHFR酶熱不穩定性增加或活性下降具有密切的聯系，此兩種情況可作為誘發血同型半胱氨酸水平升高的危險因素。因此，可推測妊娠期高血壓疾病的發病與MTHFR基因多態性具有一定的關系[11]。MTHFR C677T點突變為一種臨床上較為常見的錯義突變，發生突變的基因為第677位上的胞嘧啶被胸腺嘧啶所取代，造成了纈氨酸取代丙氨酸，從而改變了MTHFR的氨基酸結構，影響了MTHFR酶的活性，最為顯著的表現為MTHFR酶活性下降，這就使得同型半胱氨酸無法正常完成向蛋氨酸的轉化，造成血同型半胱氨酸的含量明顯升高[12]。而A1298C點突變作為MTHFR基因在臨床上另一類較為常見的突變類型，是指位于MTHFR基因上的第7外顯子C端調節區域上的腺苷酸被胞嘧啶所取代，造成了谷氨酸被丙氨酸所取代[13]。另外，由于該位置的突變對MboⅡ內切酶的識別位點造成破壞，這就使得酶的活性明顯降低，因此，MTHFR基因A1298C突變也可作為導致血中同型半胱氨酸水平升高的危險因素[14]。

本次研究結果顯示，試驗組MTHFR C677T C/T基因型頻率明顯高于對照組，但A1298C雜合子聯合C667T雜合子基因型發生妊娠期高血壓疾病的危險性無明顯差異。該結果說明，MTHFR基因是誘發出現妊娠期高血壓疾病的常見因素，不同位置的點突變具有特異性，但并非都能引起疾病的發作[15]。通過本次試驗研究可知，MTHFR基因C677T多態性可作為誘發妊娠期高血壓疾病的危險因素，同時可將其作為評價妊娠期高血壓疾病預后情況的一項指標，臨床工作者應據此判斷妊娠期高血壓疾病的發病風險，并采取有效的治療措施進行應對[16]。

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Correlation between MTHFR gene polymorphism and hypertensive disorders in pregnancy

LI Junhua
Department of Obstetrics and Gynecology,Maternal and Child Health Center of Langfang City,Hebei Province,Langfang065000,China

Objective To explore and analyze the correlation between 5,10-methylenetetrahydrofolate reductase(MTHFR)gene polymorphism and hypertensive disorders in pregnancy.Methods 60 cases with gestational hypertension from June 2013 to June 2014 in Maternal and Child Health Center of Langfang City were as test group,while 60 cases of pregnant women with gestational hypertension in same period were as control group.MTHFR C677T polymorphism and A1298C gene of patients in two groups were tested by PCR-RFLP.Results In the test group MTHFR C677T C/T genotype frequencies was 38.33%,which in the control group was 21.67%;the test group was significantly higher than that in the control group,the difference was statistically significant(χ2=4.03,P＜0.05).T allele frequency of the mutation in the test group was 24%;T allele mutation in the control group was 16%,the test group was significantly higher than this in the control group,the difference was statistically significant(χ2=4.26,P＜0.05).MTHFR A1298C A/A genotype frequencies in the test group was 55.00%,and in the control group was 60.00%,there was no significant difference between the two groups(χ2=2.71,P＞0.05).MTHFR A1298C A/C genotype frequency in the test group was 33.33%,and that in the control group was 26.67%,there was no significant difference between the two groups(χ2=2.66,P＞0.05). MTHFR A1298C C/C genotype frequencies in the test group was 11.67%,and 13.33%in the control group,there was no significant difference between the two groups(χ2=2.26,P＞0.05).Mutant allele frequency in the test group of was 76.1%,in the control group was 79.0%,there was no significant difference between the two groups(χ2=2.09,P＞0.05).C mutant allele frequency in the test group was 23.9%,21.0%in the control group,there was no significant difference between the two groups(χ2=2.57,P＞0.05).Conclusion There is significant correlation between gene A1298C MTHFR polymorphism and the incidence of gestational hypertension;and MTHFR gene C677T polymorphism can be a risk factor to pregnancy-induced hypertension,so it can be used as an indicator of evaluation gestational hypertension prognosis,which should be of great importance to clinicians.

Gestational hypertension;5,10-methylenetetrahydrofolate reductase;Gene polymorphism

R714.246

A

1673-7210（2014）10（b）-0011-04

2014-07-10本文編輯：任念）

河北省廊坊市科學技術研究與發展計劃項目（編號2013013010C）。